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二噁英污染引起的特异性下颌短小—斑马鱼下颌形态学检测 被引量：3
1
作者 董武 杨景峰 +3 位作者 王思珍 高原 解颜炯 马国文 《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》 2005年第3期298-301,共4页
以二英为主的持久性环境污染物质具有强力的致癌、致畸性、致死性,对人类和动物的健康构成了严重的威胁.本实验使用其中毒性最强的环境污染物质2,3,7,8-四氯-二苯基-对-二英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,以下略为TCDD)作... 以二英为主的持久性环境污染物质具有强力的致癌、致畸性、致死性,对人类和动物的健康构成了严重的威胁.本实验使用其中毒性最强的环境污染物质2,3,7,8-四氯-二苯基-对-二英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,以下略为TCDD)作为标准对斑马鱼胚胎进行了染毒.实验结果表明TCDD可以引起斑马鱼下颌的短下,并且这种短小是以TCDD的浓度为依存的,通过原位杂交试验表明TCDD引起斑马鱼下颌短小与goosecoid基因以及与形态发育密切相关的ptd基因表达欠缺.因此本试验预示TCDD引起的下颌短小是特异性的,以下颌的短小作为TCDD对斑马鱼形态学发育影响的一种评价指标是有可行性的. 展开更多
关键词 斑马鱼 二噁英 形态学 特异性 下颌 环境污染物质 TCDD 检测 基因表达 形态发育 id基因 杂交试验 评价指标 发育影响 持久性 致畸性 致死性 中毒性 二苯基 ptd 实验
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人源DCF1基因原核表达载体构建及蛋白分离纯化 被引量：1
2
作者 王倩 杨眉 +2 位作者 冯瑞丽 王娇 文铁桥 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期195-200,共6页
为了深入研究DCF1(Dendritic Cell Factor 1)基因的作用,以质粒pc DNA3.1-DCF1-TAT为模板体外扩增得到片段DCF1-TAT,将测序正确的目的片段克隆入原核表达载体p ET32a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达... 为了深入研究DCF1(Dendritic Cell Factor 1)基因的作用,以质粒pc DNA3.1-DCF1-TAT为模板体外扩增得到片段DCF1-TAT,将测序正确的目的片段克隆入原核表达载体p ET32a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化表达条件。以尿素溶解包涵体蛋白,并优化溶解条件,通过Ni离子亲和层析柱进行纯化,再透析复性目的蛋白。用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果,并用Western blot进行验证。结果表明,重组表达载体p ET32a-DCF1-TAT构建成功,并在大肠杆菌Rosetta中成功表达。融合蛋白主要以包涵体形式存在,经过尿素溶解,Ni离子亲和层析柱纯化获得高纯度的目的蛋白。SDS-PAGE和Western blot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符。 展开更多
关键词 人源DCF1基因 ptd TAT
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重组SOD的摇瓶发酵条件研究 被引量：1
3
作者 陈航 黄晓南 +2 位作者 陈春 刘树滔 饶平凡 《医学理论与实践》 2006年第11期1255-1257,共3页
目的:对含PTD-SOD重组质粒的工程菌进行诱导表达。方法:通过SOD活性和SDS-PAGE电泳分析,考察了诱导时间和诱导剂浓度对PTD-SOD表达量的影响。同时考察了诱导温度对产物表达形式的影响。结果:表达条件为IPTG浓度0.5mM,诱导时间4h,诱导温... 目的:对含PTD-SOD重组质粒的工程菌进行诱导表达。方法:通过SOD活性和SDS-PAGE电泳分析,考察了诱导时间和诱导剂浓度对PTD-SOD表达量的影响。同时考察了诱导温度对产物表达形式的影响。结果:表达条件为IPTG浓度0.5mM,诱导时间4h,诱导温度20℃。结论:在上述条件下重组SOD在摇瓶中的表达效果最好。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 诱导剂 基因表达 发酵 大肠杆菌
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以寡聚精氨酸为PTD的嵌合基因的表达及其对HER2阳性SGC-7901胃癌细胞的杀伤作用 被引量：1
4
作者 赵智凝 王涛 +5 位作者 任君琳 张瑞 赵晶 温伟红 贾林涛 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期735-737,共3页
目的：构建以寡聚精氨酸（R9）为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3的真核表达载体，并检测瞬时转染该载体对HER2阳性SGC-7901肿瘤细胞及HER2阴性HeLa肿瘤细胞生长的影响。方法：用PCR法获得融合了R9的活性caspase-3基因片段，并... 目的：构建以寡聚精氨酸（R9）为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3的真核表达载体，并检测瞬时转染该载体对HER2阳性SGC-7901肿瘤细胞及HER2阴性HeLa肿瘤细胞生长的影响。方法：用PCR法获得融合了R9的活性caspase-3基因片段，并将其克隆人含有HER2单链抗体e23sFv基因的真核表达载体，以脂质体法转染SGC-7901细胞及HeLa细胞，用间接免疫荧光、细胞计数等方法，检测其在两种细胞中的表达及其对两种细胞生长的影响。结果：成功构建了以R9为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3基因真核表达载体pCMV—e23sFv-R9-casp3，瞬时转染该质粒发现SGC-7901细胞和HeLa细胞均以分泌形式表达e23sFv—R9-casp3蛋白，但SGC-7901细胞生长受到明显抑制，细胞形态发生改变，出现核浓缩等凋亡特征；而HeLa细胞生长未受抑制，细胞形态无明显变化。结论：以分泌形式表达的嵌合蛋白，其HER2抗体部分能够介导靶向识别，R9可以辅助效应分子活化、转位至细胞液，活性caspase-3能高效杀伤细胞。 展开更多
关键词 寡聚精氨酸 蛋白质转导结构域 嵌合基因 靶向治疗
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伴WT1、MLL-PTD、EVI1基因的幼儿急性巨核细胞白血病的表型与遗传学分析 被引量：4
5
作者 赵理平 陈兴 +1 位作者 李漫江 邓焕良 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2021年第7期690-693,共4页
目的探讨伴WT1、MLL-PTD、EVI1基因幼儿急性巨核细胞白血病(acute mega-karyoblastic leukemia,AMKL)的表型与遗传学特征。方法采集静脉血进行血常规及血细胞形态分析;抽取骨髓进行细胞形态学、免疫表型、染色体核型及融合基因分析。结... 目的探讨伴WT1、MLL-PTD、EVI1基因幼儿急性巨核细胞白血病(acute mega-karyoblastic leukemia,AMKL)的表型与遗传学特征。方法采集静脉血进行血常规及血细胞形态分析;抽取骨髓进行细胞形态学、免疫表型、染色体核型及融合基因分析。结果血常规白细胞计数12.3×109/L、血红蛋白73 g/L、血小板计数13×109/L;血细胞形态分析发现幼稚细胞胞体大小似原始幼稚淋巴细胞,呈圆形或不规则形,部分可见明显伪足;胞质嗜碱性,着色不均,内有颗粒;核染色质细致,可见核仁1~3个,此类细胞约占40%;骨髓细胞形态分析符合急性白血病,过氧化物酶染色阴性,酯酶双染色AS-DNCE阴性,α-NBE阴性;流式细胞免疫分型结果可见约52%的原始细胞,伴明显的巨核细胞相关标记表达(cCD41+,CD61+部分,CD36+);染色体核型为46,XX,der(3)add(3)(p21)add(3)(q25),add(9)(q22),-13,+mar[4]/46,XX,del(13)(q12q22)[3]/46,XX[3];融合基因WT1过表达、MLL-PTD阳性、EVI1阳性。结论急性巨核细胞白血病具有独特且复杂的表型特点及遗传学特征。 展开更多
关键词 急性巨核细胞白血病 WT1基因 MLL-ptd基因 EVI1基因
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载pVAX1/Tat PTD-endostatin壳聚糖纳米基因载体的构建与体外活性评价 被引量：1
6
作者 张新科 陈洪元 +2 位作者 杨莹 李妍 王凤山 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2017年第7期43-48,共6页
目的构建载内皮抑素(Es)重组表达质粒的壳聚糖纳米基因载体并评价其抑制内皮细胞增殖的活性。方法选用真核表达质粒p VAX1为重组载体,采用PCR及双酶切法制备能够表达Tat PTD-Es融合蛋白的真核表达载体p VAX1/Tat PTD-Es;离子交联法制备... 目的构建载内皮抑素(Es)重组表达质粒的壳聚糖纳米基因载体并评价其抑制内皮细胞增殖的活性。方法选用真核表达质粒p VAX1为重组载体,采用PCR及双酶切法制备能够表达Tat PTD-Es融合蛋白的真核表达载体p VAX1/Tat PTD-Es;离子交联法制备壳聚糖载基因纳米粒,琼脂糖凝胶电泳筛选处方,检测纳米粒的形态、Zeta电位及粒径;采用最佳处方比例制备载重组质粒纳米载体,转染人脐静脉内皮细胞HUVEC,采用ELISA法测定分泌型Tat PTD-Es蛋白的表达量,CCK-8法测定对HUVEC的抑制作用,以上两个实验均以LipofectaminTM2000为阳性对照。结果 p VAX1/Tat PTD-Es的真核表达载体构建成功,壳聚糖纳米粒Zeta电位(14.3±1.6)m V,粒径(145±12)nm,纳米粒转染HUVEC后细胞上清中Tat PTD-Es的浓度为(182.5±16.3)ng/m L,壳聚糖基因载体转染HUVEC后对细胞有明显的抑制作用,72 h的抑制率达(53.4±5.4)%(Z=-2.611,P=0.008)。结论构建的壳聚糖纳米基因载体能够成功转染HUVEC并能明显地抑制内皮细胞的增殖。 展开更多
关键词 TAT ptd-内皮抑素 壳聚糖 纳米基因载体 基因治疗
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混合系白血病全长基因在AML-M4/M5患者中的突变检测 被引量：1
7
作者 王琴荣 施静艺 +1 位作者 施琳 陈赛娟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期12-17,共6页
急性髓系白血病(AML)-M4、M5常有11号染色体异常,定位于11q23的混合系白血病(MLL)基因异常所形成的MLL-PTD和MLL融合基因在该病的发病机理中具有重要作用。但在该类白血病绝大多数未能检测出染色体水平异常,是否存在MLL基因的其他突变?... 急性髓系白血病(AML)-M4、M5常有11号染色体异常,定位于11q23的混合系白血病(MLL)基因异常所形成的MLL-PTD和MLL融合基因在该病的发病机理中具有重要作用。但在该类白血病绝大多数未能检测出染色体水平异常,是否存在MLL基因的其他突变?本研究对MLL全长基因的外显子进行了测序分析。选取25例初发核型正常的AML M4、M5患者(排除MLL融合基因和MLL-PTD及M4eo),进行了MLL全长基因的外显子PCR扩增直接测序分析,对发现的突变在基因组DNA水平进行验证。利用Mass Array方法在正常对照样本和AML扩大样本中对发现的点突变进行检测。结果发现,在MLL的RD、PHD、TAD和SET功能域中存在着高频的缺失、插入及多个点突变;同时对照研究正常样本,发现也存在上述的变异,且突变频率无统计学差别(P>0.05)。结论:检测到的MLL基因发生在mRNA水平的缺失、插入和多个点突变,分别是MLL在转录水平的选择性剪接和MLL的单核苷酸多态性,它们共同构成了MLL的遗传多态性;这些MLL基因遗传多态性可能与AML M4、M5的发病不直接相关,对于治疗、预后及其他生物学表型的意义还有待进一步探讨。 展开更多
关键词 混合系白血病 AML-M4 AML-M5 MLL-ptd MLL融合基因 MLL基因突变
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脆性组氨酸三联体基因与HIV-TAT蛋白转导域融合蛋白表达、纯化和多克隆抗体制备 被引量：1
8
作者 赵亚 周景师 江少杰 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第9期831-834,共4页
目的:制备脆性组氨酸三联体(FHIT)基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白FHIT/TAT以及该融合蛋白的兔抗多克隆抗体,探讨FHIT基因对肝肿瘤的作用及其机制.方法:构建FHIT基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白表达载体,确定该载体的最佳诱导表... 目的:制备脆性组氨酸三联体(FHIT)基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白FHIT/TAT以及该融合蛋白的兔抗多克隆抗体,探讨FHIT基因对肝肿瘤的作用及其机制.方法:构建FHIT基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白表达载体,确定该载体的最佳诱导表达条件,在大肠杆菌中大量表达并获得纯化的FHIT/TAT融合蛋白,同时以该融合蛋白免疫兔制备抗FHIT/TAT融合蛋白的多克隆抗体.结果:构建了FHIT基因与HIV-TAT蛋白转导域的融合蛋白表达载体;确定了该载体的最佳诱导表达条件;Western Blot检测也证实了该融合蛋白在大肠杆菌中的表达;以此为基础在大肠杆菌中大量表达并获得了70%纯度的FHIT/TAT融合蛋白;同时制备了较高滴度的兔抗FHIT/TAT融合蛋白多克隆抗体.结论:成功建立了制备具有高效转导作用的HIV-TAT蛋白转导域与FHIT基因融合蛋白的原核表达体系,获得了该融合蛋白的兔抗多克隆抗体,为FHIT基因对于肝肿瘤的作用及其机制研究,特别是肝肿瘤的基因治疗和预防等打下了良好的基础. 展开更多
关键词 脆性组氨酸三联体基因 蛋白转导域 基因治疗
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hFOXP3-Δ E251的克隆及在大肠杆菌中的表达
9
作者 蔺昕 许逊 +1 位作者 宗扬勇 邵启祥 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第8期1401-1404,共4页
目的:构建和表达带HIV-TAT穿膜序列(Protein transduction domain,PTD)的人FOXP3突变体PTD-hFOXP3-Δ E251,为研究人FOXP3的功能奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方... 目的:构建和表达带HIV-TAT穿膜序列(Protein transduction domain,PTD)的人FOXP3突变体PTD-hFOXP3-Δ E251,为研究人FOXP3的功能奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,从人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)总RNA中扩增得到人FOXP3(hFOXP3)的cDNA,然后再利用重叠PCR技术扩增获得hFOXP3-ΔE251基因实变体片段。将该重组突变体插入表达载体pET28a-PTD中,构建表达质粒pET28a-PTD-hFOXP3-ΔE251,然后转化感受态细菌E.coli Rosetta(DE3),最终采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β -D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达。结果:SDS-PAGE电泳分析发现,经0.5mM IPTG诱导8h后,可高效表达重组的融合蛋白,表达产物以包涵体形式存在。结论:成功制备了带穿膜序列的人FOXP3ΔE251突变体融合蛋白,为更好地研究人FOXP3的功能与特性奠定了实验基础。 展开更多
关键词 ptd-hFOXP3-Δ E251 基因克隆 表达载体 大肠杆菌
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