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树突表达特异性7跨膜蛋白促进甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制
1
作者 宁宁 宋业青 +1 位作者 颜艺超 张雁凯 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第7期1466-1469,共4页
目的观察树突表达特异性7跨膜蛋白(DCSTAMP)对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响, 并探讨其机制。方法在基因表达谱交互式分析平台(GEPIA)中分析DCSTAMP在甲状腺乳头状癌组织中的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和... 目的观察树突表达特异性7跨膜蛋白(DCSTAMP)对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响, 并探讨其机制。方法在基因表达谱交互式分析平台(GEPIA)中分析DCSTAMP在甲状腺乳头状癌组织中的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测甲状腺乳头状癌细胞系KTC-1、FTC-133及甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1中DCSTAMP表达的差异;在KTC-1和FTC-133细胞中分别转染过表达和敲低质粒及其对照, 构建DCSTAMP过表达和敲低细胞模型;过表达组通过细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖检测试剂盒检测DCSTAMP基因过表达后对增殖的影响;蛋白印迹法验证过表达后对细胞核增殖抗原(Ki-67)蛋白、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响;敲低组通过细胞划痕、侵袭测定实验(Transwell)实验检测DCSTAMP基因敲低后对迁移、侵袭的影响;蛋白印迹法验证敲低后对神经钙黏着蛋白(NCAD)、磷酸化蛋白激酶B蛋白(p-Akt)、总蛋白激酶B蛋白(t-Akt)表达的影响;两样本均数比较采用成组配对t检验分析。结果 RT-qPCR和Western blot结果均显示DCSTAMP基因在甲状腺乳头状癌细胞KTC-1、FTC-133中的表达高于甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1(RT-qPCR:DCSTAMP基因在Nthy-ori 3-1、KTC-1、FTC-133细胞中mRNA相对表达量分别为1.020±0.202、17.350±3.326、8.684±0.030, Nthy-ori 3-1与KTC-1比较:t=4.901, P<0.05;Nthy-ori 3-1与FTC-133比较:t=37.460, P<0.01;Western blot:DCSTAMP基因在Nthy-ori 3-1、KTC-1、FTC-133细胞中蛋白相对表达量分别为1.000±0.009、3.227±0.444、3.367±0.073, Nthy-ori 3-1与KTC-1比较:t=9.628, P<0.01;Nthy-ori 3-1与FTC-133比较:t=55.580, P<0.01);KTC-1、FTC-133细胞中DCSTAMP过表达组细胞增殖速度高于对照组(KTC-1对照组与过表达组第3天相对增殖速度:0.215±0.010:0.397±0.029, t=6.198, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组第3天相对增殖速度:0.350± 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 树突表达特异性7跨膜蛋白 丝裂原活化蛋白激酶通路 蛋白激酶b磷酸化
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SETD5介导AKT1磷酸化调控结肠癌细胞的迁移和5-FU敏感性
2
作者 黄开禹 史建国 程勇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期586-591,共6页
目的:探讨含SET结构域蛋白5(SETD5)对结肠癌细胞增殖、迁移和对5-氟尿嘧啶(5-FU)药物敏感性的影响及机制。方法:常规培养结肠癌细胞,用Lipofectamine 2000将siSETD5-NC、si-SETD5-1~3质粒转染至HT-29细胞中,将其分为对照组(未处理)、si-... 目的:探讨含SET结构域蛋白5(SETD5)对结肠癌细胞增殖、迁移和对5-氟尿嘧啶(5-FU)药物敏感性的影响及机制。方法:常规培养结肠癌细胞,用Lipofectamine 2000将siSETD5-NC、si-SETD5-1~3质粒转染至HT-29细胞中,将其分为对照组(未处理)、si-SETD5-NC组、si-SETD5组和si-SETD5+SC79组,si-SETD5+SC79组HT-29细胞转染质粒的同时用10µmol/L SC79处理。qPCR法检测NCM460、HT-29和LoVo细胞中SETD5 mRNA表达,流式细胞术、细胞划痕法、WB法和CCK-8法分别检测各组HT-29细胞的凋亡情况、迁移能力、相关蛋白的表达,以及对5-FU的敏感性。结果:SETD5 mRNA在HT-29、LoVo细胞中均呈高表达(均P<0.01)。在HT-29细胞中成功地敲减了SETD5 mRNA(P<0.01)。敲减SETD5 mRNA可明显抑制HT-29细胞的增殖活性(P<0.01)、迁移能力(P<0.01)、相关蛋白(SETD5、p-PI3K、p-AKT1、p-mTOR蛋白)的表达(均P<0.01)、促进细胞凋亡(P<0.01),且提高其对5-FU的敏感性(P<0.01),这些作用均可被AKT激活剂SC79部分阻挡(P<0.05或P<0.01)。结论:SETD5在HT-29、LoVo细胞中高表达,SETD5通过PI3K/AKT1通路促进结肠癌HT-29细胞的增殖、迁移,且降低其对5-FU的敏感性,SETD5是结肠癌临床诊断、治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 结肠癌 含有SET结构域蛋白5 蛋白激酶b磷酸化 增殖 迁移 5-氟尿嘧啶 耐药
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当归挥发油对PC12细胞缺血缺氧损伤后自噬和相关信号通路的影响 被引量：13
3
作者 石皓 刘凯 +3 位作者 王昕 罗建云 张安平 朱丽娟 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期445-448,共4页
目的研究当归挥发油对PC12细胞缺血缺氧损伤后自噬和相关信号通路的影响。方法将高分化PC12细胞分为5组:空白组、模型组和低、中、高3个剂量实验组。除空白组外,其余各组用含10 mmol·L^(-1)连二亚硫酸钠(Na2S2O4)的无糖培养基缺氧... 目的研究当归挥发油对PC12细胞缺血缺氧损伤后自噬和相关信号通路的影响。方法将高分化PC12细胞分为5组:空白组、模型组和低、中、高3个剂量实验组。除空白组外,其余各组用含10 mmol·L^(-1)连二亚硫酸钠(Na2S2O4)的无糖培养基缺氧缺糖损伤1 h;同时,低、中、高3个剂量实验组加入终浓度分别为6. 25,12. 50,25. 00μg·m L^(-1)当归挥发油,复氧48 h。用噻唑蓝比色法检测当归挥发油对细胞增殖的影响,以免疫蛋白印迹法检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3B(LC3B-Ⅱ)、泛素结合蛋白P62(P62)]和自噬相关信号通路[磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),磷酸化动物雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR),磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(p-P70S6K)]蛋白的表达。结果空白组、模型组和低、中、高3个剂量实验组的细胞存活率分别为(100. 00±0. 00)%,(56. 37±4. 93)%,(69. 78±1. 56)%,(78. 35±2. 01)%和(89. 77±3. 03)%;模型组与空白组相比或者低、中、高剂量3个实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。空白组、模型组和高剂量实验组的LC3B-Ⅱ相对表达量分别为0. 30±0. 04,0. 56±0. 05和0. 42±0. 03;这3组的P62的相对表达量分别为0. 63±0. 03,0. 17±0. 01和0. 40±0. 01;模型组与空白组相比或者高剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P <0. 01或P <0. 05,P <0. 01)。同时,p-Akt、p-m TOR与p-P70S6K的表达趋势与LC3B-Ⅱ的结果一致。结论当归挥发油可能通过激活Akt/m TOR信号转导通路抑制缺血缺氧损伤引起的PC12细胞自噬,保护受损细胞。 展开更多
关键词 当归挥发油 PC12细胞 缺血缺氧损伤 自噬 磷酸化蛋白激酶b/磷酸化动物雷帕霉素靶蛋白信号转导通路
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PTEN及P-ERK和P-AKT在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义 被引量：13
4
作者 刘东亮 马秀岚 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS 北大核心 2014年第4期238-242,245,共6页
目的:检测蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)和磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)在人类中耳胆脂瘤上皮的表达情况及其相关性,探讨它们在中耳胆脂瘤形成机制中的重要作用。方法:应用免疫组织化学SABC法检测40例中耳胆... 目的:检测蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)和磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)在人类中耳胆脂瘤上皮的表达情况及其相关性,探讨它们在中耳胆脂瘤形成机制中的重要作用。方法:应用免疫组织化学SABC法检测40例中耳胆脂瘤标本及15例正常皮肤标本中PTEN、P-AKT和P-ERK蛋白的表达量及定位。应用Western blot免疫印迹法检测其中20例中耳胆脂瘤标本和10例正常皮肤标本PTEN、P-AKT和P-ERK蛋白以及内参GAPDH的表达量。结果:①免疫组织化学显示,PTEN在胆脂瘤和正常皮肤中的细胞核及胞质均有着色。核PTEN在胆脂瘤的阳性表达率明显低于正常皮肤,两者差异具有统计学意义(P<0.01);质PTEN在胆脂瘤的阳性表达率明显低于正常皮肤,两者差异具有统计学意义(P<0.01);PAKT主要在细胞质着色,胆脂瘤中的阳性表达率明显高于正常皮肤,两者差异具有统计学意义(P<0.01);PERK主要在细胞核着色,胆脂瘤中的阳性表达率明显高于正常皮肤,两者差异亦具有统计学意义(P<0.01)。在中耳胆脂瘤标本中,PTEN分别与P-AKT、P-ERK蛋白的表达之间呈显著负相关(P<0.01)。②Western blot免疫印迹法检测显示:胆脂瘤中PTEN的表达量明显少于正常皮肤中的表达量;而P-AKT和P-ERK在胆脂瘤中的表达量明显多于它们在正常皮肤中的表达量。结论:PTEN、P-AKT和P-ERK蛋白在中耳胆脂瘤中的异常表达可能与胆脂瘤上皮的高度增殖和抗凋亡密切相关。PTEN表达缺失导致其抑制作用减弱,一方面使P-AKT表达过度,继而引起胆脂瘤上皮细胞凋亡受抑制;同时也使P-ERK表达过度,导致胆脂瘤上皮细胞增殖加强。 展开更多
关键词 胆脂瘤 中耳 蛋白酪氨酸磷酸酶基因 磷酸化蛋白激酶b 磷酸化细胞外信号调节激酶 信号传导通路
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