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呼吸道合胞病毒滴度双抗体夹心ELISA检测方法的建立
1
作者
王婉
唐悦
+4 位作者
赵忆宁
陈玥如
傅生芳
程亚慧
李雄雄
《国际免疫学杂志》
CAS
2024年第1期33-38,共6页
目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)检测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)滴度。方法以RSV融合前F蛋白的两种抗体AM14与D25作为捕获抗体和检...
目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)检测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)滴度。方法以RSV融合前F蛋白的两种抗体AM14与D25作为捕获抗体和检测抗体,通过对其抗体浓度的优化来确定DAS-ELISA较适反应条件,并对该方法的特异性、重复性、灵敏度及适用性进行验证。结果选择用AM14抗体作为捕获抗体,D25作为检测抗体。捕获抗体AM14较适工作浓度为20μg/mL,检测抗体D25的稀释比例为1∶3000。建立的DAS-ELISA与轮状病毒(rotavirus,RV)和人3型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3,HPIV-3)无交叉反应,且不同稀释倍数的RSV病毒进行批内与批间重复试验的变异系数(coefficient of variation,CV)均<10%;不同亚型的RSV及蛋白进行试验,均能检测到病毒滴度;检测结果与CCID50比较,可检测的稀释倍数略高。结论建立了检测RSV滴度的DAS-ELISA,该方法可为实验室RSV病毒滴度检测提供依据。
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关键词
呼吸道合胞病毒
融合前F蛋白
双抗体夹心ELISA
病毒滴度
原文传递
乙型肝炎病毒前-X融合蛋白结合蛋白的筛选
2
作者
肖鸿敏
任建林
+4 位作者
潘金水
施华秀
许鸿志
周飞
董菁
《中国肝脏病杂志(电子版)》
CAS
2010年第2期1-5,共5页
目的利用酵母双杂交技术自肝细胞cDNA文库中筛选HBV前-X(pre-X)融合蛋白结合蛋白,探讨pre-X融合蛋白的生物学功能。方法 PCR扩增HBV pre-X基因序列,根据酵母双杂合体系构建诱饵质粒pDEST32-pre-X,并测定DNA序列验证。将质粒pDEST32-pre-...
目的利用酵母双杂交技术自肝细胞cDNA文库中筛选HBV前-X(pre-X)融合蛋白结合蛋白,探讨pre-X融合蛋白的生物学功能。方法 PCR扩增HBV pre-X基因序列,根据酵母双杂合体系构建诱饵质粒pDEST32-pre-X,并测定DNA序列验证。将质粒pDEST32-pre-X转化为酵母细胞MaV203,应用Western blot验证pre-X融合蛋白在酵母细胞中正确表达,再与转化为人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞pDEST22配合,在营养缺陷型培养基和X-gal上三重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的猎物质粒进行DNA测序。利用核苷酸数据库及生物信息学技术,对筛选结果进行分析。结果成功构建pDEST32-pre-X诱饵质粒,Western blot证实转化诱饵质粒的酵母细胞能正确表达pre-X融合蛋白,pDEST32-pre-X及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后,选择性培养出45个菌落,经缺陷培养基分离及X-gal检测后筛选出3个阳性克隆,测序结果为一种蛋白,即TCP1蛋白。结论用酵母双杂交技术筛选出1个与pre-X融合蛋白相互作用的肝细胞结合蛋白,为进一步研究HBV pre-X融合蛋白的作用提供了新线索。
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关键词
乙型肝炎病毒
酵母双杂交技术
前-X融合蛋白
结合蛋白
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职称材料
题名
呼吸道合胞病毒滴度双抗体夹心ELISA检测方法的建立
1
作者
王婉
唐悦
赵忆宁
陈玥如
傅生芳
程亚慧
李雄雄
机构
兰州生物制品研究所有限责任公司第二研究室、甘肃省疫苗工程技术研究中心
出处
《国际免疫学杂志》
CAS
2024年第1期33-38,共6页
文摘
目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)检测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)滴度。方法以RSV融合前F蛋白的两种抗体AM14与D25作为捕获抗体和检测抗体,通过对其抗体浓度的优化来确定DAS-ELISA较适反应条件,并对该方法的特异性、重复性、灵敏度及适用性进行验证。结果选择用AM14抗体作为捕获抗体,D25作为检测抗体。捕获抗体AM14较适工作浓度为20μg/mL,检测抗体D25的稀释比例为1∶3000。建立的DAS-ELISA与轮状病毒(rotavirus,RV)和人3型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3,HPIV-3)无交叉反应,且不同稀释倍数的RSV病毒进行批内与批间重复试验的变异系数(coefficient of variation,CV)均<10%;不同亚型的RSV及蛋白进行试验,均能检测到病毒滴度;检测结果与CCID50比较,可检测的稀释倍数略高。结论建立了检测RSV滴度的DAS-ELISA,该方法可为实验室RSV病毒滴度检测提供依据。
关键词
呼吸道合胞病毒
融合前F蛋白
双抗体夹心ELISA
病毒滴度
Keywords
Rrespiratory
syncytial
virus
pre
-
fusion
protein
Double
antibody
sandwich
ELISA
Virus
titer
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
乙型肝炎病毒前-X融合蛋白结合蛋白的筛选
2
作者
肖鸿敏
任建林
潘金水
施华秀
许鸿志
周飞
董菁
机构
福建医科大学教学医院(厦门大学附属中山医院)
福建医科大学附属第一医院肝病中心
出处
《中国肝脏病杂志(电子版)》
CAS
2010年第2期1-5,共5页
基金
厦门市首批重大疾病科研攻关项目(WKZ0501)
厦门市卫生局医学科研立项项目(WSK0506)
文摘
目的利用酵母双杂交技术自肝细胞cDNA文库中筛选HBV前-X(pre-X)融合蛋白结合蛋白,探讨pre-X融合蛋白的生物学功能。方法 PCR扩增HBV pre-X基因序列,根据酵母双杂合体系构建诱饵质粒pDEST32-pre-X,并测定DNA序列验证。将质粒pDEST32-pre-X转化为酵母细胞MaV203,应用Western blot验证pre-X融合蛋白在酵母细胞中正确表达,再与转化为人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞pDEST22配合,在营养缺陷型培养基和X-gal上三重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的猎物质粒进行DNA测序。利用核苷酸数据库及生物信息学技术,对筛选结果进行分析。结果成功构建pDEST32-pre-X诱饵质粒,Western blot证实转化诱饵质粒的酵母细胞能正确表达pre-X融合蛋白,pDEST32-pre-X及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后,选择性培养出45个菌落,经缺陷培养基分离及X-gal检测后筛选出3个阳性克隆,测序结果为一种蛋白,即TCP1蛋白。结论用酵母双杂交技术筛选出1个与pre-X融合蛋白相互作用的肝细胞结合蛋白,为进一步研究HBV pre-X融合蛋白的作用提供了新线索。
关键词
乙型肝炎病毒
酵母双杂交技术
前-X融合蛋白
结合蛋白
Keywords
Hepatitis
B
virus
Yeast-two
hybrid
technique
pre
-X
fusion
protein
Binding
protein
分类号
R512.62 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
呼吸道合胞病毒滴度双抗体夹心ELISA检测方法的建立
王婉
唐悦
赵忆宁
陈玥如
傅生芳
程亚慧
李雄雄
《国际免疫学杂志》
CAS
2024
0
原文传递
2
乙型肝炎病毒前-X融合蛋白结合蛋白的筛选
肖鸿敏
任建林
潘金水
施华秀
许鸿志
周飞
董菁
《中国肝脏病杂志(电子版)》
CAS
2010
0
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