组织块法培养大鼠肺微血管内皮细胞的综合鉴定 被引量：22

1

作者 徐顺贵 吴国明 +3 位作者 徐智 冯起甲 王关嵩 张健鹏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期39-42,共4页

目的为组织块法培养的大鼠肺微血管内皮细胞(rat pu lmonary m icrovascu lar endothelial cells,RPMVECs)建立合理可靠的多指标综合鉴定方案。方法采用外周肺组织贴块法培养RPMVECs,抽取组织块进行切片观察,以大鼠肺动脉平滑肌细胞和... 目的为组织块法培养的大鼠肺微血管内皮细胞(rat pu lmonary m icrovascu lar endothelial cells,RPMVECs)建立合理可靠的多指标综合鉴定方案。方法采用外周肺组织贴块法培养RPMVECs,抽取组织块进行切片观察,以大鼠肺动脉平滑肌细胞和人脐静脉内皮细胞为对照,对培养细胞进行CD34、植物凝集素BSI、Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学鉴定,通过光镜和透射电镜观察细胞形态和超微结构。结果组织切片显示组织块源于外周肺组织,CD34免疫细胞化学染色阳性,植物凝集素BSI结合试验阳性,而Ⅷ因子相关抗原染色阴性,透射电镜未见W e ibel-Palade小体。结论Ⅷ因子相关抗原和W e ibel-Palade小体并非RPMVECs鉴定的理想指标,联合应用外周肺组织切片、CD34和植物凝集素BSI三指标为组织块法培养的RPMVECs提供了一个简单易行、合理、可靠的综合鉴定方案。 展开更多

关键词 肺微血管内皮细胞 细胞鉴定 大鼠

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大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法的改进及细胞鉴定 被引量：17

2

作者 李颖川 江伟 +2 位作者 周明 薛瑛 李亚春 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1440-1443,共4页

目的改进大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)的原代培养方法,并对培养细胞进行相关鉴定。方法从动物选择、取材、循环灌注、植块贴壁等方面对体外分离PMVECs的原代培养方法进行改良。原代培养细胞经传代、冻存与复苏,倒置显微镜观察培养细胞... 目的改进大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)的原代培养方法,并对培养细胞进行相关鉴定。方法从动物选择、取材、循环灌注、植块贴壁等方面对体外分离PMVECs的原代培养方法进行改良。原代培养细胞经传代、冻存与复苏,倒置显微镜观察培养细胞的形态学特征和生长特性,免疫组织化学染色检测血管内皮细胞表面标志物Ⅷ因子相关抗原和CD31表达,荧光显微镜观察细胞与PMVECs的特异性结合物植物凝集素BSI的结合情况(FITC-BSI结合试验)。结果倒置显微镜下,培养细胞呈多边形或梭形,融合为单层后呈典型的鹅卵石或铺路石样镶嵌生长并有接触抑制现象;免疫组织化学染色显示,细胞CD31和Ⅷ因子表达阳性;FITC-BSI结合试验呈阳性结果。结论改进的原代细胞培养方法操作简单、可重复性好且成功率高;综合鉴定表明培养细胞形态学及生物学特性与PMVECs一致。 展开更多

关键词 肺微血管内皮细胞 细胞培养 细胞鉴定

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模拟失重对肺微血管内皮细胞凋亡的影响 被引量：8

3

作者 章烨 袁明 +2 位作者 李婷 张莹 刘长庭 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第1期93-94,共2页

目的:观察回转模拟失重对肺微血管内皮细胞凋亡的影响。方法:组织块贴壁法原代培养肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC),采用回转器模拟失重效应。PMVEC回转培养48h,同时设1g对照静置培养。采用Hoechst3... 目的:观察回转模拟失重对肺微血管内皮细胞凋亡的影响。方法:组织块贴壁法原代培养肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC),采用回转器模拟失重效应。PMVEC回转培养48h,同时设1g对照静置培养。采用Hoechst33258染色,荧光显微镜观细胞凋亡的形态学改变;采用Annexin V-FITC试剂盒对细胞染色,以流式细胞仪进行细胞凋亡检测。结果:回转模拟失重48h后,Hoechst33258染色结果发现细胞凋亡明显增加;流式细胞仪定量结果表明回转48h PMVEC的凋亡率为19.85%,显著高于同步对照组PMVEC的凋亡率13.72%(19.85%±1.29%vs13.72%±1.15%,P<0.01)。结论:48h回转模拟失重可明显诱导PMVEC发生凋亡。 展开更多

关键词 模拟失重 肺微血管内皮细胞 凋亡

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大鼠肺微血管内皮细胞通透系数检测的方法 被引量：7

4

作者 尤青海 高磊 +1 位作者 岳扬 孙耕耘 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期547-550,共4页

目的探讨肺微血管内皮细胞（PMVEc）通透系数检测的实验方法。方法分别在transwell小室和聚碳酸酯纤维膜上构建大鼠PMVEC单层模型，用电阻抗仪和倒置显微镜观察到细胞单层汇合后，分别应用电阻抗仪监测跨内皮细胞电阻（TER），用异硫氰... 目的探讨肺微血管内皮细胞（PMVEc）通透系数检测的实验方法。方法分别在transwell小室和聚碳酸酯纤维膜上构建大鼠PMVEC单层模型，用电阻抗仪和倒置显微镜观察到细胞单层汇合后，分别应用电阻抗仪监测跨内皮细胞电阻（TER），用异硫氰酸荧光素（FITC）-葡聚糖法检测通透系数（Pd），用Hanks平衡液法检测通透系数（助）；同时观察脂多糖（LPS）刺激0．5h和2h后的PMVEC通透性变化，以测量值与其相应静息状态值的比值表示。结果倒置显微镜下观察到细胞接种后3d时已汇合成单层时TER值为（39．45±3．96）Q·cm2，Pd值为（8．52±0．50）×10cm／s；随细胞接种时间增加，TER值稳定升高，接种后4d达高峰[（49．84±3．93）Q·cm2]。静息状态下汇合成PMVEC单层的TER值、Pd值和却值分别为（49．84±3．93）Ω·cm2、（6．15±0．63）×10-6cm／s和（6．80±0．62）×10^-7cm·s-1·cm H2O-1。与未刺激组比较，10mg／LLPS刺激PMVEC0．5h和2h后，TER法测定的通透性均下降（0．87±0．03、0．45±0．04比1．OO±0．08），Pd法和功法测定的通透性均增加（Pd：1．33±0．11、2．43±0．14比1．00±0.10；Lp：1．30±0．07、2．38±0．15比1．00±0．11），差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论TER法、Pd法和坳法均能有效检测PMVEC通透系数，倒置显微镜联合TER和Pd法所测值更加精确，从而为体外研究急性肺损伤发病机制提供实验方法。 展开更多

关键词 肺微血管内皮细胞 通透性 大鼠 TRANSWELL 电阻抗

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肺微血管内皮细胞的分离及其在单核细胞粘附中的应用 被引量：4

5

作者 王海杰 李鸿帅 谭玉珍 《微循环学杂志》 2004年第4期10-12,F003,共4页

目的 :研究肺微血管内皮细胞的分离和纯化方法 ,探讨内皮细胞的透明质酸对于单核细胞粘附的作用。方法 :用两次植块法分离狗和大鼠的肺微血管内皮细胞。通过粘附实验 ,观察单核细胞在内皮细胞单层上的粘附。结果 :第二次植块 3天后 ,内... 目的 :研究肺微血管内皮细胞的分离和纯化方法 ,探讨内皮细胞的透明质酸对于单核细胞粘附的作用。方法 :用两次植块法分离狗和大鼠的肺微血管内皮细胞。通过粘附实验 ,观察单核细胞在内皮细胞单层上的粘附。结果 :第二次植块 3天后 ,内皮细胞自肺组织块边缘迁出 ,2周后内皮细胞生长形成单层。在扫描电镜下 ,内皮细胞表面有许多微绒毛和小凹。用透明质酸酶消化内皮细胞表面的透明质酸后 ,粘附的单核细胞数显著减少。结论 :两次植块法是一种理想的肺微血管内皮细胞的分离和纯化方法。 展开更多

关键词 肺微血管 内皮细胞 分离 单核细胞

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肺纤方提取物干预肺纤维化模型大鼠微血管内皮细胞黏附及游走迁移作用研究 被引量：5

6

作者 刘哲 张晓梅 +3 位作者 秦慧慧 张历元 陈良 黄炎芳 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期4042-4044,共3页

目的:通过观察肺纤方干预肺间质纤维化大鼠肺微血管内皮细胞体外培养的影响,探讨肺纤方抗肺间质纤维化微血管内皮细胞黏附及游走的机制。方法:从肺纤维化模型组大鼠分离培养肺微血管内皮细胞。将其等量分为空白对照组,氯沙坦(10μg/m L)... 目的:通过观察肺纤方干预肺间质纤维化大鼠肺微血管内皮细胞体外培养的影响,探讨肺纤方抗肺间质纤维化微血管内皮细胞黏附及游走的机制。方法:从肺纤维化模型组大鼠分离培养肺微血管内皮细胞。将其等量分为空白对照组,氯沙坦(10μg/m L)组,泼尼松(5μg/m L)组,肺纤方大、中、小剂量(100、60、20μg/m L)组。WST-1法检测肺微血管内皮细胞的生长黏附率。Transwell法检测肺微血管内皮细胞的迁移细胞进行计数。结果:与空白对照组、泼尼松组比较,肺纤方大、中剂量和氯沙坦可以显著抑制肺微血管内皮细胞的黏附率,作用48h尤为明显(P<0.01)。与空白对照组、泼尼松组比较,肺纤方大、中剂量和氯沙坦可抑制内皮细胞的迁移(P<0.01)。结论:肺纤方可以显著抑制肺间质纤维化大鼠肺微血管内皮细胞的黏附和游走迁移,从而具有抗肺间质纤维化作用。 展开更多

关键词 肺纤方提取物 肺微血管内皮细胞 细胞培养 黏附 游走迁移

原文传递

Ezrin蛋白在肿瘤坏死因子致大鼠肺微血管内皮细胞炎性损伤中表达及Rac 1信号通路的影响 被引量：5

7

作者 唐思慧 岳扬 孙耕耘 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期785-788,共4页

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）中Ezrin蛋白及其磷酸化（p-Ezrin）表达的变化，以及小G蛋白家族成员Rac 1对其的影响。方法将体外培养的SD大鼠PMVEC分别进行TNF-α刺激时效实验和Rac 1通路干预... 目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）中Ezrin蛋白及其磷酸化（p-Ezrin）表达的变化，以及小G蛋白家族成员Rac 1对其的影响。方法将体外培养的SD大鼠PMVEC分别进行TNF-α刺激时效实验和Rac 1通路干预实验。①时效实验：以10μg/L TNF-α分别刺激PMVEC 0、0.25、0.5、1、3、6、12、24 h后，采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测Ezrin及p-Ezrin的表达。②Rac 1通路干预实验：以200μmol/L Rac 1特异性抑制剂NSC 23766与PMVEC预孵育0.5 h再加入10μg/L TNF-α继续孵育，3 h后检测p-Ezrin表达，同时设空白对照组（1%胎牛血清）及TNF-α或NSC 23766单独刺激组。结果①PMVEC中仅低量表达Ezrin，且TNF-α刺激对Ezrin无明显影响。TNF-α刺激PMVEC 0 h时p-Ezrin蛋白表达〔即p-Ezrin/Ezrin（灰度值）〕为0.21±0.03，刺激0.25 h时p-Ezrin蛋白表达即开始升高（0.53±0.19），3 h达高峰（1.68±0.30），然后逐渐下降，24 h时仍高于基础水平（0.87±0.18），组间比较差异有统计学意义（F＝62.200，P＝0.000），说明TNF-α可呈时间依赖性增加Ezrin磷酸化。②与空白对照组比较，TNF-α和NSC 23766单独刺激组均能诱导p-Ezrin表达增加（TNF-α组：0.92±0.12比0.68±0.16， t＝-2.864，P＝0.020；NSC 23766组：1.33±0.24比0.68±0.16，t＝-5.429，P＝0.000）；NSC 23766与TNF-α共同孵育可使p-Ezrin表达较TNF-α单独刺激组进一步增加（2.14±0.18比0.92±0.12，t＝-14.670，P＝0.000），各组间差异有统计学意义（F＝73.810，P＝0.000）。结论 Ezrin磷酸化表达增加参与了TNF-α诱导的PMVEC损伤，抑制Rac 1信号通路可通过上调Ezrin磷酸化表达参与TNF-α对PMVEC的致伤效应。 展开更多

关键词 EZRIN蛋白 肿瘤坏死因子-α 肺微血管内皮细胞 RAC 1信号通路

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电针足三里对脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞的影响 被引量：5

8

作者 张敏 杜朝晖 王焱林 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2019年第5期447-451,共5页

目的探讨电针足三里对脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cell, PMVEC)的保护作用及可能机制。方法 108只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为6组(每组18只):假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(LPS组)、电针非... 目的探讨电针足三里对脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cell, PMVEC)的保护作用及可能机制。方法 108只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为6组(每组18只):假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(LPS组)、电针非经非穴组(non-EA组)、电针足三里组(EA组)、迷走神经切断组(VGX组)、迷走神经切断加电针足三里组(VGX/EA组)。各组造模后3、6、9h经腹主动脉采血0.8 ml,ELISA法检测血浆TNF-α;取肺组织,Real-time PCR法检测Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate, SSeCKS) mRNA和E-选择素mRNA水平。 6h后,取肺组织,H-600型透射电镜观察PMVEC超微结构。结果与Sham组比较,其余各组大鼠血浆TNF-α及肺组织SSeCKS mRNA和E-选择素mRNA水平显著升高(P<0.05),non-EA组上述指标与LPS组比较,差异无统计学意义(P>0.05);EA组上述指标水平在造模后3、6、9h较LPS组均降低(P<0.05);迷走神经切断后给予电针足三里,EA组上述指标水平在造模后3、6、9h与VGX组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。电镜下可见LPS组大鼠PMVEC凋亡坏死明显,EA组大鼠PMVEC病理损伤明显减轻。结论电针足三里对脓毒症大鼠PMVEC有明显的保护作用,其保护作用依赖于迷走神经完整性,可能是通过激活胆碱能抗炎通路(cholinergic anti-inflammatory pathway, CAP)实现的。 展开更多

关键词 足三里 电针 脓毒症 肺微血管内皮细胞

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模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响 被引量：5

9

作者 郭英华 郭娜 +3 位作者 苏龙翔 李天志 王俊锋 刘长庭 《军医进修学院学报》 CAS 2012年第9期950-952,共3页

目的研究模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响,为防御失重所导致的不良影响寻找新的治疗靶点。方法采用回转器模拟失重效应干预肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC),回转培养72h,同时设1g对照静... 目的研究模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响,为防御失重所导致的不良影响寻找新的治疗靶点。方法采用回转器模拟失重效应干预肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC),回转培养72h,同时设1g对照静置培养组。之后用免疫荧光染色标记细胞骨架肌动蛋白F-actin,并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的改变;光镜下观察单核细胞(THP-1)与PMVEC的黏附作用,并计算黏附率;绿色荧光标记的腺病毒感染细胞,荧光显微镜下观察,并在流式细胞仪检测感染效率。结果回转72h PMVEC胞质内F-actin的表达减少,微丝的拉丝感和方向感明显弱化,排列松散,细胞伸展不好,体积变小;模拟失重抑制PMVEC对单核细胞的黏附,导致黏附率(37.69%±6.5% vs 51.25%±8.2%,P<0.05)下降;模拟失重组的腺病毒感染率更高(84.55%±5.31%vs 66.32%±5.74%,P<0.05),更容易受到腺病毒感染。结论模拟失重可以损伤PMVECs的屏障功能。 展开更多

关键词 模拟微重力 肺微血管内皮细胞 细胞骨架 黏附功能

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模拟失重对肺微血管内皮细胞F-actin的影响 被引量：5

10

作者 章烨 袁明 +2 位作者 李婷 张莹 刘长庭 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第1期91-92,共2页

目的:观察回转模拟失重对肺微血管内皮细胞纤维肌动蛋白(F-actin)的影响,探讨其在失重环境下的损伤机制。方法:组织块贴壁法原代培养肺微血管内皮细胞,采用回转器模拟失重效应。PMVEC回转培养24h、48h和72h,同时设1g同步对照静置培养。... 目的:观察回转模拟失重对肺微血管内皮细胞纤维肌动蛋白(F-actin)的影响,探讨其在失重环境下的损伤机制。方法:组织块贴壁法原代培养肺微血管内皮细胞,采用回转器模拟失重效应。PMVEC回转培养24h、48h和72h,同时设1g同步对照静置培养。采用免疫荧光技术标记PMVEC内的F-actin,以激光共聚焦显微镜观察采集荧光图像。结果:与同步对照相比,不同时间回转的PMVEC微丝骨架均发生明显破坏,且这种破坏随着回转模拟失重时间的延长而加重。结论:模拟失重可破坏PMVEC内F-actin,导致PMVEC损伤。 展开更多

关键词 模拟失重 肺微血管内皮细胞 细胞骨架

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小窝蛋白-1在脂多糖致肺微血管内皮细胞炎性损伤中的作用探讨 被引量：4

11

作者 尤青海 张丹 +2 位作者 孙耕耘 岳扬 徐秀娟 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期706-710,共5页

目的探讨脂多糖（LPS）所致大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVEC）炎性损伤中小窝蛋白-1（Cav-1）的作用机制。方法将体外培养的RPMVEC，分别进行LPS刺激时效实验和蛋白激酶A（PKA）通路干预实验。①时效实验：以10μg／mL LPS分别刺激0、1、3... 目的探讨脂多糖（LPS）所致大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVEC）炎性损伤中小窝蛋白-1（Cav-1）的作用机制。方法将体外培养的RPMVEC，分别进行LPS刺激时效实验和蛋白激酶A（PKA）通路干预实验。①时效实验：以10μg／mL LPS分别刺激0、1、3、6、12、24h后进行细胞单层通透性（伊文思蓝-白蛋白法）和Cav-1蛋白表达[蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）]检测；并于LPS刺激0、10、30、60、90、120min检测细胞磷酸化小窝蛋白-1（p-Cav-1）表达（Western blotting）。②干预实验：以10μmol／L蛋白激酶A特异抑制剂（PKI）与RPMVEC预孵育30min后再加入10μg／mL LPS继续孵育，30min后检测p-Cav-1表达。3h后检测细胞单层通透性及Cav-1蛋白表达；设未刺激组和LPS或PKI单独刺激组为对照。结果①LPS刺激RPMVEC后1h Cav-1蛋白表达（积分A值）即开始上升（2．97±0．07），3h达峰值（3．77±0．37），之后逐渐下降，但至24h时（1．45±0．18）仍明显高于LPS刺激0h时（1．12±0．08），组间比较差异有统计学意义（F=178．047，P=0．000）；LPS可呈时问依赖性（0、1、3、6、12、24h）增加RPMVEC通透性（A值），变化趋势与Cav-1蛋白表达-致，分别为（99．67±4.32）％、（118．17±2．32）％、（159．00±2．61）％、（141．17±2．64）％、（120．17±2．79）％、（108．83±2．04）％，组间比较差异有统计学意义（F=345．869，P=0．000）。LPS亦可呈时间依赖性增加Car-1磷酸化：10min时P—Car-1蛋白表达（积分A值）即开始升高（2．41±0．11），30min达高峰（2．83±0．10），然后逐渐下降，120min时（1．04±0．04）恢复到基础水平（1．03±0．04），组间比较差异有统计学意义（F=519．417，P=O．000）。~PKI与LPS预孵育可使Cav-1表达（积分A值：5．07±0．22比3．81±0．23，P〈0．01）及p-Cav-1表达（积分A值：3．93±0．23比2．77±0．10，P〈0．01）较LP 展开更多

关键词 小窝蛋白-1 脂多糖 肺微血管内皮细胞 细胞单层通透性 蛋白激酶A 大鼠

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重组Shh因子对海水浸泡肺微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究 被引量：3

12

作者 杨昱 钱桂生 +2 位作者 王关嵩 邓朝霞 周长喜 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第13期1268-1271,共4页

目的观察不同剂量重组Shh(recombinant sonic hedgehog,rShh)因子对海水浸泡肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cell,PMVEC)的促进增殖及抗凋亡作用。方法组织块法原代培养大鼠PMVEC,建立大鼠PMVEC海水浸泡模型,加... 目的观察不同剂量重组Shh(recombinant sonic hedgehog,rShh)因子对海水浸泡肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cell,PMVEC)的促进增殖及抗凋亡作用。方法组织块法原代培养大鼠PMVEC,建立大鼠PMVEC海水浸泡模型,加入不同剂量重组Shh因子,采用TUNEL法检测PMVEC凋亡率。采用2,3-苯基溴化四唑(MTT)染色计数法测定细胞增殖活性。结果海水浸泡可导致PMVEC损伤,表现为PMVEC细胞增殖受到抑制以及凋亡发生率增加。重组Shh能降低海水所致PMVEC增殖抑制率和其凋亡率,在实验剂量范围内,其促增殖和抗凋亡作用呈剂量依赖性。结论重组Shh可促进海水浸泡PMVEC增殖和抑制其凋亡。 展开更多

关键词 SHH 海水 肺微血管内皮细胞 急性肺损伤

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红景天苷对烟雾暴露大鼠肺微血管内皮细胞活性及细胞核因子-κB/Bcl-2表达水平的影响 被引量：3

13

作者 黄会 曾玉兰 +3 位作者 廖珍慧 施玉琴 黄露 周月泉 《解剖学杂志》 CAS 2021年第6期473-477,490,共6页

目的:探究红景天苷对烟雾暴露大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)活性及细胞核因子-κB(NF-κB)/Bcl-2表达水平的影响。方法:将大鼠随机分为空白组,烟雾组,红景天苷低、中、高剂量组。体外培养大鼠PMVEC,MTT法检测各组PMVEC活性,流式细胞仪检... 目的:探究红景天苷对烟雾暴露大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)活性及细胞核因子-κB(NF-κB)/Bcl-2表达水平的影响。方法:将大鼠随机分为空白组,烟雾组,红景天苷低、中、高剂量组。体外培养大鼠PMVEC,MTT法检测各组PMVEC活性,流式细胞仪检测各组PMVEC凋亡率,H-E染色观察各组大鼠肺病理组织学改变,免疫印迹法检测各组大鼠肺组织NF-κB和Bcl-2蛋白表达。结果:H-E染色结果显示,和空白组比较,烟雾组大鼠可见支气管壁和肺泡结构的破坏,支气管管腔结构变窄,炎症细胞浸润,有黏性液分泌物,肺泡腔变大、壁薄;肺泡间隔变窄或中断,还可见肺大泡;红景天苷低、高剂量组的肺组织结构出现明显改善,且红景天苷高剂量组的肺组织改善最为明显。MTT结果显示,烟雾组大鼠24 h和48 h的PMVEC活性明显低于空白组;和烟雾组比较,红景天苷低、中、高剂量组大鼠的PMVEC活性显著提升,且红景天苷高剂量组大鼠PMVEC活性升高最为显著。细胞凋亡结果显示,和空白组比较,烟雾组PMVEC凋亡率显著增加,红景天苷低、中、高剂量组PMVEC凋亡率显著降低,且随着红景天苷剂量的增加,凋亡率随之降低。和空白组大鼠比较,烟雾组NF-κB蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达降低,红景天苷低、中、高剂量组NF-κB蛋白表达显著低于烟雾组,Bcl-2蛋白表达显著升高,且红景天苷高剂量组的效果最为显著。结论:红景天苷可抑制烟雾暴露大鼠PMVEC的凋亡,其作用机制可能与抑制NF-κB的活性、促进Bcl-2表达有关。 展开更多

关键词 红景天苷 烟雾暴露 肺微血管内皮细胞 细胞活性 细胞核因子-ΚB B淋巴细胞瘤-2

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CTRP9抑制低氧环境下肺微血管内皮细胞IL-6和TNF-α表达的研究 被引量：3

14

作者 金巧艳 曾明华 +4 位作者 谭延振 苏慧 易蔚 张海锋 孙新 《心脏杂志》 CAS 2017年第4期399-404,共6页

目的研究低氧环境下C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9(C1q/TNF-related protein 9,CTRP9)对肺微血管内皮细胞(Pulmonary microvascular endothelial cell,PMVEC)中白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为常... 目的研究低氧环境下C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9(C1q/TNF-related protein 9,CTRP9)对肺微血管内皮细胞(Pulmonary microvascular endothelial cell,PMVEC)中白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组,采用低压低氧法建立大鼠低氧性肺动脉高压(Hypoxic pulmonary hypertension,HPH)模型,28 d后检测各组大鼠血流动力学、右心室肥厚指标和组织病理学改变;用RT-PCR检测HPH大鼠肺组织中IL-6、TNF-αmRNA表达水平;用ELISA法检测二者在血清中的变化。分离培养健康雄性SD大鼠的PMVEC,分别在常氧(210 ml/L O_2、50 ml/L CO_2)、低氧(50 ml/L O_2、50 ml/L CO_2)、或者低氧+CTRP9(5μg/ml)环境中孵育48 h。结果与常氧组相比,低氧组大鼠右心室收缩压和右心室肥厚指标增加(P<0.05),肺小动脉管壁增厚,显示造模成功;肺组织中IL-6、TNF-αmRNA水平上调(P<0.05),两种炎症因子在血清中的含量增加(P<0.05)。与常氧组相比,低氧处理使两种炎症因子IL-6、TNF-α在PMVEC中mRNA水平及在细胞培养上清中的含量均增加(P<0.05);在低氧的同时给予CTRP9孵育时,与单纯低氧组相比,两种炎症因子在PMVEC中mRNA水平及在细胞培养上清中的含量均降低(P<0.05)。结论大鼠发生HPH时,炎症因子IL-6、TNF-α表达升高。而CTRP9对低氧条件下PMVEC表达和分泌IL-6及TNF-α具有抑制作用,进而有望预防或延缓HPH的发生发展。 展开更多

关键词 C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9 低氧性肺动脉高压 肺微血管内皮细胞 白介素-6 肿瘤坏死因子-α

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LPS直接诱导对肺微血管内皮细胞核因子κB活化的影响 被引量：3

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作者 顾大勇 马布仁 +3 位作者 王晓华 陈莉 杨季云 曾祥元 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期310-313,共4页

目的　探讨内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞 (pulmonarymicrovascularen dothelialcells ,PMVECs)核因子κB(NF κB)活化的影响。方法　 10 0ng/mlLPS刺激PMVECs 0、0 5、1、2、4、6、8h或 1、10、1... 目的　探讨内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞 (pulmonarymicrovascularen dothelialcells ,PMVECs)核因子κB(NF κB)活化的影响。方法　 10 0ng/mlLPS刺激PMVECs 0、0 5、1、2、4、6、8h或 1、10、10 0ng/mlLPS刺激 1h后 ,凝胶电泳迁移率分析 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)检测NF κB的活化 ,免疫细胞化学(ICC)观察其亚基p5 0、p65的核转位。并通过加入NF κB活化阻断剂TPCK观察其对 10 0ng/mlLPS刺激 1h诱导活化的影响。结果　LPS的直接刺激能迅速活化NF κB ,诱导其p5 0、p65亚基核转位 ,1h即达到高峰 ,且呈剂量依赖关系 ,后逐渐下降。TPCK能显著抑制其活化 (P <0 0 1)。结论　LPS的直接刺激能诱导NF κB的活化 ,这可能是LPS诱导炎症反应的一个重要环节。 展开更多

关键词 LPS 肺微血管内皮细胞 NF-ΚB

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TNF-α对肺微血管内皮细胞ERM蛋白表达的研究 被引量：3

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作者 赵妍 孙耕耘 尤青海 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期612-616,共5页

目的观察肿瘤坏死因子-a（TNF-a）对大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）表达埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白（ezrin-radixin-moesin，ERM）及磷酸化ERM蛋白（p-ERM）的影响，并初步探讨Rho激酶（ROCK）与ERM蛋白磷酸化的关系。方法体外培养大鼠PM... 目的观察肿瘤坏死因子-a（TNF-a）对大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）表达埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白（ezrin-radixin-moesin，ERM）及磷酸化ERM蛋白（p-ERM）的影响，并初步探讨Rho激酶（ROCK）与ERM蛋白磷酸化的关系。方法体外培养大鼠PMVEC，随机（随机数字法）分为TNF-a量效组（0、0．1、1、10μg／L TNF—a与PMVEC孵育60min）、TNF-a时效组（10μg／LTNF-a分别与PMVEC孵育0、15、30、60、90、120、180min）和ROCK抑制剂（Y-27632）干预组：分别以10μg/L的TNF-a,和30μmol／L Y-27632＋10μg／LTNF-a与PMVEC孵育60min。Western印迹检测ERM蛋白及p-ERM相对表达量。采用SPSS 16．0软件进行分析，多组变量间比较采用单因素方差分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果Western印迹检测到大鼠PMVEC均表达ERM蛋白和p-ERM，量效组p-ERM表达量随TNF-a浓度（0、0．1、1、10μg/L）增加逐渐升高，分别为0．648±0．102、0．728±0．082、0．926±0．121、1．245±0．134（均P=0．000）。时效组p-ERM相对表达量于15min开始上升（0．777±0．151），90min达高峰（1．295±0．176），之后渐下降，120min（0．802±0．139），180min仍维持较高水平（0．769±0．128），分别与未刺激0 min组（0．631±0．123）比较，P=0．004，0．000，0．001，0．016。ROCK抑制剂预处理PMVEC后再给予TNF-a．刺激，p-ERM相对表达量（0．634±0．112）较单独TNF-a刺激组（0．875±0．164）显著减少（P=0．002），而较单独ROCK抑制剂组（0．661±0．108）和未处理组（0．654±0．125）差异无统计学意义（分别为P=0．973，P=0．900）。结论TNF-a诱导大鼠PMVEC中的ERM蛋白磷酸化表达增加，ROCK参与其磷酸化调控。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子-Α 肺微血管内皮细胞 埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白 炎症 急性呼 吸窘迫综合征 Rho相关激酶

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间充质干细胞对脂多糖刺激下肺微血管内皮细胞增殖及周期的影响 被引量：2

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作者 陈旭昕 汪文婧 +3 位作者 胥颉 唐俭 孟激光 韩志海 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第10期1577-1580,共4页

目的探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSC)对脂多糖(LPS)刺激下肺微血管内皮细胞(PVEC增殖及细胞周期的影响。方法实验分组:A组(正常PVEC);B组(PVEC+LPS),PVEC仅予LPS刺激;C组(PVEC/BM-MSC+LPS),将BM-MSC与PVEC共培养于Transwell体系过夜后予LP... 目的探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSC)对脂多糖(LPS)刺激下肺微血管内皮细胞(PVEC增殖及细胞周期的影响。方法实验分组:A组(正常PVEC);B组(PVEC+LPS),PVEC仅予LPS刺激;C组(PVEC/BM-MSC+LPS),将BM-MSC与PVEC共培养于Transwell体系过夜后予LPS刺激;D组(PVEC/BMMSC+PBS),同上BM-MSC与PVEC共培养后,用PBS替代LPS。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测PVEC活性、流式细胞仪测PVEC周期及qRT-PCR测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)及P27 mRNA水平。结果与A组相比,B组中PVEC增殖受抑,出现周期阻滞,且CyclinD1及CDK4受抑,P27上调(P <0.05),与BM-MSC共培养可逆转上述效应(P <0.05)。无LPS情况下,BM-MSC共培养对PVEC的增殖及细胞周期均有正性调控作用(P <0.05)。结论 BM-MSC对PVEC有保护作用,促进PVEC增殖、抵制LPS诱导的周期阻滞及调控细胞周期相关蛋白表达是可能的分子机制。 展开更多

关键词 急性肺损伤 急性呼吸窘迫综合征 肺微血管内皮细胞 间充质干细胞 细胞周期

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蛋白激酶C参与脂多糖诱导肺微血管内皮细胞VEGF表达 被引量：2

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作者 葛海燕 冯健 +1 位作者 贲素琴 倪松石 《南通大学学报（医学版）》 2008年第4期248-250,共3页

目的:观察蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在内毒素/脂多糖(lipopolysacchride,LPS)诱导血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达上调中可能发挥的作用。方法:以肺微血管内皮细胞为研究对象,用PKC抑制剂预... 目的:观察蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在内毒素/脂多糖(lipopolysacchride,LPS)诱导血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达上调中可能发挥的作用。方法:以肺微血管内皮细胞为研究对象,用PKC抑制剂预处理内皮细胞,以RT-PCR检测VEGF mRNA水平的表达变化;Western Blot检测其蛋白质水平的表达变化。结果:(1)VEGF mRNA的表达水平与LPS呈剂量和时间依赖的关系;(2)PKC抑制剂calphostin c预处理内皮细胞能显著抑制LPS诱导VEGF mRNA和蛋白的表达。结论:LPS可能通过PKC信号通路而诱导肺微血管内皮细胞VEGF表达上调。 展开更多

关键词 脂多糖 蛋白激酶C 肺血管内皮细胞 血管内皮细胞生长因子

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RhoA—Rock信号通路抑制剂对缺氧人肺微血管内皮细胞丝状肌动蛋白细胞骨架的影响 被引量：1

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作者 张费通 崔其亮 莫镜 《中国小儿急救医学》 CAS 2012年第1期67-70,共4页

目的用RhoA—Rock信号通路抑制剂探讨肺出血时肺微血管内皮细胞的调控因素。方法人肺微血管内皮细胞常规培养，分为4组：对照组、抑制剂组、缺氧组和抑制剂缺氧组。异硫氰酸荧光素一鬼笔环肽与胞浆内丝状肌动蛋白（filamentous actin，F... 目的用RhoA—Rock信号通路抑制剂探讨肺出血时肺微血管内皮细胞的调控因素。方法人肺微血管内皮细胞常规培养，分为4组：对照组、抑制剂组、缺氧组和抑制剂缺氧组。异硫氰酸荧光素一鬼笔环肽与胞浆内丝状肌动蛋白（filamentous actin，F—actin）结合而发出红色荧光，共聚焦显微镜扫描观察F—actin的变化情况并记录相应荧光值。结果细胞缺氧组1h、12h和24h的F—actin平均荧光强度分别为对照组的（64．3±5．5）％、（60．3±4．2）％和（47．8±4．6）％；抑制剂缺氧组1h、12h和24h分别为对照组的（66．2±3．2）％、（67．1±6．2）％和（72．5±6．1）％。细胞缺氧组缺氧1h后，F—actin平均荧光强度降低[（64．3±5．5）％]，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），至缺氧24h，F—actin含量已下降至对照组的（47．8±4．6）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。抑制剂缺氧组缺氧1h后，F—actin平均荧光强度较缺氧组1h有所升高，为对照组的（66．2±3．2）％，抑制剂组缺氧24h后F．actin平均荧光强度为对照组的（72．5±6．1）％，与缺氧组缺氧24h相比差异有统计学意义（P〈0．05）。而抑制剂组不经缺氧的F—actin平均荧光强度与对照组相比无显著变化（P〉0．05）。缺氧后细胞皮质状结构消失，应力纤维排列紊乱，随着缺氧时间的延长，F—actin逐渐解聚断裂。用RhoA-Rock信号通路抑制剂预处理细胞后再缺氧，核周围F—actin所形成的皮质状结构重新出现，细胞浆内应力纤维的排列和分布趋向于规律，F—actin断裂减少。结论RhoA—Rock信号通路在肺微血管内皮细胞缺氧过程中介导了F—actin的损伤，用RhoA-Rock信号通路抑制剂干预可以为新生儿肺出血的治疗研究提供一个新的方向。 展开更多

关键词 肺出血 肺微血管内皮细胞 丝状肌动蛋白 RhoA-Rock信号通路 婴儿 新生

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迷走神经电刺激保护失血性休克肺微血管内皮细胞 被引量：2

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作者 孙晓晨 杜朝晖 +4 位作者 张颖 郑媛媛 王志力 张雪艳 杨晓 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2016年第3期399-402,共4页

目的:观察电刺激迷走神经对失血性休克大鼠肺微血管内皮细胞的影响。方法:成年雄性SD大鼠30只,体质量240-260g,随机分为3组:假休克组(SS组)、失血性休克组(HS组)、迷走神经电刺激组(STM组),每组10只。Wiggers改良法制备失血性休克模型,... 目的:观察电刺激迷走神经对失血性休克大鼠肺微血管内皮细胞的影响。方法:成年雄性SD大鼠30只,体质量240-260g,随机分为3组:假休克组(SS组)、失血性休克组(HS组)、迷走神经电刺激组(STM组),每组10只。Wiggers改良法制备失血性休克模型,模型制备成功3h后留取血和肺组织标本。光镜下观察肺组织形态学变化,电镜下观察肺微血管内皮细胞形态改变,Western印记法测Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)蛋白表达、ELISA法测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。结果:HS组肺组织和内皮细胞形态较SS组遭到明显破坏,STM组较HS组破坏减轻,接近SS组;HS组SSeCKS表达和TNF-α浓度比SS组明显升高(P<0.05),STM组可减少SSeCKS表达和TNF-α浓度(P<0.05)。结论:电刺激迷走神经对失血性休克大鼠肺微血管内皮细胞可产生保护作用,其机制可能与激活胆碱能抗炎通路拮抗全身炎性反应有关。 展开更多

关键词 迷走神经电刺激 肺微血管内皮细胞 失血性休克 Src抑制的蛋白激酶C的底物

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