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碱性普鲁兰酶产生菌选育和发酵条件的研究 被引量:18
1
作者 马晓军 张晓君 +3 位作者 王锐 陈拓 杨玲 冯清平 《西北植物学报》 CAS CSCD 2002年第4期883-888,共6页
从儿童食品中分离筛选到 1株产碱性普鲁兰酶活性较高的菌株 ,编号为 SX- 1 2 ,初步鉴定为芽孢杆菌 Bacillussp.。研究了 SX- 1 2原生质体制备与再生最佳条件。其原生质体经紫外线诱变处理 ,选育出产碱性普鲁兰酶的高产菌株 SX- 1 2 C67... 从儿童食品中分离筛选到 1株产碱性普鲁兰酶活性较高的菌株 ,编号为 SX- 1 2 ,初步鉴定为芽孢杆菌 Bacillussp.。研究了 SX- 1 2原生质体制备与再生最佳条件。其原生质体经紫外线诱变处理 ,选育出产碱性普鲁兰酶的高产菌株 SX- 1 2 C67,酶活由出发菌株的 2 .42 U/m L提高到 6.87U/m L ,提高了约 1 .8倍。在此基础上对产酶条件进行了优化 ,优化后的最佳发酵培养基为 :可溶性淀粉 3% ,蛋白胨 1 .0 % ,酵母膏 0 .5% ,K2 HPO40 .2 % ,Mg SO4.7H2 O0 .0 5% ,Mn Cl2 0 .0 0 0 1 % ,最适 p H9.5,最适温度 40℃。初步研究了酶的部分性质 ,酶反应的最适p H、温度分别为 1 0 .0~ 1 0 .5和 55℃。在 55℃反应条件下 ,酶在 p H6.0~ 1 1 .0的范围内都具有一定的活性。 Ca2 +、Mn2 +、Mg2 +等离子是酶的激活剂 ,Zn2 +、Hg2 展开更多
关键词 碱性普鲁兰酶产生菌 选育 发酵条件 原生质体 制备 紫外诱变 产酶条件
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细菌原生质体融合育种技术及其应用进展 被引量:18
2
作者 王登宇 臧威 +3 位作者 孙剑秋 蒋本庆 王鹏 李铁 《中国酿造》 CAS 北大核心 2008年第4期1-6,共6页
原生质体融合技术是细菌遗传育种的有效方法之一,发展迅速,应用广泛。文中综述了亲本菌株选择性遗传标记方法、影响原生质体制备与再生因素、原生质体融合方法和条件。介绍了细菌原生质体融合技术在遗传育种中的应用,并展望了细菌原生... 原生质体融合技术是细菌遗传育种的有效方法之一,发展迅速,应用广泛。文中综述了亲本菌株选择性遗传标记方法、影响原生质体制备与再生因素、原生质体融合方法和条件。介绍了细菌原生质体融合技术在遗传育种中的应用,并展望了细菌原生质体融合技术的发展前景。 展开更多
关键词 原生质体融合 原生质体制备 原生质体再生 遗传育种
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油桐叶肉细胞原生质体分离及瞬时转化体系的建立 被引量:15
3
作者 谷战英 杨若楠 陈昊 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第1期46-53,共8页
【目的】探索油桐叶肉细胞原生质体分离的最适条件,建立油桐原生质体的遗传转化体系,使在油桐体内研究自身基因的功能成为可能。【方法】以油桐成熟叶片和组培苗幼叶为材料,通过酶解法成功分离得到油桐叶肉细胞的原生质体并确定最适分... 【目的】探索油桐叶肉细胞原生质体分离的最适条件,建立油桐原生质体的遗传转化体系,使在油桐体内研究自身基因的功能成为可能。【方法】以油桐成熟叶片和组培苗幼叶为材料,通过酶解法成功分离得到油桐叶肉细胞的原生质体并确定最适分离条件。在此基础上,以获得的原生质体为受体系统,建立PEG介导的油桐原生质体基因转化方法。【结果】原生质体分离结果表明,酶解时间对原生质体产量和活性的影响最大,其次是纤维素酶浓度,而离析酶浓度和甘露醇浓度对原生质体产量和活性的影响较小。以成熟叶片为材料分离原生质体的最适条件为纤维素酶浓度1.5%、离析酶浓度1%、甘露醇浓度0.6 mol·L-1、酶解时间12 h,以组培苗幼叶为材料分离原生质体的最适条件为纤维素酶浓度2%、离析酶浓度1%、甘露醇浓度0.7 mol·L-1、酶解时间6 h。为了建立油桐原生质体的瞬时转化体系,通过PEG介导法将拟南芥MGT6基因导入到油桐原生质体中,结果发现MGT6蛋白定位于原生质体质膜,与之前报道的研究结果一致,这表明本研究建立的油桐原生质体转化方法可成功将外源基因导入油桐原生质体并使其表达。【结论】建立油桐成熟叶片和组培苗幼叶叶肉细胞原生质体的高效分离方法,综合考虑取材的便利性和对后续原生质体培养的影响,建议以组培苗幼叶为材料分离原生质体,分离条件为纤维素酶浓度2%、离析酶浓度1%、甘露醇浓度0.7 mol·L-1、酶解时间6 h。在分离得到油桐叶肉细胞原生质体的基础上,本研究建立的PEG介导的原生质体遗传转化方法能以油桐叶肉细胞原生质体为受体,高效地将外源基因导入其中并使外源基因表达。本研究结果不仅可促进油桐基础研究的发展,在通过细胞融合和基因工程手段进行油桐种质创新方面也具有重要意义。 展开更多
关键词 油桐 原生质体制备 遗传转化 亚细胞定位
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高产纤维素酶菌株原生质体制备及再生条件 被引量:11
4
作者 李淼 曾柏全 冯金儒 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期174-180,共7页
研究青霉菌Penicillium Q5和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis K3原生质体制备与再生的最佳条件。采用酶解法制备了青霉菌和枯草芽孢杆菌的高质量的原生质体。试验对亲本菌株的菌丝生长,酶浓度,酶解时间和灭活时间进行了优化。亲本菌株Q5... 研究青霉菌Penicillium Q5和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis K3原生质体制备与再生的最佳条件。采用酶解法制备了青霉菌和枯草芽孢杆菌的高质量的原生质体。试验对亲本菌株的菌丝生长,酶浓度,酶解时间和灭活时间进行了优化。亲本菌株Q5,培养液中加入浓度0.5%甘氨酸和含量10%的蔗糖处理后,在质量浓度均为10 mg/mL的溶菌酶和蜗牛酶(1︰1)酶解作用下,35℃处理3 h,原生质体生成量达到最大值,为7.35×106cfu/mL;亲本菌株K3,用4 U/mL的青霉素处理,在1 mg/mL的溶菌酶作用下,35℃处理1 h,原生质体形成率与再生率的乘积达到最大值,此时K3原生质体量为1.46×107cfu/mL。青霉菌在65℃热灭活的时间为1 h,紫外灭活时间为3 min;枯草芽孢杆菌在65℃热灭活的时间是2.5 h,紫外灭活时间为5 min。这为后续原生质体融合选育具有抗逆性的高产纤维素酶菌株打下基础。 展开更多
关键词 青霉菌Q5 枯草芽孢杆菌K3 原生质体制备 原生质体再生 原生质体灭活
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原生质体诱变及融合选育那西肽高产菌株 被引量:10
5
作者 公维亮 薛正莲 +3 位作者 周扬 张勇 张奥 沈强 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期335-339,381,共6页
目的提高工业发酵那西肽生产水平,获得那西肽高产菌株。方法利用溶菌酶剥离菌体细胞壁制备原生质体,通过等离子(ARTP)诱变与双亲灭活原生质体融合技术选育那西肽高产菌株。结果通过对原生质体制备参数甘氨酸浓度,溶菌酶浓度以及酶解时... 目的提高工业发酵那西肽生产水平,获得那西肽高产菌株。方法利用溶菌酶剥离菌体细胞壁制备原生质体,通过等离子(ARTP)诱变与双亲灭活原生质体融合技术选育那西肽高产菌株。结果通过对原生质体制备参数甘氨酸浓度,溶菌酶浓度以及酶解时间优化,确定了甘氨酸最适浓度0.6%,溶菌酶最适浓度50mg/m L,酶解时间70min。通过ARTP诱变筛选出突变株AH-12产量提高18%。亲本最佳紫外灭活时间为4min,最佳热灭活条件为65℃水浴50min。对融合子进行摇瓶选育,得到了GSM-4,GSM-5两株效价提高15%以上菌株。结论利用原生质体诱变及融合方法可获得那西肽高产菌株。 展开更多
关键词 那西肽 原生质体制备 原生质体诱变 原生质体融合
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冬虫夏草原生质体制备与再生条件的研究 被引量:12
6
作者 郭成金 赵润 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第5期166-170,共5页
采用正交分析方法,对影响冬虫夏草菌株原生质体制备与再生的主要因素进行研究。结果表明,最佳条件组合为培养3d的菌丝体,在2.0%溶壁酶+1.0%蜗牛酶的酶液中,0.6mol/L的KCl作为原生质体制备的渗稳剂,0.6mol/L的甘露醇作为再生培养基的渗稳... 采用正交分析方法,对影响冬虫夏草菌株原生质体制备与再生的主要因素进行研究。结果表明,最佳条件组合为培养3d的菌丝体,在2.0%溶壁酶+1.0%蜗牛酶的酶液中,0.6mol/L的KCl作为原生质体制备的渗稳剂,0.6mol/L的甘露醇作为再生培养基的渗稳剂,32℃酶解2h。在此条件下,原生质体得率可达到2.98×108/ml,再生率可达到42.09×10-2。 展开更多
关键词 冬虫夏草 正交分析 原生质体制备 再生 渗稳剂
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斜卧青霉原生质体制备和再生的研究 被引量:9
7
作者 赵晨 易宗春 +1 位作者 荣龙 孙艳 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期18-21,共4页
研究了斜卧青霉原生质体制备和再生的条件,确定了培养方式、菌龄、渗透压稳定剂、酶的配比、酶解时间等因素对原生质体制备和再生的影响。最佳条件:菌丝体培养12h,用1%溶壁酶+1%纤维素酶+1%蜗牛酶的混合酶液酶解,将NaCl作为渗透压稳定剂... 研究了斜卧青霉原生质体制备和再生的条件,确定了培养方式、菌龄、渗透压稳定剂、酶的配比、酶解时间等因素对原生质体制备和再生的影响。最佳条件:菌丝体培养12h,用1%溶壁酶+1%纤维素酶+1%蜗牛酶的混合酶液酶解,将NaCl作为渗透压稳定剂,酶解时间为1.5h。在此条件下原生质体的形成量达到5.3×105个/mL,再生率为19.4%。 展开更多
关键词 斜卧青霉 原生质体制备 原生质体再生
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纳豆菌原生质体制备与再生条件的研究 被引量:10
8
作者 刘新梅 高宇 +3 位作者 赵静 李冰冰 刘朔 董明盛 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期231-236,共6页
研究了菌体培养时间、溶菌酶作用条件(酶作用温度、浓度和时间)对纳豆菌BNK菌株原生质体制备和再生的影响。在此基础之上,考察了不同再生培养基、渗透压稳定剂及原生质体保护剂对再生率的影响。确定了菌株BNK原生质体制备和再生最佳条件... 研究了菌体培养时间、溶菌酶作用条件(酶作用温度、浓度和时间)对纳豆菌BNK菌株原生质体制备和再生的影响。在此基础之上,考察了不同再生培养基、渗透压稳定剂及原生质体保护剂对再生率的影响。确定了菌株BNK原生质体制备和再生最佳条件为:菌体培养9h收集,0.8mg/ml溶菌酶,30℃作用40min制备原生质体,将原生质体液涂布于以甘露醇为渗透压稳定剂、添加有淀粉的PYG培养基中再生,此时原生质体制备率达98.2%,再生率为28.4%。 展开更多
关键词 纳豆菌 原生质体制备 再生
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红酵母原生质体制备和再生条件研究 被引量:7
9
作者 詹萍 苏龙 周乃东 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第3期1154-1155,1172,共3页
[目的]初步探讨红酵母原生质体制备和再生的条件。[方法]以红酵母为试材,研究渗透压稳定剂pH值、酶浓度、酶解时间、预处理时间4个因素对红酵母原生质体制备率和再生率的影响。[结果]pH值在6.5~7.0,原生质体的制备率和再生率... [目的]初步探讨红酵母原生质体制备和再生的条件。[方法]以红酵母为试材,研究渗透压稳定剂pH值、酶浓度、酶解时间、预处理时间4个因素对红酵母原生质体制备率和再生率的影响。[结果]pH值在6.5~7.0,原生质体的制备率和再生率随着渗透压稳定剂pH值的升高而上升。当酶浓度从0.2%上升到1.0%时,原生质体制备率上升较快,而原生质体再生率下降较慢。随着酶解时间的增加,原生质体的制备率逐渐增加,而原生质体的再生率逐渐下降。在5~15 min,原生质体制备率和再生率均随着预处理的时间的增加而降低。[结论]当渗透压稳定剂pH值为7.0,蜗牛酶酶浓度为1.0%,酶解时间为60 min,预处理时间为5 min时,原生质体的制备率和再生率能分别达到较高的值。 展开更多
关键词 红酵母 原生质体制备 原生质体再生
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草菇原生质体制备、再生条件的响应面法优化及诱变效应 被引量:8
10
作者 王金斌 李文 +4 位作者 张俊沛 赵妍 陈建中 祝子坪 唐雪明 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期4110-4119,共10页
为了提高草菇原生质体在筛选耐低温突变筛选的诱变效率,建立基于草菇原生质体制备产量及再生率的响应面模型,优化草菇原生质体制备体系。本研究以草菇V23为材料,利用Design-Expert 8.0.6软件进行二次回归分析对参数菌龄、酶的浓度、酶... 为了提高草菇原生质体在筛选耐低温突变筛选的诱变效率,建立基于草菇原生质体制备产量及再生率的响应面模型,优化草菇原生质体制备体系。本研究以草菇V23为材料,利用Design-Expert 8.0.6软件进行二次回归分析对参数菌龄、酶的浓度、酶解时间、酶解温度等进行了系统的优化研究。结果表明,溶壁酶的浓度为1.71%,酶解温度为31.4℃,菌丝体菌龄为3.42 d,酶解时间为3.21 h,草菇原生质体产量最高,达到2.57×107个/m L;用1.84%的溶壁酶在31.2℃条件下对菌龄为3.68 d的菌丝体酶解3.38 h,原生质体再生率最高,为14.1%。并利用紫外诱变和化学诱变技术对草菇原生质体进行了耐低温诱变初探,筛选获得5株抗冻能力提高的突变菌株。草菇V23原生质体产量和再生率的优化条件的建立,为提高草菇在遗传转化、基因组重排、基因编辑技术等后续分子遗传学操作实验打下了良好的基础。 展开更多
关键词 草菇 原生质体制备 原生质体再生 响应面分析法 诱变
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草菇原生质体制备、再生及转化研究 被引量:8
11
作者 王杰 林俊芳 +2 位作者 云慧芬 张凯 郭丽琼 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期119-121,共3页
用酶解法对草菇原生质体制备及再生条件进行了研究.结果表明:液体静置培养4 d的菌丝,以0.6 mol/L的甘露醇作渗透压稳定剂,溶壁酶质量浓度15 mg/mL,34℃下酶解3 h,原生质体制备率最高;草菇原生质体预培养16 h后涂布在再生培养基上,再生... 用酶解法对草菇原生质体制备及再生条件进行了研究.结果表明:液体静置培养4 d的菌丝,以0.6 mol/L的甘露醇作渗透压稳定剂,溶壁酶质量浓度15 mg/mL,34℃下酶解3 h,原生质体制备率最高;草菇原生质体预培养16 h后涂布在再生培养基上,再生率最高.同时,采用PEG法将潮霉素抗性基因转入草菇的原生质体中,经过抗性筛选,得到了具有潮霉素抗性的草菇转化子. 展开更多
关键词 草菇 原生质体制备 原生质体再生 原生质体转化
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平菇原生质体制备及再生培养研究 被引量:7
12
作者 沈爱喜 张诚 +1 位作者 涂寿兰 廖禺 《江西农业学报》 CAS 1998年第1期51-55,共5页
平菇菌丝原生质体的释放以菌龄4~6d的幼嫩菌丝,用2%Lywalzyme采用0.6MKCl为渗稳剂在pH值为5.5、温度为35℃、酶解2~2.5h生长较好,可达107个/mL,孢子释放原生质体在1.5%溶壁酶和1.5... 平菇菌丝原生质体的释放以菌龄4~6d的幼嫩菌丝,用2%Lywalzyme采用0.6MKCl为渗稳剂在pH值为5.5、温度为35℃、酶解2~2.5h生长较好,可达107个/mL,孢子释放原生质体在1.5%溶壁酶和1.5%纤维素酶混合作用,同样外界条件下原生质体转化率可达100%。原生质体再生以2号培养基在0.6M甘露醇的作用下,用载片悬浮滴式再生法,再生率可达12.3%。 展开更多
关键词 平菇 原生质体制备 原生质体再生
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一株小菇属天麻萌发菌原生质体的制备、再生和应用
13
作者 李宏敬 李锡琴 +2 位作者 粟忠祥 仇全雷 雷云霆 《陕西科技大学学报》 北大核心 2025年第1期58-66,共9页
小菇属真菌(Mycena spp.)遗传转化体系是研究其促进天麻种子萌发机制的重要基础,而其原生质体的制备和再生是该体系构建的必要条件.以小菇菌株MY004为实验材料,通过单因素分析和正交试验策略,探究其原生质体制备和再生的影响因素,构建... 小菇属真菌(Mycena spp.)遗传转化体系是研究其促进天麻种子萌发机制的重要基础,而其原生质体的制备和再生是该体系构建的必要条件.以小菇菌株MY004为实验材料,通过单因素分析和正交试验策略,探究其原生质体制备和再生的影响因素,构建小菇原生质体制备和再生体系.结果表明,在含10 mM MES和0.7 M甘露醇的酶解缓冲液(pH=6)中,小菇MY004菌丝被10 mg/mL真菌溶壁酶在24℃条件下酶解3 h,其原生质体的释放率较高;经液体再生培养基(pH=5)培养3天,其原生质体再生效率可达2%.利用该体系,高效地完成了含报告基因eGFP转基因小菇的菌株纯化.小菇原生质体制备和再生体系可用于小菇遗传转化体系的快速构建,也将为小菇与天麻互作分子机制的研究提供基础平台. 展开更多
关键词 小菇 原生质体制备 原生质体再生 转基因菌株纯化
尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型原生质体制备优化及再生性能 被引量:6
14
作者 贺薇 张佳诗 +2 位作者 张正坤 李启云 王金刚 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期158-163,共6页
唐菖蒲(Gladiolus hybridus Hort)根腐病是由尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型(Fusarium oxysporum f.sp.Gladioli)引起的真菌性病害。原生质体是研究尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型与唐菖蒲之间的互作关系的重要工具,试验以尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型... 唐菖蒲(Gladiolus hybridus Hort)根腐病是由尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型(Fusarium oxysporum f.sp.Gladioli)引起的真菌性病害。原生质体是研究尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型与唐菖蒲之间的互作关系的重要工具,试验以尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型为供试菌株,进行原生质体制备条件的优化与再生,明确培养基、菌龄、β-巯基乙醇预处理、酶选择以及酶解时间对原生质体产生的影响。试验结果表明:在PDB培养基中原生质体制备的最优条件为15μLβ-巯基乙醇预处理1 h,在5%崩溃酶溶液酶解3 h。在此条件下,12~14 h菌丝的原生质体产量可达到1.4×107个/m L,再生率为57.4%。 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型 原生质体制备 原生质体再生
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稻瘟病菌原生质体制备条件优化实验研究 被引量:6
15
作者 尹良芬 八重樫博志 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2011年第4期33-35,共3页
原生质体的制备一直是现代分子生物学研究的重要内容。以稻瘟病菌作为供试菌株,优化了其原生质体的制备条件。优化的原生质体制备条件包括:使用新鲜的菌丝进行接种;加入玻璃珠一起培养,通过振荡使菌丝体破碎分离以获得更多的生长点;菌... 原生质体的制备一直是现代分子生物学研究的重要内容。以稻瘟病菌作为供试菌株,优化了其原生质体的制备条件。优化的原生质体制备条件包括:使用新鲜的菌丝进行接种;加入玻璃珠一起培养,通过振荡使菌丝体破碎分离以获得更多的生长点;菌悬液继续加入新鲜培养液进行培养;原生质体沉淀时选择3 000r/min离心10min,保证最大限度地收集原生质体。实验证明,通过这4个条件优化后,原生质体的产量有了极大的提高,每毫升酶液可制备10 8~109个原生质体。 展开更多
关键词 原生质体制备 稻瘟病菌 原生质体产量
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广藿香原生质体制备、培养与融合技术优化研究 被引量:6
16
作者 严寒静 李磊 +1 位作者 张宏意 何梦玲 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1310-1318,共9页
为建立高效稳定的广藿香原生质体培养与融合技术体系,该研究以广藿香愈伤组织悬浮细胞为材料,研究了原生质体制备的酶解条件和培养方法、细胞密度、激素种类和浓度等因素对原生质体培养的影响,并通过测定融合产物直径确立融合细胞筛选范... 为建立高效稳定的广藿香原生质体培养与融合技术体系,该研究以广藿香愈伤组织悬浮细胞为材料,研究了原生质体制备的酶解条件和培养方法、细胞密度、激素种类和浓度等因素对原生质体培养的影响,并通过测定融合产物直径确立融合细胞筛选范围,进一步研究聚乙二醇浓度、细胞密度、融合时间及融合液加入量等因素对原生质体融合的影响。结果表明:制备原生质体的适宜条件为pH5.8,酶解温度25℃;原生质体培养以铵盐减半的MS_1培养基进行海藻酸钠包埋、激素选用0.2 mg·L^(-1)NAA、2.0 mg·L^(-1)6-BA,培养密度2.0×10~5个·mL^(-1)、蔗糖添加量1.0%、酸水解酪蛋白500 mg·L^(-1)的条件下原生质体分裂频率、植板率均较高,且开始分裂时间和细胞团形成时间都较短;双细胞融合产物筛选范围为69.33~87.35μm;以40%PEG 6000化学促融30 min、加入0.5倍体积的融合液、细胞密度2.0×10~5个·mL^(-1)的条件进行原生质体融合,聚合率可达57.19%;获得的融合产物经海藻酸钠包埋培育2个月后可观察到再生愈伤组织。 展开更多
关键词 广藿香 聚乙二醇 原生质体制备 原生质体融合 新品种选育
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基于PEG介导原生质体转化构建粉红聚端孢荧光标记 被引量:7
17
作者 戴蓬博 梁晓飞 +1 位作者 张荣 孙广宇 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期90-97,共8页
粉红聚端孢是多种植物的重要病原菌。本研究通过酶解粉红聚端孢幼嫩菌丝细胞壁获得原生质体,用PEG介导原生质体转化将携带GFP基因和博来霉素抗性基因的外源DNA随机插入粉红聚端孢基因组,共获得博来霉素抗性菌株90株,转化效率达18个/μg... 粉红聚端孢是多种植物的重要病原菌。本研究通过酶解粉红聚端孢幼嫩菌丝细胞壁获得原生质体,用PEG介导原生质体转化将携带GFP基因和博来霉素抗性基因的外源DNA随机插入粉红聚端孢基因组,共获得博来霉素抗性菌株90株,转化效率达18个/μg。选取22株转化子荧光观察,发现均可表达荧光,菌株间荧光强度不同,其中10株转化子荧光表达较强。与野生型相比,突变菌株TR45的菌落生长、产孢量和致病力等生物学特性均未改变,在不含博来霉素的培养皿中继代培养10代荧光仍能稳定表达。本研究构建的高效原生质体制备和PEG介导粉红聚端孢遗传转化方法,可用于该菌基因功能研究,绿色荧光标记菌株可用于病菌侵入、田间监测、侵染循环等发生规律研究。 展开更多
关键词 遗传转化 绿色荧光蛋白 原生质体制备 苹果 心腐病
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葡萄愈伤组织制备原生质体的影响因素研究 被引量:7
18
作者 俞超 杨潇 +2 位作者 王忠华 戚佳俊 吴月燕 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期433-436,共4页
【目的】为了获得高质量的葡萄原生质体,【方法】以"鄞红"葡萄茎段愈伤组织为材料,对葡萄原生质体制备过程中的若干影响因子,如酶解液成分、甘露醇浓度、酶解时间、离心条件等方面进行了研究。【结果】0.5 mol.L-1的甘露醇+1... 【目的】为了获得高质量的葡萄原生质体,【方法】以"鄞红"葡萄茎段愈伤组织为材料,对葡萄原生质体制备过程中的若干影响因子,如酶解液成分、甘露醇浓度、酶解时间、离心条件等方面进行了研究。【结果】0.5 mol.L-1的甘露醇+1%纤维素酶+0.025%~0.05%果胶酶为最佳的酶解液组成;酶解14 h、120×g离心3 min条件下原生质体数量和质量最佳。【结论】研究获得的高质量葡萄原生质体,为下一步的植株再生及葡萄品种遗传改良提供了良好的材料。 展开更多
关键词 葡萄 愈伤组织 原生质体制备 影响因素
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杏鲍菇的菌株筛选与原生质体制备条件优化 被引量:7
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作者 董汪洋 王郑隆 +5 位作者 杨云乔 夏丽丽 王璐 张东旭 柯乐芹 肖建中 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期782-786,共5页
杏鲍菇是一种极具开发潜力的优质食用菌。通过筛选获得一株生长较快的杏鲍菇菌株,经条件优化,获得了最佳的原生质体制备条件。制备原生质体的最佳条件为:p H 5.5、酶解时间3 h、酶解温度37℃、6mol·L-1甘露醇为稳渗剂、3%蜗牛酶和1... 杏鲍菇是一种极具开发潜力的优质食用菌。通过筛选获得一株生长较快的杏鲍菇菌株,经条件优化,获得了最佳的原生质体制备条件。制备原生质体的最佳条件为:p H 5.5、酶解时间3 h、酶解温度37℃、6mol·L-1甘露醇为稳渗剂、3%蜗牛酶和1%纤维素酶、菌龄3 d。在最优条件下,原生质体产量达到6.7×104个·m L-1。研究结果为进一步开展杏鲍菇菌株的紫外诱变和原生质体融合选育工作奠定了重要的技术基础,可为杏鲍菇高产菌株选育和应用提供参考依据。 展开更多
关键词 杏鲍菇 筛选 原生质体制备 条件优化
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“红颜”草莓原生质体制备及瞬时转化体系的建立 被引量:7
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作者 杜小云 王震 +2 位作者 王翠华 曾弓箭 沈祥陵 《生物资源》 CAS 2019年第6期532-538,共7页
为探索“红颜”草莓悬浮细胞系原生质体提取的最优条件,并建立“红颜”草莓原生质体瞬时转化体系,以“红颜”草莓悬浮细胞为材料,对酶液组成、酶解温度、酶解方式进行研究。用PEG介导的瞬时转化法将标记基因GFP转化到“红颜”草莓原生... 为探索“红颜”草莓悬浮细胞系原生质体提取的最优条件,并建立“红颜”草莓原生质体瞬时转化体系,以“红颜”草莓悬浮细胞为材料,对酶液组成、酶解温度、酶解方式进行研究。用PEG介导的瞬时转化法将标记基因GFP转化到“红颜”草莓原生质体中。结果显示:以“红颜”草莓悬浮细胞系作为分离材料,酶液组合为CPW中含有0.5%PVP+0.1%MES+1%纤维素酶+0.5%离析酶+0.01%半纤维素酶+0.9 mol/L甘露醇,在低速(50 r/min)恒温(31℃)震摇下进行酶解反应,酶解10 h时,达到“红颜”草莓原生质体最佳分离效果,每克鲜重产量可得原生质体6×108个,活力值可达93.0%。PEG介导法成功将含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的植物表达载体转化“红颜”草莓悬浮细胞原生质体,转化效率达44%。通过实验筛选得到“红颜”草莓悬浮细胞原生质体的最佳制备条件,建立“红颜”草莓悬浮细胞原生质体的瞬时转化体系,为进一步开展“红颜”草莓功能基因及合成生物学研究奠定基础。 展开更多
关键词 “红颜”草莓 悬浮细胞系 原生质体制备 瞬时转化体系
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