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甘蔗褐锈病菌单管巢式PCR检测体系的建立 被引量:3
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作者 吴伟怀 刘宝慧 +4 位作者 鹿鹏鹏 梁艳琼 贺春萍 李锐 易克贤 《中国糖料》 2022年第3期1-7,共7页
由黑顶柄锈菌(Puccinia melanocephala Sydow)引起的甘蔗褐锈病是甘蔗生产中较为严重的叶部病害之一。建立该病原菌的高效检测与特异性鉴定技术体系,对于该病害的监测、预警以及及时采取必要的防治措施均具有重要的意义。为此,本文基于... 由黑顶柄锈菌(Puccinia melanocephala Sydow)引起的甘蔗褐锈病是甘蔗生产中较为严重的叶部病害之一。建立该病原菌的高效检测与特异性鉴定技术体系,对于该病害的监测、预警以及及时采取必要的防治措施均具有重要的意义。为此,本文基于甘蔗褐锈病菌ITS序列保守区域位点设计了该病原菌的单管巢式PCR引物对,对外内引物退火温度、外内引物浓度比两个方面进行筛选与优化,并对所建立的单管巢式PCR检测体系的特异性和灵敏度进行了分析。结果表明,所设计的甘蔗褐锈病菌单管巢式PCR外引物PmF1/R1、内引物PmF2/R2的退火温度分别为63℃与52℃,以及外引物PmF1/R1与内引物PmF2/R2最佳终浓度比例为0.5 pmol/L∶0.5μmol/L时,单管巢氏PCR检测体系较佳。所建立的甘蔗褐锈病菌单管巢式PCR检测体系仅从含有甘蔗褐锈病菌DNA模板中检测出预期大小的特异性条带,而从含甘蔗黄锈病菌、咖啡驼孢锈菌、鸡蛋花鞘锈菌、葡萄层锈病菌、甘蔗黑穗病菌、橡胶炭疽病菌、咖啡褐斑病菌、稻瘟病菌、剑麻茎腐病菌的DNA中并未扩增出任何条带。通过模板梯度稀释法证实,所建立的单管巢氏PCR检测体系的最低检测限为10 fg/μL,是普通PCR灵敏度的1000倍。田间19份疑似病样单管巢式PCR检测结果,有18份样品DNA中含有甘蔗褐锈病菌。本检测方法可以用于甘蔗褐锈病病原菌的快速诊断及其病害监测,为该病害预测、预报提供技术支持。 展开更多
关键词 甘蔗 褐锈病 黑顶柄锈菌 单管巢式PCR 检测
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Pathogen Identification and Phylogenetic Analysis of Sugarcane Rust in Plateau Areas at Low Latitudes
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作者 Xiaoyan WANG Wenfeng LI +6 位作者 Jiarong PU Rongyue ZHANG Jinan PU Hongli SHAN Yinhu LI Zhaogui YANG Yingkun HUANG 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2022年第1期32-36,共5页
[Objectives]This study was conducted to clarify the species,occurrence and distribution characteristics of sugarcane rust pathogens in low-latitude plateau sugarcane rust areas of Yunnan Province and the phylogenetic ... [Objectives]This study was conducted to clarify the species,occurrence and distribution characteristics of sugarcane rust pathogens in low-latitude plateau sugarcane rust areas of Yunnan Province and the phylogenetic relationship between the pathogens and that between them and other rust fungi of the genus Puccinia.[Methods]Fifty seven sugarcane rust samples collected from the sugarcane areas of Baoshan,Lincang,Menghai,Menglian,Ximeng,Lancang and Wenshan in Yunnan were subjected to molecular identification.[Results]The four sugarcane rust samples from Haiyin1 hao in Menghai,Yunnan Province belonged to orange rust of sugarcane,and the pathogen was Puccinia kuehnii Butler.;and other 53 samples of sugarcane rust belonged to brown rust of sugarcane,and the pathogen was Puccinia melanocephala Syd.et P.Syd.The rDNA sequences of other rust fungi from the genus Puccinia were downloaded from GenBank and used for the construction of an NJ tree for systematic evolution analysis together with the sequences obtained in this study.The results showed that the four P.kuehnii sequences obtained in this study were clustered with Puccinia polysora(GenBank accession number:GU058024)into one group,and they were close genetically;the 53 P.melanocephala sequences were clustered with P.nakanishikii(GenBank accession number:GU058002),P.rufipes(GenBank accession number:AJ296545),Aecidium deutziae(GenBank accession number:KU309317)and P.coronata(GenBank accession number:DQ354526)into one group,and they had a close genetic relationship;and the genetic relationship of the two species of sugarcane rust fungi identified in this study was relatively distant.[Conclusions]This study provides a scientific basis for sugarcane rust epidemic prediction,disease resistance breeding,and precise prevention and control. 展开更多
关键词 Sugarcane rust Pathogen identification puccinia melanocephala Macroropyxis fulva Phylogenetic evolution
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甘蔗褐锈病研究进展 被引量:3
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作者 高小宁 刘睿 齐永文 《中国植保导刊》 北大核心 2019年第11期26-30,共5页
由黑头柄锈菌(Puccinia melanocephala)引起的甘蔗褐锈病在世界甘蔗种植区广泛分布,也是我国蔗区发生最普遍、为害最严重的叶部病害。本文从甘蔗褐锈病的分布与为害、病原菌特征与生物学特性、病菌侵染过程、病害发生规律、寄主抗病性... 由黑头柄锈菌(Puccinia melanocephala)引起的甘蔗褐锈病在世界甘蔗种植区广泛分布,也是我国蔗区发生最普遍、为害最严重的叶部病害。本文从甘蔗褐锈病的分布与为害、病原菌特征与生物学特性、病菌侵染过程、病害发生规律、寄主抗病性以及防治等方面进行了综述,旨在为病害的有效防控提供依据。 展开更多
关键词 甘蔗褐锈病 黑头柄锈菌 发生规律 抗病性
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低纬高原甘蔗锈病病原菌鉴定及系统进化分析
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作者 王晓燕 李文凤 +4 位作者 张荣跃 单红丽 李婕 李银煳 黄应昆 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第6期1333-1339,共7页
【目的】明确低纬高原云南蔗区甘蔗锈病病原种类、发生分布特征、病原间及其与柄锈菌属其他锈菌的系统进化关系。【方法】通过症状观察,病原形态特征观察和分子检测对采自云南不同蔗区的57份锈病样品进行病原鉴定;并构建NJ树分析甘蔗锈... 【目的】明确低纬高原云南蔗区甘蔗锈病病原种类、发生分布特征、病原间及其与柄锈菌属其他锈菌的系统进化关系。【方法】通过症状观察,病原形态特征观察和分子检测对采自云南不同蔗区的57份锈病样品进行病原鉴定;并构建NJ树分析甘蔗锈病病原与其他柄锈菌的系统进化关系。【结果】云南勐海海引1号4份锈病样品的夏孢子堆桔黄色,夏孢子梨形,栗褐色或金黄色,表面有刺,壁顶端加厚10μm,大小为(25~50)μm×(16~35)μm,具4~5个芽孔。核苷酸序列与已报道的屈恩柄锈菌(GU058021)同源性在99.9%以上,表明这些锈病样品是由屈恩柄锈菌引起的甘蔗黄锈病;其余53份锈病样品的夏孢子堆棕红色,夏孢子球形,棕色至深棕色,表面布满小刺,壁四周均匀加厚,大小为(20~40)μm×(13~25)μm,芽孔多4个;侧丝无色,匙形。核苷酸序列与已报道的黑顶柄锈菌(GU058001)同源性在99.8%以上,表明这些锈病样品都是由黑顶柄锈菌引起的甘蔗褐锈病。系统进化树显示,文章获得的4条屈恩柄锈菌与Puccinia polysora(GU058024)聚为1组,遗传关系近;53条黑顶柄锈菌与P.nakanishikii(GU058002)、P.rufipes(AJ296545)、Aecidium deutziae(KU309317)和P.coronata(DQ354526)等柄锈菌属锈菌聚为1组,遗传关系近;而2种甘蔗锈病菌的遗传关系相对较远。【结论】在低纬高原云南蔗区首次发现引起甘蔗黄锈病的屈恩柄锈菌,并证实引起褐锈病的黑顶柄锈菌是低纬高原甘蔗锈病的主要病原。 展开更多
关键词 甘蔗锈病 病原鉴定 黑顶柄锈菌 屈恩柄锈菌 系统进化
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甘蔗叶片响应褐锈病菌(Puccinia melanocephala)侵染的转录组分析 被引量:2
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作者 高小宁 吴自林 +2 位作者 黄咏虹 刘睿 齐永文 《中国农学通报》 2021年第24期102-109,共8页
旨在从转录水平分析甘蔗叶片响应褐锈病菌侵染的基因表达特征,为进一步研究甘蔗抗褐锈病的分子机理提供基础资料。本研究采用高通量测序技术Illumina Hiseq 2500对健康以及被褐锈病菌侵染的甘蔗叶片进行转录组测序,利用生物信息学方法... 旨在从转录水平分析甘蔗叶片响应褐锈病菌侵染的基因表达特征,为进一步研究甘蔗抗褐锈病的分子机理提供基础资料。本研究采用高通量测序技术Illumina Hiseq 2500对健康以及被褐锈病菌侵染的甘蔗叶片进行转录组测序,利用生物信息学方法对差异表达基因进行功能注释和分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对5个差异基因的相对表达量进行了验证。转录组数据分析共鉴定出差异表达基因4716个,其中上调表达2979个,下调表达1737个。GO注释结果显示,差异表达基因主要聚集在细胞过程、生物过程、催化活性等生理生化过程。KEGG富集分析发现,1919个差异表达基因被注释到114个通路中,其中苯丙烷生物合成、类黄酮生物合成、谷胱甘肽代谢等植物抵御生物胁迫有关的代谢途径的相关基因显著上调表达。qRT-PCR验证5个上调表达基因结果与转录组测序结果的表达趋势一致。 展开更多
关键词 甘蔗 褐锈菌 亲和互作 高通量测序 转录组 差异表达基因
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甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法的建立 被引量:1
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作者 汪涵 吴伟怀 +7 位作者 杨旭光 杨先锋 李锐 郑金龙 黄兴 梁艳琼 贺春萍 易克贤 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2334-2339,共6页
为建立甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法,本研究利用真菌DNA内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4扩增甘蔗黑顶柄锈菌DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,获得序列于NCBI网站进行比对分析,并于该序列多态性丰富区域设计了2对引物PM2F/R、PM3F/... 为建立甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法,本研究利用真菌DNA内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4扩增甘蔗黑顶柄锈菌DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,获得序列于NCBI网站进行比对分析,并于该序列多态性丰富区域设计了2对引物PM2F/R、PM3F/R。通过对同寄主不同病原菌、以及不同属的锈菌DNA进行PCR检测以验证引物的特异性。结果表明,在优化的单一PCR反应体系与程序条件下,2对引物均仅能从甘蔗黑顶柄锈菌中扩增出约474 bp和363 bp的特异条带,而从其它真菌DNA中均扩增不出任何条带。进一步将引物PM2F/R作为第一轮扩增引物、PM3F/R作为第二轮扩增引物进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达0.001 ng/μL,较常规PCR提高100倍。由此表明,依据本研究所设计的2对引物而建立的快速、灵敏、准确的甘蔗黑顶柄锈菌的检测技术,对病原菌的早期诊断、快速检测及病害流行学研究具有重要意义。 展开更多
关键词 甘蔗褐锈病 黑顶柄锈菌 巢式PCR分子检测
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