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牛肺炎链球菌重组PsaA蛋白对牛胚气管上皮细胞黏附抑制作用的研究 被引量:2
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作者 孙雅婕 郭婷 +5 位作者 周雅坪 赵红梅 赵逢淼 高源 李梦思 郝永清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期195-200,共6页
为研究牛肺炎链球菌的黏附蛋白—肺炎链球菌表面黏附素A (PsaA)对牛肺炎链球菌黏附牛胚气管上皮细胞的影响,本研究利用PCR扩增牛肺炎链球菌psaA基因,构建重组质粒pET32a-PsaA,经双酶切和测序鉴定正确后,将阳性重组质粒转化BL21(DE3)感... 为研究牛肺炎链球菌的黏附蛋白—肺炎链球菌表面黏附素A (PsaA)对牛肺炎链球菌黏附牛胚气管上皮细胞的影响,本研究利用PCR扩增牛肺炎链球菌psaA基因,构建重组质粒pET32a-PsaA,经双酶切和测序鉴定正确后,将阳性重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞后进行IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和western blot鉴定重组PsaA蛋白(rPsaA)的表达情况及反应原性,结果显示,rPsaA在上清和沉淀中均获得了表达,且具有较好的反应原性。将牛胚气管上皮细胞与1.3×10^(8)cfu/mL的牛肺炎链球菌稀释液于37℃共孵育后,利用间接免疫荧光试验(IFA)检测牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附性,结果显示,可观察到黏附在牛胚气管上皮细胞的牛肺炎链球菌的绿色荧光,即牛肺炎链球菌可以黏附牛胚气管上皮细胞。利用牛肺炎链球菌稀释液孵育经不同浓度rPsaA预处理的牛胚气管上皮细胞后,对黏附的细菌计数,结果显示,rPsaA可以极显著减少牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附菌数(P<0.01)。利用本研究制备的rPsaA多克隆抗体和肺炎链球菌阳性血清分别与牛肺炎链球菌作用后,与牛胚气管上皮细胞孵育,对黏附的细菌计数,结果显示,rPsaA多克隆抗体与肺炎链球菌阳性血清均能有效减少牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附数。本研究经原核系统表达了牛肺炎链球菌rPsaA,并首次证明rPsaA具有影响牛肺炎链球菌黏附牛胚气管上皮细胞的作用,该结果为探究抑制肺炎链球菌黏附呼吸道上皮细胞的机理以及肺炎链球菌亚单位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 psaa基因 原核表达 黏附
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坛紫菜叶绿体psaA基因片段的序列分析 被引量:6
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作者 佘大为 张海波 +1 位作者 王月 侯和胜 《水产科学》 CAS 北大核心 2007年第5期289-291,共3页
根据日本kazusaDNA研究所收录的坛紫菜EST序列AV434021和AV433683设计引物,对坛紫菜配子体的RNA进行RT-PCR扩增,得到产物长度为480 bp。利用DNAstar、Clastal1.81等专业软件进行分析,结果表明,所得产物为紫菜叶绿体的psaA基因片段,其G+... 根据日本kazusaDNA研究所收录的坛紫菜EST序列AV434021和AV433683设计引物,对坛紫菜配子体的RNA进行RT-PCR扩增,得到产物长度为480 bp。利用DNAstar、Clastal1.81等专业软件进行分析,结果表明,所得产物为紫菜叶绿体的psaA基因片段,其G+C含量为55.9%。G+C含量明显高于A+T的含量;对按核酸序列推导的蛋白序列进行二级结构和三级结构预测,该蛋白存在3个α螺旋和2个β折叠。 展开更多
关键词 坛紫菜 psaa基因 RT—PCR 序列分析 结构预测
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肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)的研究进展 被引量:2
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作者 何斌 朱虹 《微生物学免疫学进展》 2007年第3期84-86,共3页
肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)是各型肺炎链球菌共有的种特异性表面结合脂蛋白,具有较好的免疫原性,在肺炎链球菌黏附呼吸道粘膜过程中起关键作用,PsaA的编码基因psaA在遗传上高度保守,PsaA是目前肺炎链球菌抗原研究的热点之一。本文就... 肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)是各型肺炎链球菌共有的种特异性表面结合脂蛋白,具有较好的免疫原性,在肺炎链球菌黏附呼吸道粘膜过程中起关键作用,PsaA的编码基因psaA在遗传上高度保守,PsaA是目前肺炎链球菌抗原研究的热点之一。本文就十年来PsaA的研究进展作一简要综述。 展开更多
关键词 肺炎链球菌表面黏附素A(psaa) psaa基因 重组psaa
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广东省575株肺炎链球菌的毒力因子psaA、ply基因检测分析 被引量:3
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作者 熊平 李柏生 +6 位作者 江锦志 彭托华 杨彤 刘美真 柯碧霞 刘闪闪 柯昌文 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第8期693-698,共6页
目的采用PCR检测肺炎链球菌(S.pn)毒力基因psaA和ply,研究分析两个毒力基因的特异性,为S.pn临床诊断提供依据。方法对广东省12家医疗机构诊断为S.pn感染患者的654份标本,经过细菌培养和乳胶凝集试验筛选出575株,以psaA、ply基因核心区... 目的采用PCR检测肺炎链球菌(S.pn)毒力基因psaA和ply,研究分析两个毒力基因的特异性,为S.pn临床诊断提供依据。方法对广东省12家医疗机构诊断为S.pn感染患者的654份标本,经过细菌培养和乳胶凝集试验筛选出575株,以psaA、ply基因核心区域序列设计合成扩增引物,以抽提的S.pn分离株DNA为模板,采用常规聚合酶链反应(PCR)扩增目标基因psaA、ply片段,长度分别为838bp和209bp,调查分析不同来源标本的分离株psaA和ply基因检出率;采用乳胶凝集试验与多重PCR分型,比较两种结果中S.pn菌株psaA和ply检出率差异,以及广东S.pn主要血清型与非主要血清型菌株的psaA和ply检出率情况。结果经乳胶凝集试验鉴定为S.pn的560株菌株中,psaA和ply基因检出率分别为78.21%和83.57%,ply基因检出率高于psaA基因,psaA基因阳性的S.pn菌株,其ply基因均阳性;来源于血液和脑脊液标本的S.pn分离株的psaA和ply基因检出率分别为93.18%和95.45%,脓液标本分离的S.pn菌株psaA和ply基因检出率为100%。在荚膜肿胀反应和多重PCR检测为S.pn可分型血清型菌株中,前者psaA和ply基因阳性率分别为93.90%和98.57%,后者为96.34%和98.31%;而在多重PCR检定为不可分型血清型菌株中,psaA和ply基因检出率分别为47.06%和57.84%,显著低于荚膜肿胀试验的68.59%和74.64%,但ply基因检出率也均比psaA高;可分型血清型中主要血清型菌株的psaA和ply基因检出率高于非主要血清型。结论广东地区S.pn临床分离株中ply基因检出率比psaA高,保守性高,但其他链球菌亦能扩增出ply基因从而出现假阳性,因此,对于S.pn菌株的鉴定,采用PCR同时扩增psaA和ply基因,并结合临床常规实验,鉴定更为可靠。此外,血液和脑脊液psaA和ply基因阳性率高可能与psaA和ply是S.pn入侵血和脑的关键因子有关。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 psaa基因 ply基因 PCR
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高粱叶绿体psaA基因的克隆和核苷酸序列分析 被引量:2
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作者 龚小松 阎景智 +1 位作者 吴乃虎 阎隆飞 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期207-212,共6页
我们克隆了含高粱叶绿体psaA基因的6.7kb EcoRI酶切片段,进行了限制酶图谱分析和核苷酸序列结构测定,所测核苷酸序列总长为3080bp,其中高粱叶绿体psaA基因序列为2253bp,编码一个含750个氨基酸残基的蛋白质,其分子量为83000Da。高粱psaA... 我们克隆了含高粱叶绿体psaA基因的6.7kb EcoRI酶切片段,进行了限制酶图谱分析和核苷酸序列结构测定,所测核苷酸序列总长为3080bp,其中高粱叶绿体psaA基因序列为2253bp,编码一个含750个氨基酸残基的蛋白质,其分子量为83000Da。高粱psaA基因的核苷酸序列与玉米、水稻、菠菜的同源性分别为99.4%、96.3%和89.4%;推导出的氨基酸序列的同源性分别为99.3%、98.0%和95.7%。C_4植物与C_3植物比较,由于P_(700)脱辅基蛋白的第493位氨基酸性质的不同(Gly→Arg,Ser),而导致了它们的多肽在疏水性图谱上的差异。 展开更多
关键词 高粱 psaa基因 核苷酸序列
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花叶矢竹psaA基因克隆及功能分析 被引量:2
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作者 徐丽丽 安苗苗 +3 位作者 姜可以 许冰清 杨海芸 周明兵 《竹子研究汇刊》 北大核心 2015年第1期41-48,共8页
光系统I(PS I)主要分布在类囊体膜的非垛叠部分,由反应中心复合体和捕光复合体I(LHC I)等亚单位组成。PS I反应中心复合体的功能是将电子从PC传递给铁氧还蛋白,psa A所编码的蛋白Psa A是复合体重要组成部分。研究基于psa A高保守性,扩增... 光系统I(PS I)主要分布在类囊体膜的非垛叠部分,由反应中心复合体和捕光复合体I(LHC I)等亚单位组成。PS I反应中心复合体的功能是将电子从PC传递给铁氧还蛋白,psa A所编码的蛋白Psa A是复合体重要组成部分。研究基于psa A高保守性,扩增出psa A全长序列,获得其编码区2516bp。对该序列及其推导出的氨基酸序列结构进行分析,将之与其他禾本科植物的psa A氨基酸序列进行同源性比较,并构建出基于psa A的系统进化树。通过定量RT-PCR调查了psa A基因在花叶矢竹叶色变异过程中表达丰度变化,分析其在花叶矢竹叶片发育过程中的作用,为进一步探讨花叶矢竹叶色变异的分子机理奠定一定的基础。 展开更多
关键词 花叶矢竹 psaa基因 克隆 RT-PCR 功能分析
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肺炎球菌表面蛋白的克隆表达与免疫原性研究 被引量:1
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作者 蔡倩影 方亮 +3 位作者 黄金钟 林海英 郭养浩 孟春 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期65-69,共5页
从肺炎球菌YF05中扩增了肺炎球菌表面蛋白A(PspA)和肺炎球菌表面黏附素A(PsaA)基因,以pET27b(+)为载体构建了重组表达质粒的表达系统后,转化入大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白约占菌体总溶解蛋白的75%,结果显示:表达的PspA蛋... 从肺炎球菌YF05中扩增了肺炎球菌表面蛋白A(PspA)和肺炎球菌表面黏附素A(PsaA)基因,以pET27b(+)为载体构建了重组表达质粒的表达系统后,转化入大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白约占菌体总溶解蛋白的75%,结果显示:表达的PspA蛋白和PsaA蛋白,分子量分别约为75kDa和37kDa。成功表达的重组蛋白具有较强的免疫活性和交叉免疫效果。 展开更多
关键词 PspA基因 psaa基因 免疫原 原核表达
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球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)叶绿体psaA基因片段的序列分析 被引量:10
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作者 杨泽民 章群 +3 位作者 谢数涛 韩博平 吕颂辉 Hodgkiss 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期435-439,共5页
根据GenBank中检索到的南极棕囊藻(Phaeocystisantarctica)psaA基因序列设计psaAL和psaAR引物,对球形棕囊藻(Phaeocystisglobosa)的psaA基因片段进行PCR扩增并测序,获得了629bp的DNA序列。应用ClustalX对球形棕囊藻P1、P2株系和南极棕... 根据GenBank中检索到的南极棕囊藻(Phaeocystisantarctica)psaA基因序列设计psaAL和psaAR引物,对球形棕囊藻(Phaeocystisglobosa)的psaA基因片段进行PCR扩增并测序,获得了629bp的DNA序列。应用ClustalX对球形棕囊藻P1、P2株系和南极棕囊藻的psaA基因片段序列进行比对,结果表明,球形棕囊藻psaA基因片段序列无插入/缺失,核苷酸差异率为3.34%。应用DNAstar分析软件推断球形棕囊藻和南极棕囊藻的psaA基因对应的氨基酸序列和RNA二级结构,发现它们的氨基酸序列差异不大,序列中209个氨基酸只有1个发生了变化,其氨基酸变异率为0.48%;除部分结构域比较相似外,RNA二级结构上体现一定程度的差异,这可能对棕囊藻的分子分类研究有参考价值。因所获得的psaA基因片段序列及氨基酸序列具有种的极端保守性,不适宜用作Phaeocystis属种间的分子分类研究。 展开更多
关键词 球形棕囊藻 南极棕囊藻 psaa基因:DNA序列 氨基酸序列 RNA二级结构 藻类
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烟草PsaA/PsaB基因家族鉴定及其对逆境胁迫的响应
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作者 常永春 尹国英 +4 位作者 燕一波 郭玉双 羽王洁 彭一洪 吴玉香 《陕西师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期55-70,共16页
PsaA和PsaB是光系统Ⅰ的中心蛋白,在植物光合作用及逆境调控中发挥重要功能。烟草(Nicotiana tabacum L.)是植物功能基因组学研究的模式作物,目前关于其PsaA和PsaB基因功能的研究较少。为解析烟草PsaA/PsaB基因对逆境胁迫的响应规律,在... PsaA和PsaB是光系统Ⅰ的中心蛋白,在植物光合作用及逆境调控中发挥重要功能。烟草(Nicotiana tabacum L.)是植物功能基因组学研究的模式作物,目前关于其PsaA和PsaB基因功能的研究较少。为解析烟草PsaA/PsaB基因对逆境胁迫的响应规律,在烟草基因组中鉴定PsaA/PsaB基因家族,并对其理化性质、亚细胞定位、系统进化、Motif基序、启动子调控元件进行分析。结果表明:烟草中共有27个PsaA/PsaB基因,与拟南芥相比,烟草PsaA/PsaB基因家族大量扩增,根据系统发育和结构特征可分为3类亚家族。烟草PsaA/PsaB基因启动子中含有大量响应光、低温、干旱及植物激素等的顺式作用元件。RT-qPCR分析发现,多数烟草PsaA/PsaB基因在低温胁迫下表达量上调,上调数目为8个;而在聚乙二醇、茉莉酸甲酯胁迫下表达量下调,下调数目分别为8个和7个;马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)和烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)感染后大多数烟草PsaA/PsaB基因表达量下调,PVY感染后下叶肉和叶脉组织中基因下调数目分别为19个和17个,其中叶脉中下调更明显,TMV感染后基因下调数目为9个。可见,烟草PsaA/PsaB基因参与烟草对多种非生物胁迫的应答过程,研究结果为进一步探索PsaA/PsaB基因在调控植物对逆境胁迫响应中的作用提供了参考。 展开更多
关键词 烟草 psaa/PsaB基因家族 聚乙二醇响应 茉莉酸甲酯响应 干旱胁迫 低温胁迫 TMV响应 PVY响应
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