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二硫键的形成与蛋白质的氧化折叠 被引量:15
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作者 许成钢 范晓军 +1 位作者 付月君 梁爱华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第S1期259-264,共6页
二硫键在稳定蛋白质构象和保持蛋白质活性方面起重要作用,但是天然二硫键的形成是许多蛋白正确折叠中的限速步骤。随着对二硫键异构酶和折叠中间体研究的深入,富含二硫键蛋白的折叠机制逐渐为人们所认识。本文着重从体内二硫键的形成和... 二硫键在稳定蛋白质构象和保持蛋白质活性方面起重要作用,但是天然二硫键的形成是许多蛋白正确折叠中的限速步骤。随着对二硫键异构酶和折叠中间体研究的深入,富含二硫键蛋白的折叠机制逐渐为人们所认识。本文着重从体内二硫键的形成和体外蛋白质的氧化折叠两个方面对二硫键蛋白的折叠机制及其在基因工程中的实践应用等做一综述,对深入研究提高富合二硫键的重组活性蛋白质的产率起重要指导意义。 展开更多
关键词 二硫键 二硫键形成相关蛋白(Dsb蛋白) 二硫键异构酶 氧化折叠
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玉米蛋白质二硫键异构酶(PDI)基因的特征和表达(英文) 被引量:7
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作者 刘颖慧 王秀堂 +4 位作者 石云素 黄亚群 宋燕春 王天宇 黎裕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期229-234,共6页
蛋白质二硫键异构酶(PDI)对蛋白的折叠和二硫键的形成起重要的作用.此外,PDI还执行许多其他的生物功能,是1个多功能酶.本文通过研究玉米中1个PDI基因的特征和表达,探讨它的功能作用.玉米中的PDI基因编码513个氨基酸.同源分析表明,该基... 蛋白质二硫键异构酶(PDI)对蛋白的折叠和二硫键的形成起重要的作用.此外,PDI还执行许多其他的生物功能,是1个多功能酶.本文通过研究玉米中1个PDI基因的特征和表达,探讨它的功能作用.玉米中的PDI基因编码513个氨基酸.同源分析表明,该基因和水稻、小麦的PDI基因聚为一类,有很高的蛋白相似性.蛋白结构分析表明,该基因具有明显的PDI基因的结构特点,包括硫氧还蛋白活性位点(CGHC)以及内质网定位信号(KDEL).Northern杂交分析显示,该基因在发育种子的表达量高,同时受干旱、冷、ABA和盐等逆境胁迫诱导表达.PDI与GFP融合表达研究基因的亚细胞定位,表明该基因定位在除细胞膜外的细胞质和细胞器上. 展开更多
关键词 蛋白质二硫键异构酶 玉米 基因表达 亚细胞定位
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共表达蛋白二硫键异构酶对IFNβ-HSA融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响 被引量:5
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作者 屈琳 雷楗勇 +4 位作者 张琦 丁月娣 马晓峰 陈蕴 金坚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期346-349,353,共5页
目的探讨共表达蛋白二硫键异构酶(PDI)对干扰素β与人血清白蛋白(IFNβ-HSA)融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响。方法根据GenBank公布的毕赤酵母PDI序列设计引物,利用PCR方法从毕赤酵母基因组中扩增目的基因片段,插入表达载体pPICZαA,并... 目的探讨共表达蛋白二硫键异构酶(PDI)对干扰素β与人血清白蛋白(IFNβ-HSA)融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响。方法根据GenBank公布的毕赤酵母PDI序列设计引物,利用PCR方法从毕赤酵母基因组中扩增目的基因片段,插入表达载体pPICZαA,并整合入融合蛋白(IFNβ-HSA)基因工程菌中,筛选共表达PDI的重组酵母菌,甲醇诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA法检测IFNβ-HSA的表达量。结果经PCR鉴定,重组表达质粒pPICZαA-PDI已转入毕赤酵母KM71/pPIC9K-IFNβ-HSA中。经SDS-PAGE分析,PDI在菌体内大量表达,原始菌株和共表达菌株均明显表达融合蛋白IFNβ-HSA,共表达PDI菌株表达量提高了60%,ELISA法测定达(22.49±3.52)mg/L。结论共表达PDI能促进外源蛋白的分泌表达,为进一步研究在毕赤酵母中过量表达分子伴侣对其分泌外源蛋白的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白二硫键异构酶 毕赤酵母 分子伴侣 干扰素Β 人血清白蛋白 融合蛋白
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水稻蛋白二硫键异构酶基因沉默载体构建及其转基因后代的高温结实特性分析 被引量:3
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作者 刘光快 曹珍珍 +4 位作者 韦克苏 潘刚 苏达 张春娇 程方民 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期816-826,共11页
采用RT-PCR法亚克隆了PDI基因保守区内450bp的靶标序列作为干扰区段,构建了含有内含子hpRNA(ihpRNA)的双元表达载体pTCK303-RiOsPDI,经农杆菌介导转化日本晴,获得转基因植株;通过在T0代对其潮霉素(Hyg)抗性基因的PCR鉴定,确定携带有干... 采用RT-PCR法亚克隆了PDI基因保守区内450bp的靶标序列作为干扰区段,构建了含有内含子hpRNA(ihpRNA)的双元表达载体pTCK303-RiOsPDI,经农杆菌介导转化日本晴,获得转基因植株;通过在T0代对其潮霉素(Hyg)抗性基因的PCR鉴定,确定携带有干扰片段的T-DNA区已整合到水稻基因组中,且在转基因T1代符合3∶1的分离模式。半定量PCR和荧光定量PCR的检测结果表明,PDI基因沉默转基因阳性植株不同器官中的PDI表达量均显著降低,尤其是其籽粒中表达量较微,几乎能引起靶基因80%左右沉默。对转基因T2代植株的高温结实特性和籽粒理化品质的检测结果,PDI基因沉默会引起高温胁迫处理下结实率的大幅度降低,耐热性显著下降,但其在常温处理下的结实率与对照之间无显著差异。此外,PDI基因沉默后,稻米的透明度下降、垩白度增加,但对籽粒粗蛋白总量和直链淀粉含量的影响不甚明显。 展开更多
关键词 水稻 蛋白二硫键异构酶 基因沉默 RNAI载体构建 高温胁迫 结实特性
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小麦品种“陕253”PDI基因的克隆、原核表达及蛋白纯化 被引量:2
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作者 臧闻 董剑 +4 位作者 高翔 陈其皎 王延鹏 李志业 史红飞 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期799-804,共6页
为进一步研究控制小麦蛋白二硫键形成的关键蛋白即蛋白质二硫键异构酶(PDI),运用RT-PCR方法克隆出小麦品种"陕253"PDI基因的cDNA序列,基因登陆号为HQ911363。序列分析表明,HQ911363全长为1 539 bp,编码512个氨基酸,含有PDI典... 为进一步研究控制小麦蛋白二硫键形成的关键蛋白即蛋白质二硫键异构酶(PDI),运用RT-PCR方法克隆出小麦品种"陕253"PDI基因的cDNA序列,基因登陆号为HQ911363。序列分析表明,HQ911363全长为1 539 bp,编码512个氨基酸,含有PDI典型的异构酶活性的催化位点-CGHC-和内质网驻留信号肽-KDEL-。构建该基因的原核表达载体,在宿主菌E.coliBL21(DE3)中经IPTG诱导表达融合蛋白,并对表达蛋白进行了纯化。SDS-PAGE及Western-blot检测证实融合蛋白诱导表达并纯化成功。 展开更多
关键词 小麦 蛋白质二硫键异构酶(pdi) 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
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PDI抑制α-synuclein纤维化聚集作用机制研究 被引量:2
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作者 陈艳华 张则婷 +3 位作者 白佳 刘晓黎 刘买利 李从刚 《波谱学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期131-136,共6页
天然无结构蛋白?-synuclein在帕金森症(PD)患者脑部的路易小体中异常聚集,被认为是引起PD的重要原因之一,但是目前关于?-synuclein的聚集机制仍没有定论.蛋白质二硫键异构酶(PDI)是细胞内质网中重要的分子伴侣蛋白,能够阻止内质网中无... 天然无结构蛋白?-synuclein在帕金森症(PD)患者脑部的路易小体中异常聚集,被认为是引起PD的重要原因之一,但是目前关于?-synuclein的聚集机制仍没有定论.蛋白质二硫键异构酶(PDI)是细胞内质网中重要的分子伴侣蛋白,能够阻止内质网中无结构蛋白的聚集.在PD患者的脑细胞内发现PDI过量表达,且酶活性位点半胱氨酸被亚硝基化使其活性受到抑制.体外实验证明,PDI能够抑制?-synuclein的聚集,但其具体的分子机制还不清楚,研究PDI抑制?-synuclein聚集的具体机制可能对于PD治疗有重要意义.该文利用核磁共振(NMR)方法研究了?-synuclein与PDI的相互作用,发现?-synuclein与PDI的结合位点位于?-synuclein的N端;将PDI所有的6个半胱氨酸突变成丝氨酸,得到突变体PDI C-S,发现?-synuclein与PDI C-S的结合位点则位于其C末端;荧光实验结果表明突变体PDI C-S对?-synuclein纤维化聚集的抑制作用减弱,说明PDI抑制?-synuclein的纤维化聚集主要是通过与?-synuclein的N端残基结合来实现的. 展开更多
关键词 核磁共振(NMR) 相互作用 .-synuclein 蛋白质二硫键异构酶(pdi)
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脆壁克鲁维酵母KfPDI基因高表达菌株的构建 被引量:1
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作者 苏燕 霍克克 +1 位作者 赵翔 李育阳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第9期23-27,共5页
通过构建脆壁克鲁维酵母 (Kluyveromycesfragilis)蛋白二硫化物异构酶基因KfPDI强表达单元并克隆到不同类型的酵母载体上转化酵母菌株 ,经筛选得到了带有不同拷贝数KfPDI基因的酵母转化子。酶活性测定结果表明这些转化子中的蛋白二硫化... 通过构建脆壁克鲁维酵母 (Kluyveromycesfragilis)蛋白二硫化物异构酶基因KfPDI强表达单元并克隆到不同类型的酵母载体上转化酵母菌株 ,经筛选得到了带有不同拷贝数KfPDI基因的酵母转化子。酶活性测定结果表明这些转化子中的蛋白二硫化物异构酶表达水平不仅与其KfPDI基因拷贝数有关 ,而且与该基因是否整合入宿主染色体也密切相关。 展开更多
关键词 蛋白二硫化物异构酶 pdi 基因表达 脆壁克鲁维酵母 Kfpdi 菌株 基因工程 宿主菌 基因拷贝 构建
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蛋白质二硫键异构酶对血小板膜蛋白Ibα酶切的调控作用 被引量:1
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作者 吴夏 闫荣 +1 位作者 赵丽丽 戴克胜 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期1069-1074,共6页
目的:本研究旨在探讨蛋白质二硫键异构酶(Protein disulfide isomerase,PDI)在血小板膜蛋白(glycoprotein,GP)Ibα酶切过程中的调控作用。方法:从健康志愿者静脉血分离得到血小板。PDI抑制剂短杆菌肽(bacitracin)预处理血小板后,用佛波... 目的:本研究旨在探讨蛋白质二硫键异构酶(Protein disulfide isomerase,PDI)在血小板膜蛋白(glycoprotein,GP)Ibα酶切过程中的调控作用。方法:从健康志愿者静脉血分离得到血小板。PDI抑制剂短杆菌肽(bacitracin)预处理血小板后,用佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)、二丁卡因(dibucaine)、胶原(collagen)刺激血小板。Western blot检测血小板悬液中血小板GPIbα的酶切片段糖萼蛋白(glycocalicin,GC),流式细胞术检测血小板GPIbα的表达量和血小板内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的变化。结果:健康人洗涤血小板在PDI抑制剂bacitracin单独温育后,不会引起血小板悬液中GPIbα的酶切片段和血小板GPIbα膜表达量的改变(P>0.05),但是刺激剂诱导下的PDI抑制剂预处理与对照组相比,血小板GPIbα酶切产物增加、GPIbα膜表达减少(P<0.05)、胞内ROS水平增加(P<0.05)。结论:在诱导的血小板GPIbα酶切过程中,PDI可能参与并通过改变ROS水平进而影响血小板GPIbα胞外段酶切。 展开更多
关键词 血小板 蛋白质二硫键异构酶 血小板膜蛋白Ibα
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Evolutionary Relationship of Wheat Protein Disulphide Isomerase (PDI) Gene Promoter Sequence Based on Phylogenetic Analysis
9
作者 Arun Prabhu Dhanapal 《American Journal of Plant Sciences》 2012年第3期373-380,共8页
Protein disulphide isomerase (PDI) is an oxidoreductase enzyme abundant in the endoplasmic reticulum (ER). In plants, PDIs have been shown to assist the folding and deposition of seed storage proteins during the bioge... Protein disulphide isomerase (PDI) is an oxidoreductase enzyme abundant in the endoplasmic reticulum (ER). In plants, PDIs have been shown to assist the folding and deposition of seed storage proteins during the biogenesis of protein bodies in the endosperm. Cloning and characterization of the complete set of genes encoding PDI and PDI like proteins in bread wheat (Triticum aestivum cv. Chinese Spring) and the comparison of their sequence, structure and expression with homologous genes from other plant species were reported in our previous publications. Promoter sequences of three homoeologous genes encoding typical PDI, located on chromosome group 4 of bread wheat, and PDI promoter sequence analysis of Triticum urartu, Aegilops speltoides and Aegilops tauschii had also been reported previously. In this study, we report the isolation and sequencing of a ~700 bp region, comprising ~600 bp of the putative promoter region and 88 bp of the first exon of the typical PDI gene, in five accessions each from Triticum urartu (AA), Aegilops speltoides (BB) and Aegilops tauschii (DD). Sequence analysis indicated large variation among sequences belonging to the different genomes, while close similarity was found within each species and with the corresponding homoeologous PDI sequences of Triticum aestivum cv. CS (AABBDD) resulting in an overall high conservation of the sequence conferring endosperm-specific expression. 展开更多
关键词 protein disulfide isomerase (pdi) Promoter WHEAT PHYLOGENETIC Analysis
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脆壁克鲁维酵母蛋白二硫化物异构酶KfPDI的结构分析
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作者 赵翔 包卫国 +2 位作者 霍克克 李育阳 FukuharaH 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第8期39-43,共5页
利用DNA限制性内切酶图谱分析将一个带有脆壁克鲁维酵母 (Kluyveromycesfragilis) 蛋白二硫化物异构酶基因(KfPDI) 的10 kb 初始克隆缩短为4 kb 的亚克隆,并测定了该基因的DNA全序列。经... 利用DNA限制性内切酶图谱分析将一个带有脆壁克鲁维酵母 (Kluyveromycesfragilis) 蛋白二硫化物异构酶基因(KfPDI) 的10 kb 初始克隆缩短为4 kb 的亚克隆,并测定了该基因的DNA全序列。经分析发现: (1)该基因编码产物由520个氨基酸残基组成。(2) 它与乳酸克鲁维酵母(K. lactis) 蛋白二硫化物异构酶在氨基酸序列上的同源性为78。(3) 它与其他物种的PDI基因在核苷酸和蛋白质水平上的同源性较弱, 展开更多
关键词 脆壁克鲁维酵母 pdi Kfpdi 序列分析
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