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酶消化-ICP/MS法测定血中稀土元素的方法研究 被引量:11
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作者 许瑛华 梁旭霞 +2 位作者 连晓文 朱杰民 杜达安 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第7期769-772,共4页
目的:建立蛋白酶消化-ICP/MS法同时测定血中13种稀土元素的方法。方法:对蛋白酶K的使用浓度、消化时间、消化温度等条件及ICP/MS仪器测定条件优化,并对血样实测分析。结果:在优化的条件下,蛋白酶K可将血样消化完全,方法操作简... 目的:建立蛋白酶消化-ICP/MS法同时测定血中13种稀土元素的方法。方法:对蛋白酶K的使用浓度、消化时间、消化温度等条件及ICP/MS仪器测定条件优化,并对血样实测分析。结果:在优化的条件下,蛋白酶K可将血样消化完全,方法操作简单、省时,一次进样可同时测定13种稀土元素,各元素最低检出浓度为0.5~2ng/L,相对标准偏差均〈4.87%,加标回收率96.0%~104%;方法的线性动态范围高达9个数量级,根据血样中各稀土元素含量情况,选用0.005~0.100μg/L为工作曲线范围,相关系数均〉0.999。结论:该方法适合于大批量血液样本中13种微量稀土元素的同时检测。 展开更多
关键词 稀土元素 蛋白酶k 电感耦合等离子体质谱 血液
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牡蛎中诺如病毒核酸两种提取方法比较 被引量:6
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作者 袁巧 李晖 +3 位作者 邓小玲 莫艳玲 方苓 柯昌文 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期568-572,共5页
目的寻找简便有效的更适合长期监测的牡蛎中诺如病毒核酸提取的方法。方法通过甘氨酸聚乙二醇富集后硅胶膜离心柱法(方法A)和蛋白酶K生物消化后顺磁性硅胶基法(方法B)两种核酸提取方法,采用实时RT-PCR检测自然状态的牡蛎和人工染毒状态... 目的寻找简便有效的更适合长期监测的牡蛎中诺如病毒核酸提取的方法。方法通过甘氨酸聚乙二醇富集后硅胶膜离心柱法(方法A)和蛋白酶K生物消化后顺磁性硅胶基法(方法B)两种核酸提取方法,采用实时RT-PCR检测自然状态的牡蛎和人工染毒状态的牡蛎来进行比较。结果两种方法的阳性检出率没有差异,总体比较方法B的病毒回收率高。结论方法B优于方法A,且方法B更快捷,故方法B更适合长期监测。 展开更多
关键词 牡蛎 诺如病毒 核酸 甘氨酸聚乙二醇 硅胶膜离心柱法 蛋白酶k 顺磁性硅胶基法
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酶消化-ICP/MS法测定广东省部分地区居民血中稀土元素含量 被引量:5
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作者 许瑛华 马文军 +3 位作者 邓峰 梁旭霞 朱杰民 杜达安 《华南预防医学》 2006年第4期1-5,共5页
目的研究广东省部分地区居民血中稀土元素(REE)的本底值特征。方法对广东省广州市越秀区和韶关市北江区两个地区城市居民进行分层整群随机抽样,以问卷调查方式进行流行病学调查,并采用蛋白酶消化-ICP/MS法检测全血中La、Ce、Pr、Nb、Sm... 目的研究广东省部分地区居民血中稀土元素(REE)的本底值特征。方法对广东省广州市越秀区和韶关市北江区两个地区城市居民进行分层整群随机抽样,以问卷调查方式进行流行病学调查,并采用蛋白酶消化-ICP/MS法检测全血中La、Ce、Pr、Nb、Sm、Eu、Gd、Dy、Ho、Er、Tm、Yb和Lu共13种稀土元素。结果分别调查广州越秀区和韶关北江区515、735名居民,两地区居民全血中13种稀土元素在本方法检出限范围内(10-10)均可检出;其中越秀区13种REE总量均值为1.826μg/L,轻稀土含量为1.679μg/L,配分为91.9%;重稀土含量为0.147μg/L,配分为8.1%;La、Ce占稀土总量的88.8%。北江区13种REE总量均值为2.917μg/L,轻稀土含量为2.720μg/L,配分为93.2%;重稀土含量为0.197μg/L,配分为6.8%,La、Ce占稀土总量的87.6%;两地区居民血中稀土元素总量均值差异有统计学意义(P<0.05),各分量值除Ho、Er外,其他11种元素分量值差异有统计学意义(均P<0.05)。结论两个地区居民血中稀土特点以轻稀土为主,高Ce、高La,不同地区居民血中稀土元素本底值存在差异。 展开更多
关键词 稀土元素 蛋白酶k 电感耦合等离子体质谱 血液
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响应面法优化酶法制备驴血红蛋白源二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽 被引量:3
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作者 刘丹 吴晓彤 《肉类研究》 2021年第2期19-24,共6页
食源性二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPP-Ⅳ)抑制活性肽成为近年来健康产品研究的方向之一。本研究以驴血红蛋白为原料,采用计算机模拟蛋白水解方法筛选最佳蛋白酶,研究酶解时间、温度和加酶量对蛋白水解度(degree of hydrolysi... 食源性二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPP-Ⅳ)抑制活性肽成为近年来健康产品研究的方向之一。本研究以驴血红蛋白为原料,采用计算机模拟蛋白水解方法筛选最佳蛋白酶,研究酶解时间、温度和加酶量对蛋白水解度(degree of hydrolysis,DH)和酶解产物DPP-Ⅳ抑制率的影响,响应面优化酶解法制备DPP-Ⅳ抑制活性肽的工艺条件。结果表明,最佳蛋白酶为蛋白酶K,驴血红蛋白源制备DPP-Ⅳ抑制活性肽的最佳酶解条件为:底物质量浓度1 g/100 mL、酶解时间3.15 h、温度65℃、pH 8、加酶量400 U/g,此条件下2 mg/mL酶解产物对DPP-Ⅳ的抑制率为53.44%。 展开更多
关键词 驴血红蛋白 蛋白酶k 响应面分析法 二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽
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玉米醇溶蛋白水解物的Zn2+螯合能力及抗氧化活性分析 被引量:2
5
作者 李丹 朱蕊芳 张东杰 《黑龙江八一农垦大学学报》 2020年第1期46-52,共7页
为了提高玉米醇溶蛋白在食品中的应用,以玉米醇溶蛋白为原料,以锌螯合能力为指标,在pH为12的条件下,通过单因素实验确定蛋白酶K水解玉米醇溶蛋白的最适反应条件,并分析玉米醇溶蛋白锌离子螯合物的抗氧化活性。在底物浓度10 mg·mL^-... 为了提高玉米醇溶蛋白在食品中的应用,以玉米醇溶蛋白为原料,以锌螯合能力为指标,在pH为12的条件下,通过单因素实验确定蛋白酶K水解玉米醇溶蛋白的最适反应条件,并分析玉米醇溶蛋白锌离子螯合物的抗氧化活性。在底物浓度10 mg·mL^-1、酶添加量2.4 U·mg^-1、反应温度60℃、反应时间2 h条件下,玉米醇溶蛋白水解物锌离子螯合能力最强,达到12.16 mg·g^-1玉米醇溶蛋白,所对应水解度为4.10%;抗氧化实验结果显示:玉米醇溶蛋白水解物锌离子螯合物有显著的清除DPPH自由基、羟自由基、ABTS^+·的能力,清除效果显著优于未水解的玉米醇溶蛋白,且与玉米醇溶蛋白水解物锌离子螯合物浓度呈正相关,为玉米醇溶蛋白应用于新型膳食补充剂提供广阔的前景。 展开更多
关键词 蛋白酶k 玉米醇溶蛋白 锌螯合能力 抗氧化
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单支蛋白k替代试剂盒中蛋白酶k对高危型人乳头瘤病毒-DNA检测的价值研究
6
作者 朱凤花 高群英 +4 位作者 张华芳 张佳娜 雷凌云 官定金 刘云凯 《现代诊断与治疗》 CAS 2022年第16期2371-2373,共3页
目的研究单支蛋白k替代试剂盒中蛋白酶k对高危型人乳头瘤病毒(HPV)DNA检测的价值。方法选取2017年1月至2018年6月在我院病理科进行HPV DNA检测的1000例。分别于春夏两季选取不同年龄、不同取材医师及不同TCT结果的受检者标本。同样的标... 目的研究单支蛋白k替代试剂盒中蛋白酶k对高危型人乳头瘤病毒(HPV)DNA检测的价值。方法选取2017年1月至2018年6月在我院病理科进行HPV DNA检测的1000例。分别于春夏两季选取不同年龄、不同取材医师及不同TCT结果的受检者标本。同样的标本首先全部采用原装配套试剂进行检测,随后全部用默克公司的单支蛋白酶k替代套盒试剂中的蛋白酶k,其它试剂、设备及检测方法不变,比较两种方法高危型HPV DNA检出情况,分析单支蛋白k替代试剂盒对不同亚型高危型HPV DNA的检出情况。结果1000例患者高危型HPV DNA检出432例,占比43.20%,未检出高危型HPV DNA 568例,占比56.80%。而单支蛋白k替代试剂盒检出高危型HPV DNA 432例,未检出高危型HPV DNA 568例,其灵敏度、特异度及准确度均为100.00%。两种检测方式的高危型HPV DNA检出结果对比,差异无统计学意义(P>0.05)。原装配套试剂及单支蛋白k替代试剂盒对HPV16、HPV18及其它高危型HPV DNA的检出率均为20.10%、14.50%、8.60%,两种检测方式结果无明显差异(P均>0.05)。结论单支蛋白k替代试剂盒中蛋白酶k对高危型HPV DNA检测的价值较高。 展开更多
关键词 宫颈癌 高危型人乳头瘤病毒 单支蛋白k替代试剂盒 蛋白酶k
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诱导时机对羧肽酶原B包涵体质量和复性率影响的研究 被引量:1
7
作者 辛爱洁 王亚辉 +1 位作者 李素霞 袁勤生 《食品与药品》 CAS 2009年第4期17-20,共4页
目的研究诱导时机对羧肽酶原B包涵体质量和复性率的影响,探讨包涵体质量评价体系。方法在不同时间诱导产生重组羧肽酶原B包涵体,研究其变性和复性、对蛋白酶K的稳定性及在一定浓度盐酸胍溶液中的化学变性,分析诱导时间与包涵体复性率的... 目的研究诱导时机对羧肽酶原B包涵体质量和复性率的影响,探讨包涵体质量评价体系。方法在不同时间诱导产生重组羧肽酶原B包涵体,研究其变性和复性、对蛋白酶K的稳定性及在一定浓度盐酸胍溶液中的化学变性,分析诱导时间与包涵体复性率的相关性。结果诱导时机不同,所得重组羧肽酶原B包涵体复性率及对蛋白酶K的稳定性不同,在一定浓度盐酸胍溶液中的溶解性也不同。复性率越高的包涵体越不易被蛋白酶K酶解,对化学变性剂的稳定性也高。结论诱导时机影响重组羧肽酶原B包涵体的质量及复性率。 展开更多
关键词 羧肽酶B 诱导时机 包涵体 蛋白酶k
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不同预处理方法对粪便中新型冠状病毒核酸检测结果的影响
8
作者 杜栩彬 孔玲玲 +1 位作者 文纤纤 杨涵 《中国社区医师》 2020年第28期106-107,共2页
目的:探讨不同预处理方法对粪便中新型冠状病毒(COVID-19)核酸检测结果的影响。方法:选取COVID-19患者的粪便标本1例,应用56℃水浴30 min处理、蛋白酶K处理及不处理三种方法进行预处理后进行核酸检测。结果:三种方法处理后核酸检测均为... 目的:探讨不同预处理方法对粪便中新型冠状病毒(COVID-19)核酸检测结果的影响。方法:选取COVID-19患者的粪便标本1例,应用56℃水浴30 min处理、蛋白酶K处理及不处理三种方法进行预处理后进行核酸检测。结果:三种方法处理后核酸检测均为阳性,但蛋白酶K处理后结果明显优于其他两种处理方式。结论:采用蛋白酶K处理标本敏感性优于未灭活处理和56℃水浴灭活处理。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 粪便阳性 蛋白酶k
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白腐真菌总DNA提取方法的研究 被引量:9
9
作者 昂莎莎 荚荣 卢伟 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期82-85,共4页
白腐真菌的巨大而广谱的生物降解能力使其在"三废"治理和环境修复中具有良好的应用前景。为寻求一种简便有效的白腐真菌总DNA的提取方法,在实验中分别采用蜗牛酶法、CTAB法、SDS法和蛋白酶K法进行操作,且对提取的DNA进行紫外... 白腐真菌的巨大而广谱的生物降解能力使其在"三废"治理和环境修复中具有良好的应用前景。为寻求一种简便有效的白腐真菌总DNA的提取方法,在实验中分别采用蜗牛酶法、CTAB法、SDS法和蛋白酶K法进行操作,且对提取的DNA进行紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳(AGE)检测。通过对提取的总DNA浓度、纯度、实验操作过程以及试验成本等方面的比较与分析,得出蜗牛酶法是白腐真菌总DNA提取的理想方法。 展开更多
关键词 白腐真菌 总DNA 蜗牛酶法 CTAB法 SDS法 蛋白酶k
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制备棉花幼蕾高质量总RNA的方法比较 被引量:8
10
作者 宋洋 吴巧雯 郭三堆 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2008年第3期231-234,共4页
以棉花和烟草的叶片及幼蕾为材料,分别用Trizol法和热硼酸/蛋白酶K法提取总RNA,对获得总RNA的量和纯度测定。结果表明,热硼酸/蛋白酶K法提取棉花幼蕾总RNA效果最好,得到的RNA具有质量高、完整性好等优点。
关键词 棉花幼蕾 RNA 热硼酸/蛋白酶k TRIZOL法
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水稻纹枯菌总DNA提取方法的比较 被引量:9
11
作者 任衍春 张震 +5 位作者 毛雪琴 邱海萍 姜华 柴荣耀 王艳丽 孙国昌 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期741-747,共7页
DNA的浓度,尤其是DNA的纯度严重影响后续基因组酶切等结果。为寻找一种高质量的水稻纹枯菌总DNA的提取方法,采用CTAB法、CTAB改良法、SDS法、蜗牛酶法、蛋白酶K法5种方法分别提取水稻纹枯菌总DNA。通过紫外吸光度测定DNA的纯度和浓度、... DNA的浓度,尤其是DNA的纯度严重影响后续基因组酶切等结果。为寻找一种高质量的水稻纹枯菌总DNA的提取方法,采用CTAB法、CTAB改良法、SDS法、蜗牛酶法、蛋白酶K法5种方法分别提取水稻纹枯菌总DNA。通过紫外吸光度测定DNA的纯度和浓度、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增、限制性内切酶酶切反应及Southern杂交评价DNA的质量,最终得出蛋白酶K法是获取高质量水稻纹枯菌基因组DNA的最佳方法。 展开更多
关键词 水稻纹枯菌 总DNA SOUTHERN杂交 蛋白酶k
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APP/PS1双转基因小鼠鉴定及生物学功能研究 被引量:1
12
作者 史洺 张紫娟 +2 位作者 郝莉 邵思迈 张振强 《河南大学学报(自然科学版)》 CAS 2022年第1期64-72,共9页
通过对APP/PS1双转基因小鼠尾部组织进行DNA提取,后续采用PCR扩增、琼脂凝胶电泳实验方法进行条带分析鉴定,比较蛋白酶K法和碱裂法对DNA提取差异,通过行为学实验、免疫荧光实验和Western blot检测小鼠病理产物的表达以验证APP/PS1双转... 通过对APP/PS1双转基因小鼠尾部组织进行DNA提取,后续采用PCR扩增、琼脂凝胶电泳实验方法进行条带分析鉴定,比较蛋白酶K法和碱裂法对DNA提取差异,通过行为学实验、免疫荧光实验和Western blot检测小鼠病理产物的表达以验证APP/PS1双转基因小鼠生物学功能改变.结果显示,与蛋白酶K法相比,碱裂法提取的DNA浓度明显较高(P<0.001),纯度无显著性差异(P>0.05).水迷宫行为检测结果显示,定位航行实验中,与野生型比较,两组APP/PS1小鼠平均逃避潜伏期明显延长(P<0.05,P<0.01,P<0.001),空间探索实验中,与野生型比较,两组APP/PS1小鼠穿越平台次数明显减少(P<0.05,P<0.01),目标象限停留时间明显缩短(P<0.01).Y迷宫实验结果显示,与野生型比较,两组APP/PS1转基因小鼠自发交替准确率明显降低(P<0.01).免疫荧光实验结果显示,与野生型小鼠比较,两组APP/PS1转基因小鼠脑部明显产生Aβ沉积(P<0.01,P<0.001).Western blot结果显示,与野生型比较,两组APP/PS1转基因小鼠海马组织Aβ表达量明显增多(P<0.05).以上结果表明,APP/PS1双转基因小鼠在8月龄出现明显Aβ沉积及行为学改变,在DNA提取方面,蛋白酶K法和碱裂法对APP/PS1双转基因小鼠的DNA提取均准确无差异,碱裂法具有简单高效的优点,在常用的定性鉴定方面具有优势. 展开更多
关键词 APP/PS1双转基因小鼠 蛋白酶k 碱裂法 AΒ表达 行为学实验
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奶牛精子原位杂交蛋白酶K浓度的优化 被引量:1
13
作者 沈波 孙献莹 +1 位作者 孟浩 高庆华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第23期14111-14111,14119,共2页
[目的]确定奶牛精子原位杂交中最佳蛋白酶K浓度。[方法]设置6个蛋白酶K浓度(10、20、30、40、60、80μg/ml),奶牛精子在37℃消化处理20 min,以精子尾部颈段和中段的存在作为选定最佳蛋白酶K浓度的标准。[结果]30μg/m l蛋白酶K既能有效... [目的]确定奶牛精子原位杂交中最佳蛋白酶K浓度。[方法]设置6个蛋白酶K浓度(10、20、30、40、60、80μg/ml),奶牛精子在37℃消化处理20 min,以精子尾部颈段和中段的存在作为选定最佳蛋白酶K浓度的标准。[结果]30μg/m l蛋白酶K既能有效去除精子蛋白质,又能保持精子的基本形态。[结论]精子原位杂交的最佳蛋白酶K浓度是30μg/ml。 展开更多
关键词 精子 原位杂交 蛋白酶k浓度 奶牛 优化
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糯米酒发酵过程中微生物基因组提取方法比较 被引量:1
14
作者 赵文婧 燕平梅 《太原师范学院学报(自然科学版)》 2019年第2期92-96,共5页
为了更加快速地获得糯米酒发酵过程中高质量的微生物基因组DNA,本实验通过测定基因组DNA浓度和进行聚合酶链式反应(PCR),利用溶菌酶-SDS-蛋白酶-K(A法),改良CTAB(B法)和改良CTAB-溶菌酶(C法)三种实验方法获得微生物基因组DNA,通过比较... 为了更加快速地获得糯米酒发酵过程中高质量的微生物基因组DNA,本实验通过测定基因组DNA浓度和进行聚合酶链式反应(PCR),利用溶菌酶-SDS-蛋白酶-K(A法),改良CTAB(B法)和改良CTAB-溶菌酶(C法)三种实验方法获得微生物基因组DNA,通过比较三种方法发现,C法提取效率最高,获得的基因组DNA浓度为1 573.97±711.51ng/μL;B法获得的基因组浓度为1 436.03±128.0ng/μL;A法效率最低,获得基因组浓度为411.67±133.29ng/μL.以基因组DNA为模板进行PCR,将扩增产物在0.6%琼脂糖凝胶中进行电泳检验.结果显示C法获得的条带最清楚明亮,表明DNA浓度最高、结构完整.基因组DNA浓度和PCR产物琼脂糖凝胶电泳条带的亮度表明,提取糯米酒发酵过程中微生物基因组DNA的最优方法为改良CTAB-溶菌酶法(C法). 展开更多
关键词 糯米酒 溶菌酶-SDS-蛋白酶-k 改良CTAB 改良CTAB-溶菌酶
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一种简便、快速、高效适合PCR的真菌DNA提取方法 被引量:6
15
作者 柴海云 张磊 +1 位作者 袁牧歌 朱庆义 《中国真菌学杂志》 CSCD 2017年第6期359-361,367,共4页
目的探索一种新的真菌DNA提取方法,该方法操作简便,提取效率高,耗时较短,应用范围广。方法将酶消化和Chelex-100提取DNA方法联合起来,配制一种新的DNA提取试剂。通过真菌ITS4和ITS5通用引物进行PCR,对新的DNA提取试剂同市售的Takara lys... 目的探索一种新的真菌DNA提取方法,该方法操作简便,提取效率高,耗时较短,应用范围广。方法将酶消化和Chelex-100提取DNA方法联合起来,配制一种新的DNA提取试剂。通过真菌ITS4和ITS5通用引物进行PCR,对新的DNA提取试剂同市售的Takara lysis buffer在DNA提取方面的效能进行评价,同时对DNA浓度和纯度进行测定。结果实验所用34株真菌,自配试剂成功提取出32株真菌DNA;Takara lysis buffer成功提出27株真菌DNA。对于两种方法都没能提出DNA的2株真菌,经液氮研磨破壁后,自制试剂均成功提取;而Takara lysis buffer仅成功提取DNA 1株。结论同市售试剂Takara lysis buffer比较,自配DNA提取液提取DNA质量相对较高,可用于临床常见感染真菌的PCR诊断。对于某些真菌,提取DNA之前先进行菌体破壁是必要的。 展开更多
关键词 蛋白酶k 蜗牛酶 Chelex-100 DNA提取
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