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吴茱萸次碱对胰岛素抵抗骨骼肌细胞炎症因子表达的影响 被引量：8
1
作者 杨建文 聂绪强 +4 位作者 史海霞 张玉金 张建永 袁野 卞卡 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第15期2930-2935,共6页
探讨吴茱萸次碱（rutecarpine,Rut）对胰岛素抵抗原代骨骼肌细胞（insulin resistant primary skeletal muscle cells,IR-PSMC）中炎症因子的影响。培养原代大鼠骨骼肌细胞,显微镜下观察细胞形态学变化,MTT法观察Rut对原代骨骼肌细胞增... 探讨吴茱萸次碱（rutecarpine,Rut）对胰岛素抵抗原代骨骼肌细胞（insulin resistant primary skeletal muscle cells,IR-PSMC）中炎症因子的影响。培养原代大鼠骨骼肌细胞,显微镜下观察细胞形态学变化,MTT法观察Rut对原代骨骼肌细胞增殖的影响。用棕榈酸（PA）诱导建立IR-PSMC细胞,氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）法检测培养基中葡萄糖浓度,并检测Rut对IR-PSMC细胞中炎症因子IL-1,IL-6,TNF-α的影响。原代骨骼肌细胞培养7 d后,细胞长满培养皿,Rut在0～180.0μmol·L-1,对原代骨骼肌细胞增殖无明显影响。用0.6 mmol·L-1PA培养24 h可建立IR-PSMC细胞,Rut在20～180μmol·L-1抑制IR-PSMC细胞中IL-1,IL-6,TNF-α生成,且具良好的量效关系。Rut可能通过抗炎来促进IR-PSMC细胞葡萄糖吸收及改善胰岛素抵抗。 展开更多
关键词 原代骨骼肌细胞 吴茱萸次碱 胰岛素抵抗 炎症因子 葡萄糖消耗
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甲基转移酶METTL21C影响鸡骨骼肌细胞成肌的发育 被引量：5
2
作者 李蕊清 尹美辰 +3 位作者 赵家荣 王令 张涛 路宏朝 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期2503-2508,共6页
本研究旨在探究甲基转移酶METTL21C在家禽骨骼肌发育分化过程中的作用。采用实时荧光定量PCR (quantitative Real-time PCR, qPCR)检测METTL21C基因在鸡不同组织中的表达情况,绘制其组织表达谱;选取3个时间点,检测其在骨骼肌组织中的表... 本研究旨在探究甲基转移酶METTL21C在家禽骨骼肌发育分化过程中的作用。采用实时荧光定量PCR (quantitative Real-time PCR, qPCR)检测METTL21C基因在鸡不同组织中的表达情况,绘制其组织表达谱;选取3个时间点,检测其在骨骼肌组织中的表达情况。通过酶消化法从鸡骨骼肌组织中分离得到原代细胞;将METTL21C超表达载体转染至原代鸡骨骼肌细胞,通过qPCR和Western blotting检测Pax7、MyoD、Myf5、MyoG等基因的表达水平。结果显示,METTL21C在心肌和骨骼肌组织中的表达量显著高于其他组织,在胚胎期和幼龄期骨骼肌中的表达呈上升趋势;超表达METTL21C后,成肌相关基因Pax7、MyoD、Myf5、MyoG的表达量显著升高。本研究初步发现甲基转移酶METTL21C具有促进家禽骨骼肌发育分化的作用,为骨骼肌发育的分子机理的研究及相关医学研究提供数据支持。 展开更多
关键词 METTL21C基因 原代骨骼肌细胞 成肌分化 生肌调节因子
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阳离子脂质体转染人类骨骼肌原代细胞的初步研究 被引量：2
3
作者 李华玲 周晓霞 《生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期8-10,共3页
探讨不同脂质体介导基因转染人类骨骼肌原代细胞的转染效率和基因的表达。将含有β-半乳糖苷酶LacZ结构基因的质粒,用三种不同的阳离子脂质体导入人类骨骼肌原代细胞中,通过X-Gal染色观察不同的转染效率。结果发现,Fugene 6转染效率最高... 探讨不同脂质体介导基因转染人类骨骼肌原代细胞的转染效率和基因的表达。将含有β-半乳糖苷酶LacZ结构基因的质粒,用三种不同的阳离子脂质体导入人类骨骼肌原代细胞中,通过X-Gal染色观察不同的转染效率。结果发现,Fugene 6转染效率最高,蓝染细胞达10%,其脂质体与DNA的最佳比例为3∶2。Fugene 6可有效地将外源基因导入骨骼肌原代细胞,而且外源基因可以长效高效地表达,有望用来作为基因治疗的载体。 展开更多
关键词 脂质体 转染 人骨骼肌原代细胞 LACZ基因
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免疫磁珠法分离培养小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞及鉴定
4
作者 刘美杰 张佳欣 +6 位作者 周嘉恒 安冏 白浩淼 胡旭晖 李沛凌 杨红燕 李嘉 《心脏杂志》 CAS 2023年第2期136-140,共5页
目的旨在建立一种有效分离、培养、扩增小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞(MMECs)的方法。方法采用胶原酶消化法、差速贴壁法以及免疫磁珠法分离纯化骨骼肌微血管内皮细胞,贴壁培养进行体外扩增。利用相差显微镜观察培养细胞的形态、MTT法... 目的旨在建立一种有效分离、培养、扩增小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞(MMECs)的方法。方法采用胶原酶消化法、差速贴壁法以及免疫磁珠法分离纯化骨骼肌微血管内皮细胞,贴壁培养进行体外扩增。利用相差显微镜观察培养细胞的形态、MTT法测定细胞的生长情况、CD31免疫荧光染色对其表型进行鉴定、流式细胞术鉴定细胞纯度。结果实验成功获取小鼠骨骼肌微血管内皮细胞,小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞在培养24 h后迅速贴壁,(3~6)d内迅速生长,呈梭形,单层排列,培养(6~8)d可长满培养皿底,呈铺路石样排布。MTT法测得培养第2代小鼠骨骼肌微血管内皮细胞的生长曲线呈倒“S”形。流式细胞术检测经差速贴壁联合磁珠纯化的CD31+的MMECs细胞可达97%以上。结论成功建立了一种简单、高效的分离小鼠骨骼肌微血管内皮细胞的方法,为开展与骨骼肌微血管内皮细胞相关研究提供了良好的实验方法和技术手段。 展开更多
关键词 细胞分离 原代培养 骨骼肌微血管内皮细胞 肌病 免疫磁珠
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3种转染试剂对牛原代骨骼肌卫星细胞转染条件的优化 被引量：4
5
作者 陈明明 李燕 +5 位作者 张晓娟 张林林 李新 丁向彬 刘新峰 郭宏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期62-71,共10页
为了选择适合牛原代骨骼肌卫星细胞的转染试剂与条件,本研究以带有绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pcDNA3.1-EGFP和pEGFP-C1作为外源基因,分别用Lipofectamine 3000、X-tremeGENE HP和FuGENE HD转染牛原代骨骼肌卫星细胞,通过荧光显微镜观察... 为了选择适合牛原代骨骼肌卫星细胞的转染试剂与条件,本研究以带有绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pcDNA3.1-EGFP和pEGFP-C1作为外源基因,分别用Lipofectamine 3000、X-tremeGENE HP和FuGENE HD转染牛原代骨骼肌卫星细胞,通过荧光显微镜观察、实时荧光定量PCR及Hoechst 33342染色评价转染效率。结果表明,对于同一时期、同一转染试剂,pcDNA3.1-EGFP转染效果优于pEGFP-C1;不同转染试剂之间,Lipofectamine 3000和X-tremeGENE HP转染效果优于FuGENE HD。Lipofectamine 3000转染后分化72h肌管最明显,FuGENE HD次之,X-tremeGENE HP转染后细胞死亡较多。采用1.0μL Lipofectamine 3000、1.5μL Lipofectamine 3000和X-tremeGENE HP转染细胞后EGFP表达量极显著高于FuGENE HD (P<0.01),但这三者之间差异不显著(P>0.05)。细胞转染效率与EGFP定量结果基本一致,1.0、1.5μL Lipofectamine 3000转染效率较高,分别达26.07%和24.77%,极显著高于FuGENE HD(5.59%)和X-tremeGENE HP(10.87%)的转染效率(P<0.01),但二者之间无显著差异(P>0.05);X-tremeGENE HP的转染效率极显著高于FuGENE HD (P<0.01)。综合考虑转染试剂的用量、细胞毒性及经济效益,本试验初步认为牛原代骨骼肌卫星细胞转染宜采用Lipofectamine 3000,其与质粒DNA的比例为1∶1时转染效率最高。本试验结果可为原代细胞的转染提供重要的参考价值。 展开更多
关键词 牛原代骨骼肌卫星细胞 转染 LIPOFECTAMINE 3000 X-tremeGENE HP FuGENE HD
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