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变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶基因的原核表达
被引量：
2
1
作者
孙文敬
杨荔
+5 位作者
栾方
何小用
崔凤杰
王大明
钱静亚
齐向辉
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期66-72,共7页
采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,...
采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,获得了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kgu E。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个分子质量约为30.5 ku的融合蛋白,且该蛋白的Western-blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由256个氨基酸残基组成的分子质量为28.5 ku的亲水性蛋白,与恶臭假单胞菌的2-酮基葡萄糖酸差向异构酶在氨基酸序列上的一致性达78%,定位于细胞质中,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为40.62%、17.19%和42.19%。本研究结果为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的功能研究提供了一定理论支持。
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关键词
变形假单胞菌
2-酮基葡萄糖酸差向异构酶
kgu
E基因
克隆
表达
生物信息学
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职称材料
一种定量检测大黄鱼感染变形假单胞菌方法的建立与应用
被引量：
5
2
作者
崔晓莹
李泽宇
+1 位作者
李完波
王志勇
《集美大学学报（自然科学版）》
CAS
2019年第5期328-334,共7页
变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicid)是引起大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要病原。基于变形假单胞菌的 gyrB 基因与大黄鱼的单拷贝基因 gdf-8 分别设计1对特异性引物,对所设计的变形假单胞菌 gyrB 基因的引物特异性...
变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicid)是引起大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要病原。基于变形假单胞菌的 gyrB 基因与大黄鱼的单拷贝基因 gdf-8 分别设计1对特异性引物,对所设计的变形假单胞菌 gyrB 基因的引物特异性进行了检验,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了400尾人工浸泡感染变形假单胞菌5 d后的大黄鱼幼鱼脾脏中的病原菌的相对含量。结果显示,基于 gyrB 基因所设计的引物对变形假单胞菌检测具有良好的特异性,可以用于对变形假单胞菌的定性和定量检测;400尾人工攻毒大黄鱼幼鱼脾脏中变形假单胞菌的相对含量(相对带菌量,用 gyrB 基因拷贝数与大黄鱼 gdf-8 基因拷贝数之比表示)变化在5.04×10^-7 ~0.482之间,不同个体之间的相对带菌量差异很大,说明不同个体的大黄鱼对变形假单胞菌感染的抵抗力有很显著的差异。
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关键词
大黄鱼
变形假单胞菌
gyrB基因
荧光定量PCR
相对带菌量
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职称材料
题名
变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶基因的原核表达
被引量：
2
1
作者
孙文敬
杨荔
栾方
何小用
崔凤杰
王大明
钱静亚
齐向辉
机构
江苏大学食品与生物工程学院
百勤异VC钠有限公司
江南大学生物工程学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期66-72,共7页
基金
国家自然科学基金面上项目(31571885)
国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2012AA022103)
+3 种基金
江西省科技计划项目(赣知发[2015]64号)
江西省创新团队建设计划项目(20142BCB24024)
江西省科技平台建设计划项目(2010DTZ01900)
德兴市科技计划项目(德科发[2015]44号)
文摘
采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,获得了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kgu E。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个分子质量约为30.5 ku的融合蛋白,且该蛋白的Western-blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由256个氨基酸残基组成的分子质量为28.5 ku的亲水性蛋白,与恶臭假单胞菌的2-酮基葡萄糖酸差向异构酶在氨基酸序列上的一致性达78%,定位于细胞质中,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为40.62%、17.19%和42.19%。本研究结果为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的功能研究提供了一定理论支持。
关键词
变形假单胞菌
2-酮基葡萄糖酸差向异构酶
kgu
E基因
克隆
表达
生物信息学
Keywords
pseudomonas
plecoglossicide
2-ketegluconate
epimerase
（KguE）
kguE
gene
cloning
expression
bioinformatics
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
一种定量检测大黄鱼感染变形假单胞菌方法的建立与应用
被引量：
5
2
作者
崔晓莹
李泽宇
李完波
王志勇
机构
集美大学水产学院
农业部东海海水健康养殖重点实验室
出处
《集美大学学报（自然科学版）》
CAS
2019年第5期328-334,共7页
基金
国家自然科学基金重点支持项目(U1705231)
福建省自然科学基金资助项目(2018J01450)
国家海水鱼产业技术体系(CARS-47-G04)
文摘
变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicid)是引起大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要病原。基于变形假单胞菌的 gyrB 基因与大黄鱼的单拷贝基因 gdf-8 分别设计1对特异性引物,对所设计的变形假单胞菌 gyrB 基因的引物特异性进行了检验,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了400尾人工浸泡感染变形假单胞菌5 d后的大黄鱼幼鱼脾脏中的病原菌的相对含量。结果显示,基于 gyrB 基因所设计的引物对变形假单胞菌检测具有良好的特异性,可以用于对变形假单胞菌的定性和定量检测;400尾人工攻毒大黄鱼幼鱼脾脏中变形假单胞菌的相对含量(相对带菌量,用 gyrB 基因拷贝数与大黄鱼 gdf-8 基因拷贝数之比表示)变化在5.04×10^-7 ~0.482之间,不同个体之间的相对带菌量差异很大,说明不同个体的大黄鱼对变形假单胞菌感染的抵抗力有很显著的差异。
关键词
大黄鱼
变形假单胞菌
gyrB基因
荧光定量PCR
相对带菌量
Keywords
Larimichthys
crocea
pseudomonas
plecoglossicid
gyrB
gene
real-time
quantitative
PCR
relative
pathogen
load
分类号
S941.42 [农业科学—水产养殖]
S917.4 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶基因的原核表达
孙文敬
杨荔
栾方
何小用
崔凤杰
王大明
钱静亚
齐向辉
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
下载PDF
职称材料
2
一种定量检测大黄鱼感染变形假单胞菌方法的建立与应用
崔晓莹
李泽宇
李完波
王志勇
《集美大学学报（自然科学版）》
CAS
2019
5
下载PDF
职称材料
已选择
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