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PuC和PuC_2的分子结构与势能函数 被引量:4
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作者 李赣 孙颖 +2 位作者 汪小琳 高涛 朱正和 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期356-360,共5页
采用密度泛函B3LYP方法和相对论有效原子实理论模型优化出PuC和PuC2分子稳定构型,其电子状态分别为X5Σ-和X5A2.PuC2分子为C2v构型,其∠CPuC=147.67°、平衡核间距Re=0.22819nm、离解能De=5.543eV,并计算出谐振动频率:ν1=61.736cm-... 采用密度泛函B3LYP方法和相对论有效原子实理论模型优化出PuC和PuC2分子稳定构型,其电子状态分别为X5Σ-和X5A2.PuC2分子为C2v构型,其∠CPuC=147.67°、平衡核间距Re=0.22819nm、离解能De=5.543eV,并计算出谐振动频率:ν1=61.736cm-1、ν2=229.894cm-1、ν3=305.582cm-1.在此基础上,运用多体项展式理论方法,导出了基态PuC2分子的分析势能函数,该势能面准确地再现了PuC2分子的稳定结构,并根据势能面等值图讨论了PuC+C反应和Pu+C2反应的势能面静态特征. 展开更多
关键词 分子结构 势能函数 相对论有效原子实势 puc puc2 密度泛函 碳化钚 核燃料
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人骨形态发生蛋白2(BMP-2)在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:4
2
作者 梁东春 左爱军 +2 位作者 王宝利 郭刚 张镜宇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期61-65,共5页
以重组质粒pUC-BMP2为模板PCR扩增人BMP-2成熟肽编码序列,将该序列克隆入pGEM-T载体进行DNA序列分析后亚克隆入分泌型毕赤酵母表达载体pPIC9K中。重组质粒oPIC9K-BMP2经BelⅡ酶切后回收线性化片段,聚乙二醇法转染毕赤酵母茵株GS115。PC... 以重组质粒pUC-BMP2为模板PCR扩增人BMP-2成熟肽编码序列,将该序列克隆入pGEM-T载体进行DNA序列分析后亚克隆入分泌型毕赤酵母表达载体pPIC9K中。重组质粒oPIC9K-BMP2经BelⅡ酶切后回收线性化片段,聚乙二醇法转染毕赤酵母茵株GS115。PCR筛选整合有人BMP-2基因的酵母细胞重组子,以甲醇进行诱导表达,于酵母细胞培养基中可检测到rhBMP-2。体外培养条件下,所得rhBMP-2可增加2T3小鼠成骨细胞内碱性磷酸酶活性;体内实验.rhBMP-2冻干粉可于小鼠骨四头肌肌袋中诱导软骨细胞群产生。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 骨形态发生蛋白 rhBMP-2 DNA序列分析 碱性磷酸酶活性 酵母表达载体 体外培养条件 重组质粒 PCR扩增 聚乙二醇法 细胞培养基 编码序列 酵母菌株 酵母细胞 诱导表达 体内实验 成熟肽 puc 分泌型 亚克隆 T载体
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PuC分子的结构与垂直电离势的理论计算 被引量:2
3
作者 庞向东 《四川师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2003年第1期62-64,共3页
在Pu的相对论有效原子实势近似和C的6 311G 全电子基函数下,用密度泛函B3LYP方法计算得到PuC分子基态X5∑-,PuC+分子离子基态X8∑-和PuC2+分子离子基态X9∑-的结构与势能函数、力常数与光谱数据,并算出PuC分子的垂直电离势.
关键词 垂直电离势 计算 puc 势能函数 密度涵函法 分子结构 全电子基函数
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钢管与钢板桩组合支护结构的有限元分析 被引量:4
4
作者 李雪峰 余振锡 王鹏 《四川建材》 2019年第10期60-60,63,共2页
钢管与钢板桩组合支护结构(PUC)作为一种新型组合支护结构,理论较少,为了突出它相较于传统钢板桩和钢管桩的优点,采用ABAQUS有限元软件对三种支护结构进行建模分析,结果显示:PUC支护结构承载能力较单一钢板桩结构有很大的提升,且并没有... 钢管与钢板桩组合支护结构(PUC)作为一种新型组合支护结构,理论较少,为了突出它相较于传统钢板桩和钢管桩的优点,采用ABAQUS有限元软件对三种支护结构进行建模分析,结果显示:PUC支护结构承载能力较单一钢板桩结构有很大的提升,且并没有低于钢管很多。 展开更多
关键词 puc 钢板桩 钢管桩 数值分析
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A single mutation in the PBC loop of VP2 is involved in the in vitro replication of infectious bursal disease virus 被引量:3
5
作者 Xiaole Qi Xiang Gao +10 位作者 Zhen Lu Lizhou Zhang Yongqiang Wang Li Gao Yulong Gao Kai Li Honglei Gao Changjun Liu Hongyu Cui Yanping Zhanga Xiaomei Wang 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2016年第7期717-723,共7页
To test whether amino acid mutations in the PBC and PHI loops of VP2 are involved in the replication and virulence of infectious bursal disease virus(IBDV), a pair of viruses, namely the moderately virulent IBDV(rG x-... To test whether amino acid mutations in the PBC and PHI loops of VP2 are involved in the replication and virulence of infectious bursal disease virus(IBDV), a pair of viruses, namely the moderately virulent IBDV(rG x-F9VP2) and the attenuated strain(rGt), were used. Residue mutations A222P(P_(BC)) and S330R(PHI), selected by sequence comparison, were introduced individually into r Gx-F9VP2 by using a reverse genetics system. In addition, the reverse mutation of either P222 A or R330 S was introduced into r Gt. The four modified viruses were then rescued and evaluated in vitro(CEF cells) and in vivo(SPF chickens). Results showed that A222 P elevated the replication efficiency of rG x-F9VP2 while P222 A reduced that of rG t in CEF cells. A mutation at residue 330 did not alter IBDV replication. In addition, animal experiments showed that a single mutation at either residue 222 or 330 did not significantly influence the virulence of IBDV. In conclusion, residue 222 in PBC of VP2 is involved in the replication efficiency of IBDV in vitro but does not affect its virulence in vivo, further facilitating our understanding of the gene-function of IBDV. 展开更多
关键词 infectious bursal disease virus (IBDV) VP2 puc REPLICATION
原文传递
^(99m)Tc(O)(PNA-dp)辐射切割质粒DNA的性能研究
6
作者 宋宏涛 魏洪源 +2 位作者 杨玉青 王关全 罗顺忠 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2011年第4期214-218,共5页
肽核酸(PNA)分子具有特异基因靶向亲和性,用放射性核素标记后,可达到肿瘤靶向和对非靶组织最小损伤的目的,对于基因水平的肿瘤治疗具有十分重要的意义。本工作探索了99mTc标记T基PNA单体所得配合物99mTc(O)(PNA-dp)对常用基因靶向DNA的... 肽核酸(PNA)分子具有特异基因靶向亲和性,用放射性核素标记后,可达到肿瘤靶向和对非靶组织最小损伤的目的,对于基因水平的肿瘤治疗具有十分重要的意义。本工作探索了99mTc标记T基PNA单体所得配合物99mTc(O)(PNA-dp)对常用基因靶向DNA的切割效果。结果表明,配合物在室温密封放置6 h,放化纯度大于90%,具有很好的稳定性;无溶血现象,可注射;在1 h即对质粒DNA表现出明显的切割效果,其机理应为99mTc的射线辐射与PNA-dp的协同作用。 展开更多
关键词 99mTc 肽核酸 DNA切割 puc 019 DNA
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领航马来电商 开创财富蓝海——专访马来西亚PUC控股集团董事总经理兼行政总裁张嘉洲
7
作者 艾渺 《中国对外贸易》 2019年第6期32-34,共3页
人们常说,兴趣是成功的最大动力。出生在马来西亚的张嘉洲从小就对逻辑、数字等非常敏感,对计算机编程更是有着浓厚的兴趣。查阅他的简历,从数码影像处理到电子支付,再到金融科技,无论是自己创业,还是进行投资,张嘉洲对科技行业的热度... 人们常说,兴趣是成功的最大动力。出生在马来西亚的张嘉洲从小就对逻辑、数字等非常敏感,对计算机编程更是有着浓厚的兴趣。查阅他的简历,从数码影像处理到电子支付,再到金融科技,无论是自己创业,还是进行投资,张嘉洲对科技行业的热度始终不减。如今,他作为马来西亚PUC控股集团的董事总经理兼行政总裁,正引领该科技集团成为国家科技行业的领头羊。近日,张嘉洲在北京接受本刊记者专访,与我们分享他独特的创业经历。 展开更多
关键词 马来西亚 控股集团 puc 总经理
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水性涂饰粘合剂与PUC系列产品的开发(续)
8
作者 吴兴赤 刘敏 《中国皮革》 CAS 北大核心 2002年第15期44-45,共2页
关键词 水性涂饰粘合剂 puc 开发 皮革
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整车智联产品PUC评价方法
9
作者 段岷星 童琳 《信息系统工程》 2021年第9期106-108,共3页
论文提出了整车智联产品的一种新的评价方法——PUC(Performance,Usability,Consistency)评价法。同时论文还对该方法定义、评价方法和步骤以及评价要点进行介绍,可适用于整车智联产品的用户主客观评价。
关键词 puc 智联产品 主客观评价
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PED COM教育综合体
10
《世界建筑导报》 2012年第3期116-119,共4页
PUC数育综合体项目位于湖景台,将三个现有初中高中整合到—个新的校区.学生总人披为1000.它是—个非盈利性的特许学校机构.在洛杉矾地区一共有8所学校.PUC的目标是在洛杉矶和圣费尔南多谷地区大大提高他们学生的大学入学率。
关键词 综合体 教育 非盈利性 puc 洛杉矶 学生 学校 谷地
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生物转化法生产茶氨酸的重组大肠杆菌的构建 被引量:13
11
作者 郭亮 沈微 +1 位作者 王正祥 诸葛健 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期41-45,共5页
为构建生物转化法生产茶氨酸的基因工程菌,作者分析了影响大肠杆菌高效表达γ 谷氨酰基转肽酶的几个主要因素.将大肠杆菌 JM109 的 ggt基因接入两种不同的质粒中后,转化大肠杆菌JM109,并在一定的条件下进行表达.通过对比 E coli JM109 ... 为构建生物转化法生产茶氨酸的基因工程菌,作者分析了影响大肠杆菌高效表达γ 谷氨酰基转肽酶的几个主要因素.将大肠杆菌 JM109 的 ggt基因接入两种不同的质粒中后,转化大肠杆菌JM109,并在一定的条件下进行表达.通过对比 E coli JM109 和转化子的γ 谷氨酰基转肽酶表达活性的不同,探讨了ggt基因的拷贝数、启动子的强弱等几个因素对γ 谷氨酰基转肽酶高效表达的影响.实验表明,将含有自身信号肽和启动子的 E coli JM109 的 ggt基因接入高拷贝的质粒pUC18中,仅提高 ggt基因的拷贝数不能增加γ 谷氨酰基转肽酶的表达量.将含有自身信号肽但不含有自身启动子的E coli JM109的ggt基因接入具有 tac启动子的表达载体 pEtac中,发现在强启动子tac的控制下,γ 谷氨酰基转肽酶的表达量提高至出发菌株的 2 3 倍.将构建的工程菌用于生物转化法生成茶氨酸,底物转化率相应地提高至出发菌株的1 7倍. 展开更多
关键词 生物转化法 重组大肠杆菌 茶氨酸 构建 E.coli 高效表达 基因工程菌 ggt puc18 作者分析 表达活性 表达载体 强启动子 拷贝数 信号肽 表达量 tac 肽酶 酰基 接入 转化子 转化率 质粒 菌株 底物
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高韧性聚氨酯水泥复合材料力学性能研究 被引量:12
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作者 张可心 孙全胜 《新型建筑材料》 北大核心 2018年第1期126-128,共3页
为研究用于桥梁结构加固的高韧性聚氨酯水泥复合材料力学性能,对不同密度的聚氨酯水泥复合材料进行了抗折和抗压强度试验,针对高密度聚氨酯水泥材料进行了钢筋拉拔试验、与混凝土轴向拉伸粘结试验和抗折粘结试验。结果表明:随着聚氨酯... 为研究用于桥梁结构加固的高韧性聚氨酯水泥复合材料力学性能,对不同密度的聚氨酯水泥复合材料进行了抗折和抗压强度试验,针对高密度聚氨酯水泥材料进行了钢筋拉拔试验、与混凝土轴向拉伸粘结试验和抗折粘结试验。结果表明:随着聚氨酯水泥复合材料密度的增加,抗折和抗压强度均提高,聚氨酯水泥复合材料最大密度约1500 kg/m^3,该密度下的抗折和抗压强度分别为32.6~34.3 MPa和55.0~56.4 MPa,与钢筋的握裹强度为13.4 MPa,远高于普通混凝土握裹力;与混凝土的轴向拉伸粘结强度和抗折粘结强度分别为5.44、4.66 MPa,破坏模式均为混凝土破坏,说明聚氨酯水泥材料具有较高的粘结性能。 展开更多
关键词 聚氨酯水泥材料(puc) 抗折强度 抗压强度:握裹强度 粘结强度
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新型少铬高分子金属配合物鞣剂的研究(I)聚氨酯-铬配合物鞣剂的合成与结构 被引量:9
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作者 毕红 章于川 阮德礼 《中国皮革》 CAS 北大核心 2001年第9期14-19,21,共7页
本文设计并合成了一类带双羧基侧基的线性聚氨酯低聚物链。在水溶液中 ,聚氨酯低聚物链上的羧基被碱中和为羧酸根阴离子 ,加入三价铬盐后 ,- COO-与 Cr3+以配位键结合形成聚氨酯 -铬配合物 ,该配合物加入复配的乳化剂后放至均质器中搅... 本文设计并合成了一类带双羧基侧基的线性聚氨酯低聚物链。在水溶液中 ,聚氨酯低聚物链上的羧基被碱中和为羧酸根阴离子 ,加入三价铬盐后 ,- COO-与 Cr3+以配位键结合形成聚氨酯 -铬配合物 ,该配合物加入复配的乳化剂后放至均质器中搅拌 ,调节其 p H值 ,制备得均匀、稳定的细乳液。每种聚氨酯配体与其含铬配合物粉末样品都经过 FTIR,13 C- NMR和 DSC等手段表征 ,表征结果证明 :聚氨酯配体链上的 - COO-与水中 Cr3+之间存在羟基桥式配位。每个聚氨酯配体链的羧基含量及 [- COO-/ Cr3+]的摩尔比通过滴定分析法测得。根据以上分析结果推断 ,在室温下 ,p H=4 .5的水溶液中 ,Cr3+足量的条件下 ,此聚氨酯配体与 Cr3+以链内桥式配位为主 ,其它配位方式为辅。每个 Cr3+离子除了与 - COO-配位之外 ,还有两个以上的空位被水分子占据 ,在鞣皮时 ,充水皮胶原肽链上的 - COO-将取代这些占据空位的水分子 ,使得聚氨酯分子链通过与铬的配位对生皮胶原起“缝合”作用 ,即具有鞣皮效果。经此鞣液鞣过的生皮收缩温度提高了 2 0~ 2 5℃ ,成革增厚效果显著。尤其重要的是 ,该鞣剂中的铬以配位键的形式与高分子上具有配位功能的侧基紧密结合 ,从而使鞣液中的游离铬离子含量低于 0 .0 1g/ l,实现了含铬废水的达标排放。此为? 展开更多
关键词 少铬鞣剂 聚氨酯铬配合物 制革 聚氨酯 合成 结构 DSC
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Tracing method study of bacterial translocation in vivo 被引量:9
14
作者 Fu WL Xiao GX +2 位作者 Yue XL Hua C Lei MP 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2000年第1期153-155,共3页
INTRODUCTIONEndogenesis infection plays an important role innosocomial infection.By studying progress ofbacteria translocation from intestinal tract,theconcept of gut-origin infection has been acceptedgradually.Becaus... INTRODUCTIONEndogenesis infection plays an important role innosocomial infection.By studying progress ofbacteria translocation from intestinal tract,theconcept of gut-origin infection has been acceptedgradually.Because of no ideal tracing method,there were some controversies.In order to solve theproblem,the PUC19 plasmid vector tracing 展开更多
关键词 Subject headings puc19 PLASMID trace BACTERIAL TRANSLOCATION RESTRICTION map analysis fluorescence LABELING
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活体内细菌移位示踪方法的研究 被引量:6
15
作者 府伟灵 肖光夏 +2 位作者 岳旭明 华川 雷曼萍 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 1998年第3期145-147,共3页
目的为解决内源性感染细菌体内示踪问题,本实验采用PUC19质粒载体示踪加限制性内切酶酶切图谱分析法和荧光标记示踪法,对肠道移位细菌进行了动态观察。并对两种方法进行了比较。方法依据PUC19质粒特点设计了动物模型,11... 目的为解决内源性感染细菌体内示踪问题,本实验采用PUC19质粒载体示踪加限制性内切酶酶切图谱分析法和荧光标记示踪法,对肠道移位细菌进行了动态观察。并对两种方法进行了比较。方法依据PUC19质粒特点设计了动物模型,110只Wisar大鼠致成30%体表面积Ⅲ°烫伤,于6、12、24、48h和12天分别活杀,做荧光显微镜检查和细菌培养,质粒提取和酶切。结果烧伤后肠道细菌可移位至淋巴结和肝脏,荧光标记方法细菌到达淋巴结(95%)和肝脏(57.5%)的百分率略高于PUC19示踪方法(78.4%、52.4%)。结论用PUC19质粒载体做示踪物可减少非特异性因素。 展开更多
关键词 puc19质粒示踪 细菌移位 内源性感染
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人类染色体8q24.1带特异性微小卫星DNA的筛选 被引量:8
16
作者 徐磊 夏家辉 +2 位作者 潘乾 蔡涛 邓汉湘 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1997年第1期1-6,共6页
本研究运用人类高分辨染色体显微切割、PCR技术获得的8q24.1带特异性探针池,构建了该区带的pUC19文库,从中筛选出48个含CA重复顺序的微小卫星DNA的克隆,已完成12个克隆的序列分析,发现了一个世界上至今未曾... 本研究运用人类高分辨染色体显微切割、PCR技术获得的8q24.1带特异性探针池,构建了该区带的pUC19文库,从中筛选出48个含CA重复顺序的微小卫星DNA的克隆,已完成12个克隆的序列分析,发现了一个世界上至今未曾报道过的、在正常人群中已检出11个等位片段的、杂合度在中国汉族人群和美国盎格鲁撤克逊族人群中分别达0.84和0.83的高度多态的微小卫星DNA(编号:D8S7F),经PCR检测人鼠杂种细胞系列,证实其来源于人8号染色体。 展开更多
关键词 人类遗传学 染色体 微小卫星DNA 区带特异性
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In Vitro Antioxidant and Radio Protective Activities of Lycopene from Tomato Extract against Radiation—Induced DNA Aberration
17
作者 Safaiatul Islam Abu Hena Mostofa Kamal +2 位作者 Md. Ziaur Rahman Protul Kumar Roy A.Y.K. Md. Masud Rana 《Journal of Biosciences and Medicines》 2024年第2期202-213,共12页
Background: The accumulation of free radicals is linked to a number of diseases. Free radicals can be scavenged by antioxidants and reduce their harmful effects. It is therefore essential to look for naturally occurri... Background: The accumulation of free radicals is linked to a number of diseases. Free radicals can be scavenged by antioxidants and reduce their harmful effects. It is therefore essential to look for naturally occurring antioxidants that come from plants, as synthetic antioxidants are toxic, carcinogenic and problematic for the environment. Lycopene is one of the carotenoids, a pigment that dissolves in fat and has antioxidant properties. Materials and Methods: The antioxidant and free radical scavenging activity were assessed using the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) assay. The impact of lycopene on bacteria (E. coli) susceptibility to γ-radiation was examined by radio sensitivity assay. The study also examined the induction of strand breaks in plasmid pUC19 DNA and how lycopene extract protected the DNA from γ-radiation in vitro. Results: At varying concentrations, lycopene demonstrated its ability to scavenge free radicals such as 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). IC<sub>50</sub> for lycopene was determined at 112 μg/mL which was almost partial to IC<sub>50</sub> of standard antioxidant L-ascorbic acid. The D<sub>10</sub> value 180 Gy of E. coli was found to be >2-fold higher in the extract-containing lycopene sample than in the extract-free controls. The lycopene extracts inhibited the radiation-induced deterioration of the plasmid pUC19 DNA. At an IC<sub>50</sub> concentration, lycopene provided the highest level of protection. Conclusion: Lycopene functions as an efficient free radical scavenger and possible natural antioxidant source. For cancer patients and others who frequently expose themselves to radiation, lycopene may be a useful plant-based pharmaceutical product for treating a variety of diseases caused by free radicals. 展开更多
关键词 Radio Protective ANTIOXIDANTS Free Radical DNA Damage puc19 Plasmid Gamma Irradiation DPPH
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小麦条锈病的抗性遗传及其在育种中的利用 被引量:4
18
作者 刘萍 储燕宁 康振生 《宁夏农学院学报》 2004年第4期49-52,共4页
小麦条锈病是小麦最重要的病害之一 ,利用品种的抗病性是控制该病的主要方法 ,目前已确定并命名的抗病基因有 30个 .综述了小麦的抗条锈性遗传及其抗病基因在染色体上的定位 ,指出在抗病育种工作中 ,优异的小麦条锈病抗源及抗病基因是... 小麦条锈病是小麦最重要的病害之一 ,利用品种的抗病性是控制该病的主要方法 ,目前已确定并命名的抗病基因有 30个 .综述了小麦的抗条锈性遗传及其抗病基因在染色体上的定位 ,指出在抗病育种工作中 ,优异的小麦条锈病抗源及抗病基因是抗病育种的基础 .在普通小麦和小麦的野生近缘植物 ,特别是在长期未被有效利用的农家地方品种中蕴含着丰富的条锈菌抗源和抗病基因资源 ,因此应该充分利用现有有效基因 ,挖掘利用新的抗源 ,实现生产品种抗病基因的多样化 ,以达到持久抗病的目的 . 展开更多
关键词 小麦育种 小麦条锈病 抗病性遗传
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γ射线诱导DNA损伤中DNA浓度和剂量率的影响 被引量:5
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作者 孔福全 王潇 +3 位作者 倪嵋楠 隋丽 杨明建 赵葵 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期103-107,共5页
在进行辐射致DNA损伤中,DNA浓度和剂量率是两个重要的因素。利用γ射线在不同的剂量率下对不同浓度的质粒DNApUC19水溶液进行了辐照,利用凝胶电泳对辐照后的样品进行分析。结果表明,在同一剂量下被辐照的DNA样品,随浓度的降低DNA损伤越... 在进行辐射致DNA损伤中,DNA浓度和剂量率是两个重要的因素。利用γ射线在不同的剂量率下对不同浓度的质粒DNApUC19水溶液进行了辐照,利用凝胶电泳对辐照后的样品进行分析。结果表明,在同一剂量下被辐照的DNA样品,随浓度的降低DNA损伤越来越严重;通过分析软件和理论公式得到的每个DNA上的双链断裂数随着DNA浓度的变化呈现为非线性趋势。 展开更多
关键词 Γ射线 DNA损伤 DNA浓度 剂量率 puc19
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含绿色荧光蛋白报告基因pUC18筛选载体的构建
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作者 王进 李付广 +1 位作者 李倩如 杜英 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2002年第5期621-624,共4页
目的 :以绿色荧光蛋白 (GFP)基因为报告基因 ,将GFP基因克隆入pUC1 8建立大通量的筛选载体。方法 :用PCR方法扩增目的DNA片段 ,碱裂解法小量制备质粒DNA ,用限制性内切酶消化质粒DNA ,用低熔点琼脂糖凝胶分离和纯化大片段DNA ,GFP基因与... 目的 :以绿色荧光蛋白 (GFP)基因为报告基因 ,将GFP基因克隆入pUC1 8建立大通量的筛选载体。方法 :用PCR方法扩增目的DNA片段 ,碱裂解法小量制备质粒DNA ,用限制性内切酶消化质粒DNA ,用低熔点琼脂糖凝胶分离和纯化大片段DNA ,GFP基因与 pUC1 8连接 ,用氯化钙法转化感受态细胞 ,DNA序列测定 ,琼脂糖凝胶电泳 ,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果 :pUC1 8 atg GFP载体意外表达GFP蛋白 ,新合成的上游引物与原下游引物扩增GFP基因 ,克隆入 pUC1 8构建 pUC1 8 GFP载体 ,通过PCR、酶切鉴定和DNA序列分析 ,GFP基因的读码框架与原设计方案完全一致 ,该载体自身无GFP表达。结论 :筛选载体内的GFP基因与克隆基因的融合基因可表达一种融合蛋白 ,在琼脂平板上含有该融合基因的克隆在紫外线激发下可发绿色荧光 ,因此 ,可表达基因能被挑选出来。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 载体 puc18 GFP
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