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脂质体包裹^(99m)Tc-HYNIC-Survivin ASODN的鸟嘌呤含量与启动子位置对显像质量的影响 被引量：1
1
作者 贾红丽 冯珏 +2 位作者 张秀梅 杨阳 李晓东 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2011年第3期449-452,共4页
目的制备鸟嘌呤(G)含量及离启动子远近不同的4种脂质体包裹99mTc-HYNIC-Survivin ASODN对荷人肝癌裸鼠行SPECT显像,探讨其显像质量是否受G含量及启动子位置影响,以找到最佳反义显像的碱基序列,提高基因显像质量。方法制备两种(A1、A2)G... 目的制备鸟嘌呤(G)含量及离启动子远近不同的4种脂质体包裹99mTc-HYNIC-Survivin ASODN对荷人肝癌裸鼠行SPECT显像,探讨其显像质量是否受G含量及启动子位置影响,以找到最佳反义显像的碱基序列,提高基因显像质量。方法制备两种(A1、A2)G含量不同而离启动子远近相近的16个碱基单链ASODN和两种(A'1、A'2)G含量相同而离启动子远近不同的10个碱基单链ASODN,耦联HYNIC,99mTc标记后,经Cellufine GH-25纯化后脂质体包裹。用此显像剂对荷瘤裸鼠行肿瘤反义显像并通过ROI技术进行分析。结果肿瘤/对侧肌肉比值(T/NT)A1、A2分别为4.13±0.09和2.47±0.04(2 h),4.90±0.11和3.75±0.10(4 h);A'1、A'2分别为3.90±0.07和2.09±0.07(2 h),4.41±0.08和2.78±0.10(4 h)。上述各组T/NT值在各时间点差异有统计学意义(P<0.01)。结论 G含量相同,离启动子位置较近,显像质量较好;离启动子位置相近,G含量较低,显像质量较好。 展开更多
关键词 寡核苷酸 反义 启动区域(基因) 鸟嘌呤 放射性核素显像
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转录因子Sp1在肿瘤细胞CD59表达调控中的作用 被引量：2
2
作者 梁岩 高美华 张蓓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期19-22,共4页
目的:构建针对Sp1基因siRNA真核表达载体,转染前列腺癌细胞PC-3,研究反式作用因子Sp1对CD59表达的影响。方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性Sp1基因的重组载体pSUPER-siSp1,脂质体法转染前列腺癌细胞,G418筛选建立稳定... 目的:构建针对Sp1基因siRNA真核表达载体,转染前列腺癌细胞PC-3,研究反式作用因子Sp1对CD59表达的影响。方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性Sp1基因的重组载体pSUPER-siSp1,脂质体法转染前列腺癌细胞,G418筛选建立稳定表达转染基因的细胞株,RT-PCR和Western blot检测转染细胞中Sp1和CD59基因的表达,染料释放试验判断CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用。结果:成功构建了Sp1基因siRNA真核表达载体,转染PC-3细胞可表达荧光蛋白,稳定转染的PC-3细胞CD59基因的mRNA和蛋白水平降低,染料释放实验表明CD59基因受抑制后对补体溶破的抵抗作用降低。结论:siRNA-Sp1重组载体有效地抑制了CD59的表达,降低CD59的抗补体活性,结果证明反式作用因子Sp1是CD59表达调控中重要的转录因子,为探讨CD59在肿瘤细胞中高表达的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 CD59 启动子 Sp1转录因子 RNA干扰
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双启动子shRNA真核表达载体的构建 被引量：1
3
作者 娜仁 郭刚 +4 位作者 张瑞 赵郁 汪蓓蕾 梁东春 杨宇虹 《天津医药》 CAS 北大核心 2010年第10期840-842,共3页
目的:构建含有双启动子的shRNA真核表达载体。方法:通过PCR分别扩增带有BamHⅠ、EcoRⅠ酶切位点的人U6启动子序列(U6-B/E)和带有BglⅡ、HindⅢ酶切位点的人U6启动子序列(U6-B/H),用BamHⅠ与EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1(+)与PCR产物U6-B/E后进... 目的:构建含有双启动子的shRNA真核表达载体。方法:通过PCR分别扩增带有BamHⅠ、EcoRⅠ酶切位点的人U6启动子序列(U6-B/E)和带有BglⅡ、HindⅢ酶切位点的人U6启动子序列(U6-B/H),用BamHⅠ与EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1(+)与PCR产物U6-B/E后进行连接,重组质粒命名为psPRO。再用BglⅡ与HindⅢ双酶切psPRO与PCR产物U6-B/H后进行连接,构建含有双启动子的shRNA真核表达载体。结果:酶切鉴定以及DNA测序结果显示载体构建成功。结论:构建双启动子的shRNA真核表达载体,使其在细胞中表达2个不同的siRNA,不仅筛选方便,而且可以通过建立这种模式化工具载体,为今后RNA干扰实验研究的开展和深入提供手段。 展开更多
关键词 启动区(遗传学) 遗传载体 RNA 小分子干扰 聚合酶链反应 重组 遗传 质粒
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转录因子Sp1上调前列腺癌细胞中CD59的表达(英文)
4
作者 梁岩 高美华 +1 位作者 张蓓 冯翠萍 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第20期3807-3811,共5页
目的:构建针对Sp1基因siRNA真核表达载体,转染前列腺癌细胞PC-3,研究反式作用因子Sp1对CD59表达的影响。方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性Sp1基因的重组载体pSUPER-siSp1,脂质体法转染前列腺癌细胞,G418 筛选建立稳... 目的:构建针对Sp1基因siRNA真核表达载体,转染前列腺癌细胞PC-3,研究反式作用因子Sp1对CD59表达的影响。方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性Sp1基因的重组载体pSUPER-siSp1,脂质体法转染前列腺癌细胞,G418 筛选建立稳定表达转染基因的细胞株,Western blotting 检测转染细胞中 Sp1 和 CD59 基因的表达,MTT 和染料释放试验判断CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用。结果:成功构建了Sp1基因siRNA真核表达载体,转染PC-3细胞可表达荧光蛋白,稳定转染的PC-3细胞Sp1及CD59基因蛋白水平降低,MTT和染料释放实验表明CD59基因受抑制后对补体溶破的抵抗作用降低。结论:siRNA-Sp1重组载体有效地抑制了CD59的表达,降低CD59的抗补体活性,结果证明反式作用因子Sp1是CD59表达调控中重要的转录因子,为探讨CD59在肿瘤细胞中高表达的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 CD59 启动子 Sp1转录因子 RNA干扰
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人破骨细胞分化因子基因启动子报告载体的构建
5
作者 杨宇虹 郑纺 +1 位作者 刘瑞 王宝利 《天津医药》 CAS 北大核心 2006年第6期361-363,T0001,共4页
目的:构建能够报告人破骨细胞分化因子(ODF)基因启动子活性的表达载体。方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有ODF基因启动子的2段序列(-2433￣-1243bp和-1262￣+100bp),通过T-A克隆将这2个序列片段分别连接到pGEM"-TEasy克隆载体... 目的:构建能够报告人破骨细胞分化因子(ODF)基因启动子活性的表达载体。方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有ODF基因启动子的2段序列(-2433￣-1243bp和-1262￣+100bp),通过T-A克隆将这2个序列片段分别连接到pGEM"-TEasy克隆载体上。利用特定的限制性内切酶位点,将这2个序列片段酶切后进行正确拼接并定向克隆到不含启动子的pEGFP-1报告基因载体上。将该重组质粒pEGFP-1-ODF瞬时转染成骨细胞系UMR106,检测其能否在ODF基因启动子(-2358￣+100bp)的调控下表达报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。结果:pEGFP-1-ODF经酶切鉴定和序列分析证实与设计完全一致。细胞瞬时转染结果表明,pEGFP-1-ODF转染的UMR106能表达EGFP。结论:人ODF基因启动子报告载体的成功构建,为进一步研究ODF基因表达转录水平的调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 破骨细胞分化因子 启动区(遗传学) 遗传载体 人类
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