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沉默PrxⅡ基因促进巨噬细胞对肝癌细胞的杀伤作用
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作者 冯琳 孙率洋 +2 位作者 姜鹏 吕树旗 韩英浩 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第2期77-83,共7页
为探究PrxⅡ对RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞系)细胞杀伤HepG2(人肝癌细胞系)细胞的影响,阐明PrxⅡ基因调控RAW264.7细胞分泌细胞因子杀伤HepG2细胞的作用,利用慢病毒干扰技术制备PrxⅡ基因沉默的RAW264.7细胞系、MTT assay测定HepG2细胞... 为探究PrxⅡ对RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞系)细胞杀伤HepG2(人肝癌细胞系)细胞的影响,阐明PrxⅡ基因调控RAW264.7细胞分泌细胞因子杀伤HepG2细胞的作用,利用慢病毒干扰技术制备PrxⅡ基因沉默的RAW264.7细胞系、MTT assay测定HepG2细胞存活情况、ELISA法测定RAW264.7细胞分泌炎性因子情况、蛋白质免疫印迹法检测NF-κB信号通路相关蛋白质表达水平。结果表明:已成功制备PrxⅡ基因沉默的RAW264.7细胞系;MTT检测发现RAW264.7细胞上清液处理HepG2细胞后,shPrxⅡ组HepG2细胞存活率明显低于mock组,且呈时间依赖性;ELISA结果表明shPrxⅡ组RAW264.7细胞分泌的TNF-α含量明显高于mock组,IL-6和IL-1β含量明显低于mock组;蛋白质免疫印迹结果与mock组相比,PrxⅡ基因沉默的RAW264.7细胞中NF-κB信号通路明显被激活。由此得出结论,PrxⅡ基因能调控RAW264.7细胞分泌细胞因子,杀伤HepG2细胞,导致HepG2细胞死亡水平上升,研究结果可为以巨噬细胞为靶点的免疫疗法提供理论基础,为肝癌患者的免疫治疗提供新思路。 展开更多
关键词 RAW264.7细胞系 HEPG2细胞系 prx NF-ΚB 炎性因子
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Prx Ⅱ缺失的真皮间充质干细胞提前衰老加速皮肤老化进程研究 被引量:3
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作者 于楠楠 毛莹莹 +2 位作者 冯琳 刘军 韩英浩 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第5期98-102,107,共6页
通过比较野生型和Prx Ⅱ(Peroxiredoxin Ⅱ)基因敲除型小鼠皮肤老化情况,阐明皮肤老化过程中Prx Ⅱ对真皮间充质干细胞的保护作用。体内试验采用病理组织切片,蛋白免疫印迹等方法检测两种129/SvJ小鼠皮肤组织及生理功能的差异;体外试验... 通过比较野生型和Prx Ⅱ(Peroxiredoxin Ⅱ)基因敲除型小鼠皮肤老化情况,阐明皮肤老化过程中Prx Ⅱ对真皮间充质干细胞的保护作用。体内试验采用病理组织切片,蛋白免疫印迹等方法检测两种129/SvJ小鼠皮肤组织及生理功能的差异;体外试验采用SA-β-gal染色对比两种真皮间充质干细胞衰老情况。结果表明同月龄的PrxⅡ基因敲除型小鼠与野生型小鼠相比真皮厚度层变薄,伤口愈合速度减慢,皮肤组织中P16、p21表达水平增加,PCNA表达水平降低;同代数的PrxⅡ基因敲除型的真皮间充质干细胞与野生型相比衰老细胞数量明显增多。综合分析,Prx Ⅱ基因敲除小鼠皮肤细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子表达上升,皮肤发生提前老化,与真皮间充质干细胞的细胞衰老存在相关性,为通过Prx Ⅱ延缓皮肤老化,减少因皮肤老化而引发的多种疾病提供基础理论。 展开更多
关键词 小鼠真皮间充质干细胞 PEROXIREDOXIN 皮肤老化 细胞衰老
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沉默Prx Ⅱ基因促进5-FU诱导HepG2细胞凋亡研究 被引量:1
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作者 毛莹莹 冯琳 +4 位作者 于楠楠 陈冬勤 刘芳美 任晨曦 金美华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第5期91-97,共7页
旨在探究Prx Ⅱ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默Prx Ⅱ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡... 旨在探究Prx Ⅱ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默Prx Ⅱ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡情况、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系构建成功;MTT检测发现在1mmol·L^-15-FU处理下,shPrx Ⅱ组细胞存活率明显低于Scramble组;荧光显微照相结果表明shPrx Ⅱ组细胞凋亡率明显高Scramble组;蛋白质免疫印迹结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞中凋亡标志物PARP、促凋亡蛋白Bad的表达水平明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-xL表达水平明显下降。研究表明,沉默PrxⅡ基因能提高HepG2对5-FU促凋亡作用的敏感性,导致HepG2细胞凋亡水平上升,研究结果可为提高肝癌细胞对于5-FU的敏感性提供新的潜在靶目标。 展开更多
关键词 HEPG2细胞系 prx 慢病毒载体 5-氟尿嘧啶 SHRNA干扰
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PRXⅡ蛋白及mRNA在小鼠卵巢不同发育阶段的表达 被引量:2
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作者 杨书红 罗爱月 +3 位作者 马湘一 卢运萍 马丁 王世宣 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2008年第7期506-509,共4页
目的:探讨PRXⅡ在小鼠卵泡发育不同阶段的表达。方法:选择不同发育时期的昆明小鼠卵巢,用免疫组化SP染色法,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同发育期卵巢组织中PRXⅡ蛋白、mRNA的表达水平。结果:PRXⅡ蛋白在各级卵泡的卵母细胞... 目的:探讨PRXⅡ在小鼠卵泡发育不同阶段的表达。方法:选择不同发育时期的昆明小鼠卵巢,用免疫组化SP染色法,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同发育期卵巢组织中PRXⅡ蛋白、mRNA的表达水平。结果:PRXⅡ蛋白在各级卵泡的卵母细胞及颗粒细胞中均有表达,其表达水平随卵泡发育逐渐增强。始基卵泡与初级、次级、窦状卵泡相比,其卵母细胞及颗粒细胞中PRXⅡ蛋白表达水平明显较低,差异有统计学意义(P<0.005)。初级卵泡分别与次级、窦状卵泡相比其颗粒细胞中PRXⅡ蛋白表达水平较低,有显著差异(P<0.005)。闭锁卵泡PRXⅡ蛋白呈强阳性表达,明显高于生长卵泡中的表达水平。黄体及间质中亦见少量PRXⅡ表达。PRXⅡmRNA在卵巢组织中的表达水平随卵巢的生长发育呈先增高后降低的趋势。3、6、11周小鼠卵巢中PRXⅡmR-NA表达水平无统计学差异(P>0.05),但其表达水平是8天及15周小鼠卵巢组织的两倍。结论:卵泡发育不同阶段PRXⅡ均有表达,在卵泡发育后期和闭锁卵泡中强表达,提示PRXⅡ在卵泡的生长发育及闭锁过程中可能起重要的调控作用。 展开更多
关键词 prx 卵泡发育 免疫组织化学 逆转录聚合酶链反应 小鼠
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过氧化物还原酶Ⅰ、Ⅱ在先兆流产患者子宫内膜中的表达及意义
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作者 余碧雅 林春燕 +1 位作者 钟秀妹 余进胜 《中国当代医药》 2016年第32期83-86,共4页
目的 探讨过氧化物还原酶Ⅰ(PrxⅠ)、Ⅱ在先兆早期流产患者子宫内膜中的表达及意义,从氧化应激方面探讨先兆早期流产的发病机制。方法 选取2014年4月~2016年4月就诊于惠州市惠东县人民医院计划生育门诊的流产患者60例,其中符合早期... 目的 探讨过氧化物还原酶Ⅰ(PrxⅠ)、Ⅱ在先兆早期流产患者子宫内膜中的表达及意义,从氧化应激方面探讨先兆早期流产的发病机制。方法 选取2014年4月~2016年4月就诊于惠州市惠东县人民医院计划生育门诊的流产患者60例,其中符合早期自然流产患者30例(实验组),自愿人工流产终止妊娠者30例(对照组)。采集两组患者的流产蜕膜标本,采用免疫组化及免疫蛋白印记法检测组织中PrxⅠ、Ⅱ蛋白含量,比较两种蛋白在自然流产及正常早孕患者中的表达差异。结果 实验组患者的蜕膜组织中PrxⅠ蛋白定性表达阳性率(40.0%)显著低于对照组(90.0%),其中实验组++阳性率为6.7%、+++阳性率为3.3%,对照组++阳性率为53.3%,+++阳性率为16.7%,差异有统计学意义(P〈0.05)。实验组患者的蜕膜组织中PrxⅡ白定性表达阳性率(40.0%)显著低于对照组(93.3%),其中实验组++阳性率为13.3%,+++阳性率为3.3%,对照组++阳性率为56.7%,+++阳性率为20.0%,差异均有统计学意义(P〈0.05)。实验组患者的蜕膜组织中PrxⅠ及PrxⅡ蛋白表达量(0.217±0.018、0.224±0.021)均明显低于对照组(1.174±0.114、1.184±0.181),差异有统计学意义(t=31.942、29.481,均P〈0.05)。Pearson相关性分析结果显示,实验组滋养细胞中PrxⅠ和PrxⅡ在实验组蜕膜组织中的表达量呈正相关(r=0.782,P〈0.05)。结论 PrxⅠ和PrxⅡ两种蛋白表达具有相关性,均具有较强的抗氧化应激作用,该蛋白的大量丢失可能是自然先兆流产发生的主要机制之一。 展开更多
关键词 过氧化物还原酶Ⅰ 过氧化物还原酶 先兆流产 子宫内膜
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PrxⅡ基因敲降L02细胞系的构建及其对细胞增殖的影响
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作者 满艺 甄兴 +3 位作者 孔令祖 申贵男 韩英浩 金美华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第1期49-55,共7页
构建PrxⅡ基因敲降L02细胞系并确定PrxⅡ基因对L02细胞增殖的影响。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术、流式细胞术、荧光显微照相、蛋白质免疫印迹、MTT asssay等方法建立并检验PrxⅡ敲降L02细胞系及其对L02细胞的增殖影响。结果显示:选用... 构建PrxⅡ基因敲降L02细胞系并确定PrxⅡ基因对L02细胞增殖的影响。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术、流式细胞术、荧光显微照相、蛋白质免疫印迹、MTT asssay等方法建立并检验PrxⅡ敲降L02细胞系及其对L02细胞的增殖影响。结果显示:选用5’-CCGCTTGTCTGAGGATACGTT-3’片段作为干扰PrxⅡ基因片段,利用慢病毒敲降L02细胞。同时处理嘌呤霉素筛选得到shPrxⅡ组细胞和Scramble组细胞,使用流式细胞术、荧光显微照相技术对shPrxⅡ组细胞和Scramble组细胞进行检测,结果均显示出GFP蛋白表达;此后利用蛋白质免疫印迹法检测出shPrxⅡ组细胞中PrxⅡ蛋白表达水平较Blank、Scram-ble组显著降低(P<0.05),Blank组与Scramble组细胞中PrxⅡ蛋白表达水平无明显差异。在MTT结果中显示shPrxⅡ组细胞增殖速率明显高于Scramble组,且具有统计学意义。成功构建PrxⅡ敲降的L02细胞系,发现PrxⅡ敲降后显著提高L02细胞的增殖速率。 展开更多
关键词 L02细胞系 prx 细胞增殖 RNA干扰技术 慢病毒
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稳定敲降PrxⅡ基因对QSG-7701细胞系抗氧化作用的影响
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作者 贺鑫梅 王媛 +6 位作者 冯耀元 毛莹莹 邢晓娅 向虹怡 郭晓宇 韩英浩 金美华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2022年第1期87-92,共6页
为了建立PrxⅡ敲降的稳定细胞系并探究人肝细胞中PrxⅡ对过氧化氢(H_(2)O_(2))的清除作用,使用空白慢病毒载体和含Sh-PrxⅡ的慢病毒载体侵染人肝细胞系QSG-7701,利用流式细胞仪以及荧光显微镜检测转染效率,蛋白免疫印迹检测PrxⅡ蛋白信... 为了建立PrxⅡ敲降的稳定细胞系并探究人肝细胞中PrxⅡ对过氧化氢(H_(2)O_(2))的清除作用,使用空白慢病毒载体和含Sh-PrxⅡ的慢病毒载体侵染人肝细胞系QSG-7701,利用流式细胞仪以及荧光显微镜检测转染效率,蛋白免疫印迹检测PrxⅡ蛋白信号,然后用不同浓度的H_(2)O_(2)处理Scramble(空白慢病毒载体转染组)和Sh-PrxⅡ(含Sh-PrxⅡ的慢病毒载体),MTT assay检测细胞存活率。结果显示PrxⅡ被敲降,同时随着H_(2)O_(2)的处理浓度的增高,PrxⅡ敲降后的细胞存活率明显降低。由此得出结论,Prx稳定敲降的QSG-7701细胞系成功建立,并且敲降PrxⅡ后QSG-7701细胞的抗氧化作用降低。 展开更多
关键词 过氧化物氧化还原酶2 过氧化氢 慢病毒载体 蛋白质免疫印迹 MTT法
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实验性帕金森病中PrxⅡ表达的研究
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作者 宫萍 胡林森 +3 位作者 常明 张磊 李红杰 侯澍 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期338-340,共3页
目的探讨PrxⅡ在实验性帕金森病发病中的表达。方法采用W istar大鼠6-OHDA右侧内侧前脑束定位注射,制备实验性帕金森病动物模型。在4 w后分别进行假手术组和实验组的纹状体定位分离,脑蛋白质提取,荧光差异双向凝胶电泳(D IGE)。通过D ec... 目的探讨PrxⅡ在实验性帕金森病发病中的表达。方法采用W istar大鼠6-OHDA右侧内侧前脑束定位注射,制备实验性帕金森病动物模型。在4 w后分别进行假手术组和实验组的纹状体定位分离,脑蛋白质提取,荧光差异双向凝胶电泳(D IGE)。通过D ecyderTM分析软件进行蛋白变化比对,其中AV Ratio>1.2或<1.2,配对t检验P<0.05为有意义的蛋白点意义,针对发现的差异表达的蛋白点进行质谱分析。结果D IGE分析发现表达明显提高的一个差异蛋白质点,经质谱分析确认为PrxⅡ。结论PrxⅡ在纹状体的表达明显增强,提示其在氧化应激后的帕金森病中发挥重要保护作用。 展开更多
关键词 帕金森病 prx
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氧化应激时Peroxiredoxin Ⅱ膜质转移对红细胞渗透脆性的影响 被引量:4
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作者 于佳斌 卢悦 +1 位作者 张津松 韩英浩 《生命科学研究》 CAS CSCD 2018年第4期271-276,共6页
为了探讨氧化应激时peroxiredoxinⅡ(PrxⅡ)膜质转移对红细胞渗透脆性的影响,检测了H_2O_2处理后红细胞渗透脆性的变化,并利用蛋白质免疫印迹法(Western-blot)检测了红细胞内PrxⅡ膜质转移情况,以及红细胞膜蛋白——带3蛋白(band 3)和... 为了探讨氧化应激时peroxiredoxinⅡ(PrxⅡ)膜质转移对红细胞渗透脆性的影响,检测了H_2O_2处理后红细胞渗透脆性的变化,并利用蛋白质免疫印迹法(Western-blot)检测了红细胞内PrxⅡ膜质转移情况,以及红细胞膜蛋白——带3蛋白(band 3)和血影蛋白(spectrin)的变化情况。研究结果显示,氧化应激时红细胞渗透脆性增加,红细胞内PrxⅡ从细胞膜转移至细胞质中,同时维持红细胞膜稳定、细胞骨架结构功能完整的相关蛋白质——band 3和spectrin在红细胞膜上表达量减少。实验结果证明氧化应激时红细胞内PrxⅡ发生膜质转移,引起维持红细胞膜稳定、细胞骨架结构功能完整的相关蛋白质band 3和spectrin表达量降低,导致红细胞渗透脆性增加。 展开更多
关键词 红细胞 渗透脆性 氧化应激(OS) PEROXIREDOXIN (prx ) 膜质转移
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