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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒结构和非结构蛋白表达研究 被引量：25
1
作者 卢静 李川 +8 位作者 张福顺 芜为 张全福 张黎 王涛 王芹 仇佩虹 梁米芳 李德新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期515-520,共6页
发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)是我国2010年新发现的新布尼亚病毒,可导致人类严重发热伴血小板减少综合征。SFTS新布尼亚病毒全基因组已解析,但病毒分子生物学结构蛋白特征及功能尚需更多研究。本文通过蔗糖密度梯度离心确... 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)是我国2010年新发现的新布尼亚病毒,可导致人类严重发热伴血小板减少综合征。SFTS新布尼亚病毒全基因组已解析,但病毒分子生物学结构蛋白特征及功能尚需更多研究。本文通过蔗糖密度梯度离心确定发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(HB29株)病毒颗粒的沉降密度及超离纯化条件,得出该病毒颗粒在蔗糖中的沉降密度为1.135g/mL。利用PCR方法扩增SFTSV病毒株HB29株病毒RNA聚合酶(RdRp)、糖蛋白前体蛋白(M)、包膜糖蛋白(Gn)、包膜糖蛋白(Gc)、核蛋白(NP)及非结构蛋白(NSs)的编码区基因片段,分别克隆入真核表达载体pcDNA5/FRT或VR1012,在293T细胞上获得上述基因表达。通过SDS-PAGE分析纯化病毒颗粒和重组蛋白,并通过免疫印迹(Western blotting)和间接免疫荧光(IFA)确定蛋白活性和分子量。本研究结果将有利于对新布尼亚病毒分子生物学特征的认识,为后期研究提供基础。 展开更多
关键词 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 病毒颗粒沉降密度 蛋白表达
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乳酸钠对猪背最长肌中蛋白质表达的影响 被引量：4
2
作者 董庆利 姚远 +1 位作者 张岩 Aclaoha E C Ihe kwaba 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期199-204,共6页
为探讨添加乳酸钠(NaL)对猪肉蛋白表达和稳定性的影响,研究选用新鲜猪背最长肌为研究对象,不同浓度的乳酸钠(NaL)溶液(1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%和30%)浸泡样品浸泡5 h后,应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和差示扫描量热(DSC)分别... 为探讨添加乳酸钠(NaL)对猪肉蛋白表达和稳定性的影响,研究选用新鲜猪背最长肌为研究对象,不同浓度的乳酸钠(NaL)溶液(1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%和30%)浸泡样品浸泡5 h后,应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和差示扫描量热(DSC)分别用于研究蛋白质表达和稳定性。结果表明,与双蒸水对照相比,NaL对肌浆蛋白的分子变化基本无影响,但高浓度的NaL溶液(10%、20%和30%)影响肌原纤维蛋白中的肌动蛋白(43 kD)和肌球蛋白重链(190 kD)的表达;同时,高浓度的NaL导致肌球蛋白和肌动蛋白等变性温度降低。因此,NaL的添加影响猪背最长肌中蛋白质的表达和稳定性,但低浓度NaL用于肉类防腐剂时对肉类蛋白的影响较小。 展开更多
关键词 乳酸钠 猪背最长肌 蛋白表达
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酯酶D的表达纯化和激活剂筛选
3
作者 岑雪艳 宋嫚 +4 位作者 李梓灵 贾晓悦 张柔 张霓 陈新鹏 《湖北师范大学学报（自然科学版）》 2023年第2期15-19,共5页
酯酶D(Esterase D,ESD)在解毒过程中起重要作用,在临床上经常是癌症和遗传疾病的生物标志物,在多种疾病中其活性降低。提高ESD的活性是治疗相关疾病的一种有效策略,但是目前还没有该蛋白高效的小分子激活剂。将构建好的ESD表达质粒转化... 酯酶D(Esterase D,ESD)在解毒过程中起重要作用,在临床上经常是癌症和遗传疾病的生物标志物,在多种疾病中其活性降低。提高ESD的活性是治疗相关疾病的一种有效策略,但是目前还没有该蛋白高效的小分子激活剂。将构建好的ESD表达质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中并诱导表达,通过镍离子亲和层析方法得到高活性的ESD.通过检测多种小分子对ESD活性的影响,筛选出对ESD具有激活作用的一种小分子—Dolutegravir.分子对接计算结果显示,Dolutegravir与人ESD的最低结合自由能为-8.9 kcal/mol,结合的活性位点为Asn-133、Pro-140、Tyr-166和Lys-162残基。筛选ESD的小分子激活剂,不仅有助于阐明ESD的激活机理,还可以为后面的药物开发作参考。 展开更多
关键词 ESD 蛋白质表达 蛋白质纯化 分子对接 激活剂
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苯并[a]芘(BaP)对褐菖鲉(Sebasticus marmoratus)肝CYP1A1酶活性、基因表达及蛋白表达的影响 被引量：3
4
作者 孙文静 王晓艳 +2 位作者 祁鹏志 张建设 吴常文 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期897-903,共7页
为了了解苯并[a]芘(BaP)对鱼类细胞色素P4501A1(CYP1A1)表达的影响,以褐菖鲉(Sebasticus marmoratus)为实验材料,采用体内实验,研究其在经过不同浓度(0.1、1、10、20、50mg/kg鱼体重量)的BaP诱导后,鱼体肝脏研究CYP1A1基因表达的情况,... 为了了解苯并[a]芘(BaP)对鱼类细胞色素P4501A1(CYP1A1)表达的影响,以褐菖鲉(Sebasticus marmoratus)为实验材料,采用体内实验,研究其在经过不同浓度(0.1、1、10、20、50mg/kg鱼体重量)的BaP诱导后,鱼体肝脏研究CYP1A1基因表达的情况,筛选出后续时间-效应实验中BaP注射的最佳浓度,研究BaP诱导6h、12h、1d、3d、7d后(质量浓度为20mg/kg鱼体重量)鱼体肝脏CYP1A1酶活性、基因表达和蛋白表达的情况。结果表明:剂量-效应实验中,20mg/kg鱼体重量为最佳浓度,此浓度下,基因表达在各组中变化最显著。时间-效应实验中,较空白对照组而言,染毒6h、12h和1d后,EROD酶活性显著增加。3d后开始下降,与对照组相比变化不大,7d后酶活性又发生上调。半定量RT-PCR结果表明,各染毒组与对照组相比,CYP1A1基因表达量都发生了上调,呈现先上升后下降的趋势。其中,6h和12h组相对表达量极显著增加,1d后开始下降且与3d和7d组相比变化不明显。Western blot结果表明,蛋白表达量在染毒12h后表现出显著的诱导效应,随着时间的延长略有回落,但与对照组相比仍有显著性差异。研究表明:BaP对褐菖鲉CYP1A1具有较强的诱导作用。一定质量浓度的BaP注射于褐菖鲉不同的时间后,能诱导褐菖鲉活体EROD酶活性、CYP1A1基因m RNA表达及蛋白表达,并随着时间的延长呈现先诱导后抑制的趋势。这说明BaP作为诱导剂对CYP1A1酶活性和蛋白表达的作用机制可能与调控CYP1A1的转录水平有关。 展开更多
关键词 苯并[a]芘(BaP) 褐菖鲉 CYP1A1 酶活性 基因表达 蛋白表达
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人外周血CD8^+T细胞Runx3的基因克隆及其原核表达 被引量：2
5
作者 李雅贞 王胜军 +5 位作者 石燕 戴晓莉 彭素芳 苏兆亮 邵启祥 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期107-110,共4页
目的:克隆人Runx3基因全长编码区的cDNA,进行鉴定和测序分析,并利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人Runx3基因全长序列,为从转录水平探讨Runx3基因与免疫相关性疾病以及肿瘤发生发展的关系奠定基础。方法:MACS分离外周CD8+T细胞;... 目的:克隆人Runx3基因全长编码区的cDNA,进行鉴定和测序分析,并利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人Runx3基因全长序列,为从转录水平探讨Runx3基因与免疫相关性疾病以及肿瘤发生发展的关系奠定基础。方法:MACS分离外周CD8+T细胞;采用RT-PCR方法从人外周血CD8+T细胞获得Runx3基因的cDNA,并连接pMD19-T载体导入大肠埃希菌DH5α,选择阳性克隆,应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。利用PCR技术从克隆载体pMD19-T/Runx3获得人Runx3的全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pQE30/Runx3;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌M15,测序鉴定后经IPTG30℃诱导4h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白并进行Western blot鉴定。结果:扩增获得的Runx3基因CDS区全长1248bp,编码415个氨基酸残基,与GenBank中发表的序列完全一致。成功构建了原核表达载体pQE30/Runx3,并在工程菌M15中获得大量表达.结论:获得了人Runx3基因的克隆,并成功原核表达和制备出人Runx3融合蛋白。 展开更多
关键词 RUNX3基因 CDNA克隆 RT—PCR 原核表达
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葡萄穗霉中β-甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表达及酶学性质 被引量：9
6
作者 杨家兴 王华明 路福平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1242-1255,共14页
【目的】以黑曲霉(Aspergillus niger)为宿主菌来表达葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)中的β-甘露聚糖酶(β-mannanase)基因。【方法】通过对葡萄穗霉全基因组进行比对分析,获得编码β-甘露聚糖酶基因s16942和s331的序列信息,通过设... 【目的】以黑曲霉(Aspergillus niger)为宿主菌来表达葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)中的β-甘露聚糖酶(β-mannanase)基因。【方法】通过对葡萄穗霉全基因组进行比对分析,获得编码β-甘露聚糖酶基因s16942和s331的序列信息,通过设计引物,PCR扩增得到基因s16942和s331,连接到载体pGm上,并转化到黑曲霉中,获得的转化子经过amdS二筛平板复筛,测序验证,得到高效表达此基因的工程菌株G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331。【结果】SDS-PAGE检测结果显示,G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331表达的蛋白分子量大小分别约为48 kDa和60 kDa,且阴性对照中没有此条带。粗酶液的酶学性质表明,G1-p Gm-s16942表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为60°C,最适反应pH为7,粗酶液的酶活最高达521 U/mL;G1-p Gm-s331表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为50°C,最适反应pH为7,粗酶液的酶活最高达84 U/mL。【结论】本研究首次将葡萄穗霉的β-甘露聚糖酶基因转化到黑曲霉中并成功表达,并且具有较高的活性。 展开更多
关键词 Β-甘露聚糖酶 葡萄穗霉 黑曲霉 遗传转化 重组蛋白表达
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动态观察红藻氨酸致痫大鼠海马神经细胞凋亡与wtp53表达的意义 被引量：6
7
作者 沈雪莉 柳忠兰 刘冰 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第9期1-3,共3页
目的 :探讨红藻氨酸 (KA)致痈大鼠海马神经细胞凋亡与野生型p5 3(wtp5 3)蛋白表达的关系。方法 :采用KA诱导癫痫发作大鼠模型。以TUNEL方法标记DNA片段 ,原位检测凋亡细胞 ;免疫组化SP法检测wtp5 3蛋白。结果 :注射KA 72h后 ,癫痫发作... 目的 :探讨红藻氨酸 (KA)致痈大鼠海马神经细胞凋亡与野生型p5 3(wtp5 3)蛋白表达的关系。方法 :采用KA诱导癫痫发作大鼠模型。以TUNEL方法标记DNA片段 ,原位检测凋亡细胞 ;免疫组化SP法检测wtp5 3蛋白。结果 :注射KA 72h后 ,癫痫发作大鼠海马CA1区凋亡神经细胞达高峰及wtp5 3蛋白表达在 2 4h大量出现 ;wtp5 3蛋白表达与细胞凋亡呈正相关。结论 :癫痫神经细胞凋亡与wtp5 3表达密切相关 ;痫性发作使wtp5 3表达上调 ,从而诱导神经细胞凋亡。 展开更多
关键词 癫痫 神经细胞凋亡 野生型p53表达 鼠 红藻氨酸
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高温预处理对藏族摔跤运动员HSP70表达及健康体适能的影响 被引量：2
8
作者 陈婷 李绪稳 《南京体育学院学报（自然科学版）》 2016年第5期27-31,共5页
目的：探讨四周高温预处理对藏族古典式摔跤运动员血液白细胞HSP70蛋白表达及健康体适能的影响。方法：选取藏族男性摔跤运动员15名，进行四周高温预处理，高温环境为桑拿，温度设定（46±1）℃，湿度85％～90％，每次高温预处理1h... 目的：探讨四周高温预处理对藏族古典式摔跤运动员血液白细胞HSP70蛋白表达及健康体适能的影响。方法：选取藏族男性摔跤运动员15名，进行四周高温预处理，高温环境为桑拿，温度设定（46±1）℃，湿度85％～90％，每次高温预处理1h，每周三次（共十二次）。在四周高温预处理前后，于安静时分别测试藏族摔跤运动员健康体适能相关指标，并采集肘静脉血，采用WB法检测受试者血液白细胞HSP70蛋白表达。结果：进行高温预处理后，藏族摔跤运动员体重（P〈0．05），体重指数BMI（P〈0．05），克托莱指数（P〈0．05）较安静时均显著降低，台阶指数极显著增加（P〈0．01）。其余指标包括体脂百分比、肺活量、肺活量体重指数、收缩压、舒张压、握力水平、俯卧撑次数、立定跳远和坐位体前屈距离均无显著性差异。同时，高温预处理后受试者血液白细胞HSP70蛋白表达较安静时显著增加（P〈0．05），且HSP70表达与台阶指数数值呈显著正相关（R=0．49，P〈0．05）。结论：四周高温预处理可快速减轻藏族摔跤运动员体重，增加台阶指数，提高心肺耐力，上调受试者血液白细胞HSP70蛋白表达。高温预处理对藏族摔跤运动员心肺耐力的提高与HSP70蛋白表达上调相关。 展开更多
关键词 高温预处理 血液HSP70蛋白 藏族摔跤运动员 健康体适能
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真姬菇在高温胁迫下的差异表达蛋白分析 被引量：2
9
作者 刘琳 贾培培 +2 位作者 卢伟东 郭奇林 郭立忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期142-147,共6页
采用双向电泳分析Tris-饱和酚法获得的真姬菇菌丝体全蛋白,利用PDQuest8.0软件分析双向电泳图谱,比较最适温度(25℃)和高温胁迫条件下(42℃)真姬菇菌丝体蛋白的表达差异,筛选出与高温胁迫相关的蛋白,并对获得的差异蛋白进行基质辅助激... 采用双向电泳分析Tris-饱和酚法获得的真姬菇菌丝体全蛋白,利用PDQuest8.0软件分析双向电泳图谱,比较最适温度(25℃)和高温胁迫条件下(42℃)真姬菇菌丝体蛋白的表达差异,筛选出与高温胁迫相关的蛋白,并对获得的差异蛋白进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果显示,共鉴定7个蛋白点中,Spa2同源结构域的表达量下调,DEHA2G15532p、肽酶M76家族、HSP70、SNF2家族的DNA修复蛋白、细胞色素p450及AM域家族和锌指蛋白的混合物的表达量上调。这些蛋白参与了信号转导、蛋白处理、DNA修复等多种抗逆反应生理过程。 展开更多
关键词 真姬菇 双向电泳(2-DE) 高温胁迫 差异蛋白 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)
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