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Construction of DNA damage response gene pprI function-deficient and function-complementary mutants in Deinococcus radiodurans 被引量:12
1
作者 GAOGuanjun LUHuiming HUANGLifen HUAYuejin 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2005年第4期311-316,共6页
PprI, a DNA damage response factor from the extraordinary radioresistant bacterium Deinococcus radi- odurans, plays a central regulatory role in multiple DNA damage repair. In this study, a fusion DNA fragment carry- ... PprI, a DNA damage response factor from the extraordinary radioresistant bacterium Deinococcus radi- odurans, plays a central regulatory role in multiple DNA damage repair. In this study, a fusion DNA fragment carry- ing kanamycin resistance gene with the D. radiodurans groEL promoter was cloned by PCR amplification and reversely inserted into the pprI locus in the genome of the wild-type strain R1. The resulting pprI-deficient strain, designated YR1, was very sensitive to ionizing radiation. Meanwhile, the re- combinant DNA fragment was cloned into the shuttle vector pRADZ3, and resulted in plasmid pRADK with kanamycin resistance in D. radiodurans. The fragments containing com- plete pprI gene and 3′-terminal deletion pprI△ were cloned into plasmid pRADK. The resulted plasmids designated pRADKpprI and pRADKpprI△ were then transformed to YR1. Results show that YR1 carrying pRADKpprI was able to fully restore the extreme radioresistance to the same level as the wild-type D. raiodurans R1, whereas YR1 pRADKpprI△ failed to do so. Construction of DNA repair switch PprI function-deficient and function-complementary mutants in D. radiodurans is not only useful to elucidating the relationship between domains and functions of PprI pro- tein, but also opens the door to the further studies of the bio- logical functions of PprI protein in vivo. 展开更多
关键词 ppri 基因 DNA 细菌 DEINOCOCCUS radiodurans 突变异种 生物体 致电离辐射 生物特征
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耐辐射球菌pprI在大肠杆菌中表达增强细胞抗氧化能力的研究 被引量:9
2
作者 乐东海 高冠军 华跃进 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期324-327,共4页
将耐辐射球菌 (Deinococcusradiodurans)与DNA修复有关的开关基因—pprI通过穿梭质粒pRADZ3导入大肠杆菌TG1中 ,使其在正常培养条件下 (不需诱导剂 )表达PprI蛋白 ,并通过Westernblot证实该基因在TG1中可稳定表达。与转化了空白质粒pRAD... 将耐辐射球菌 (Deinococcusradiodurans)与DNA修复有关的开关基因—pprI通过穿梭质粒pRADZ3导入大肠杆菌TG1中 ,使其在正常培养条件下 (不需诱导剂 )表达PprI蛋白 ,并通过Westernblot证实该基因在TG1中可稳定表达。与转化了空白质粒pRADZ3TG1对照 ,观察了改造后的两种大肠杆菌在有H2 O2 氧化压力下的存活率和大肠杆菌中两种过氧化氢酶 (KatE ,KatG)的活性表达差异。结果表明 ,无论在指数生长期还是稳定生长期 ,能表达PprI蛋白的大肠杆菌比对照的存活率要高出 1 0 %左右 ;非变性电泳结果表明 ,耐辐射球菌pprI在大肠杆菌中的表达使得KatE活性在指数生长期与稳定生长期分别增加 1 5~ 2倍和 2 5~ 3倍。 展开更多
关键词 耐辐射球菌 大肠杆菌 ppri H2O2 KATE
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耐辐射球菌pprI突变株的蛋白质组学分析 被引量:8
3
作者 郑智国 张春潮 华跃进 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期27-31,共5页
PprI由dr0167编码,在耐辐射球菌的极端抗性中起重要作用.pprI突变株对于电离辐射、紫外线辐射、丝裂霉素C等都很敏感.与正常培养的野生型菌株比较,正常培养的pprI突变株的双向图谱有明显的变化,其中有18个蛋白质表达量增加,7个蛋白质表... PprI由dr0167编码,在耐辐射球菌的极端抗性中起重要作用.pprI突变株对于电离辐射、紫外线辐射、丝裂霉素C等都很敏感.与正常培养的野生型菌株比较,正常培养的pprI突变株的双向图谱有明显的变化,其中有18个蛋白质表达量增加,7个蛋白质表达量减少.在有差异的25个蛋白质中,我们用MALDI-TOF质谱仪成功鉴定了13个,这些蛋白质在细胞中行使不同的功能,包括:1糖类转运与代谢;2能量的产生与转化;3无机离子转运与代谢;4氨基酸转运与代谢;5翻译后修饰,蛋白代谢,分子伴侣及一些未知的功能等.研究表明,PprI不仅调控与DNA修复直接相关的基因表达,而且调控一个极其复杂的网络系统,这个系统包括行使各种生物学的功能蛋白. 展开更多
关键词 双向电泳 质谱 耐辐射球菌 ppri
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抗辐射球菌pprI基因活体电转染救治小鼠γ射线损伤的实验研究 被引量:8
4
作者 陈婷婷 连利霞 +1 位作者 牟英 杨占山 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2010年第3期166-171,共6页
为研究抗辐射球菌pprI基因活体电转染对哺乳动物急性放射损伤的影响,探讨一种新的救治放射损伤的转基因技术。将自行构建的pCMV-HA-pprI质粒注入接受γ射线照射的小鼠肌肉内,采用活体基因电转导技术将该基因导入细胞内,观察照后第1、7... 为研究抗辐射球菌pprI基因活体电转染对哺乳动物急性放射损伤的影响,探讨一种新的救治放射损伤的转基因技术。将自行构建的pCMV-HA-pprI质粒注入接受γ射线照射的小鼠肌肉内,采用活体基因电转导技术将该基因导入细胞内,观察照后第1、7、14、28和35天小鼠死亡率、血细胞计数以及骨髓细胞、脾脏和胸腺淋巴细胞凋亡的变化。结果显示,6Gyγ射线可引起小鼠急性致死性放射损伤,转基因组小鼠死亡率(1/10)明显低于单纯照射组小鼠死亡率(4/10)。与单纯照射组和空载体转染组比较,pprI基因转染组小鼠外周血白细胞总数及红细胞总数于照后第7天显著增高(p<0.05);血小板数于第7、14天显著增高(p<0.05);血淋巴细胞百分率于照后35天恢复正常;pprI基因转染组脾细胞凋亡率于第7、14、28天显著降低(p<0.05);胸腺细胞凋亡率于第1、7、14、35天显著降低(p<0.05);骨髓细胞凋亡率于第1、7、14和28天显著降低(p<0.05),并且胸腺细胞和骨髓细胞凋亡率均于照后28天恢复正常。结果表明,抗辐射菌pprI基因活体电转染对动物急性致死性放射损伤具有明显的防治作用。 展开更多
关键词 抗辐射球菌 ppri 转基因 放射损伤 治疗
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奇球菌pprI基因增强枯草芽孢杆菌细胞抗性的研究 被引量:4
5
作者 高加旺 谢水波 +3 位作者 唐振平 刘迎久 刘金香 唐东山 《南华大学学报(自然科学版)》 2010年第1期78-82,共5页
pprI是近来在奇球菌(Deinococcus Radiodurans)中发现的一个极其重要的DNA修复开关基因.本实验利用穿梭质粒pRADZ3将其转入枯草芽孢杆菌(B-1)中稳定表达,并与转化了空白质粒的菌株(B-2)对照,观察了改造后的两种菌株在H2O2氧化压力和紫... pprI是近来在奇球菌(Deinococcus Radiodurans)中发现的一个极其重要的DNA修复开关基因.本实验利用穿梭质粒pRADZ3将其转入枯草芽孢杆菌(B-1)中稳定表达,并与转化了空白质粒的菌株(B-2)对照,观察了改造后的两种菌株在H2O2氧化压力和紫外线辐照下的存活率.结果表明,在两种情况下B-1菌株存活率明显高于B-2菌株.证明奇球菌pprI基因在枯草芽孢杆菌中的稳定表达能够增强细胞抗氧化与抗紫外辐射能力. 展开更多
关键词 奇球菌 枯草芽孢杆菌 ppri H2O2 紫外线
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耐辐射奇球菌DNA损伤响应开关蛋白PprI的研究进展 被引量:3
6
作者 黎婷婷 王梁燕 +1 位作者 王云光 华跃进 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1106-1110,共5页
耐辐射奇球菌是迄今为止发现的最具辐射抗性的生物之一。其体内的Ppr I蛋白在整个DNA辐射损伤修复过程中起着必不可少的作用,ppr I作为一个细胞全局性的开关基因,协调控制DNA损伤响应与修复过程中众多细胞通路的基因表达。本文探讨了Pp... 耐辐射奇球菌是迄今为止发现的最具辐射抗性的生物之一。其体内的Ppr I蛋白在整个DNA辐射损伤修复过程中起着必不可少的作用,ppr I作为一个细胞全局性的开关基因,协调控制DNA损伤响应与修复过程中众多细胞通路的基因表达。本文探讨了Ppr I在耐辐射奇球菌抗辐射和抗氧化中的生物学功能、相关结构功能以及对其他原核及真核生物抗逆性的影响,并展望了其潜在的生物学新功能与意义,旨在为进一步研究耐辐射奇球菌的辐射抗性机制提供理论依据。 展开更多
关键词 耐辐射奇球菌 ppri DNA损伤响应与修复 抗逆性
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油菜对Sr胁迫的生理生态响应 被引量:3
7
作者 冯德玉 代其林 +3 位作者 崔广艳 鲜先毅 周文波 王劲 《植物学研究》 2013年第5期125-129,共5页
在砂培条件下,采用不同浓度的Sr2+ (0、05、1、5、10 mmol/L)对转pprI基因油菜幼苗(Brassica napus L.)和非转基因油菜幼苗处理30 d,分析油菜幼苗对Sr的吸收积累情况,并研究油菜对Sr胁迫的生理生态响应。结果表明:转基因油菜幼苗和非转... 在砂培条件下,采用不同浓度的Sr2+ (0、05、1、5、10 mmol/L)对转pprI基因油菜幼苗(Brassica napus L.)和非转基因油菜幼苗处理30 d,分析油菜幼苗对Sr的吸收积累情况,并研究油菜对Sr胁迫的生理生态响应。结果表明:转基因油菜幼苗和非转基因油菜幼苗对Sr2+的吸收量均随Sr2+胁迫浓度的升高而升高,转基因油菜根部的Sr2+含量大于非转基因油菜根部,而地上部分的Sr2+含量却小于非转基因油菜。与对照相比,在Sr2+胁迫下的转基因油菜和非转基因油菜脯氨酸(Pro)含量则随Sr2+浓度的提高而升高,而SOD、POD活性和叶绿素含量都随Sr2+浓度的增加呈先上升后下降趋势。与非转基因油菜相比,转基因油菜在各种胁迫浓度下的SOD、POD活性、叶绿素含量以及脯氨酸含量都高于非转基因油菜。因此得出结论:转pprI基因油菜较非转基因油菜更具有对Sr胁迫的抗性和耐受能力。 展开更多
关键词 ppri 油菜 Sr2+ 生理生态响应
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耐辐射奇球菌pprI和pprA基因在真核细胞293T中的表达 被引量:2
8
作者 肖潇 马云 +5 位作者 肖方竹 唐艳 杨奇 黄波 唐旻 何淑雅 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2016年第2期31-35,共5页
以pGADT-7-pprA、pet28a-pprI载体为模板,构建pEGFP-N1-pprA、pDsRed1-N1-flag-pprI真核表达载体,脂质体2000介导将两个重组载体共转入293T细胞。双酶切及琼脂糖凝胶电泳显示在4700、1000 bp处与4800、1100 bp处出现目的条带。测序结果... 以pGADT-7-pprA、pet28a-pprI载体为模板,构建pEGFP-N1-pprA、pDsRed1-N1-flag-pprI真核表达载体,脂质体2000介导将两个重组载体共转入293T细胞。双酶切及琼脂糖凝胶电泳显示在4700、1000 bp处与4800、1100 bp处出现目的条带。测序结果显示构建序列与模板序列一致,氨基酸序列100%正确。荧光显微镜下见到红色和绿色荧光;Western blot结果显示在不同检测水平65 kDa及60 kDa大小处有融合蛋白表达。结果提示pEGFP-N1-pprA、pDsRed1-N1-flag-pprI真核表达载体构建成功,并在离体293T细胞中共同表达蛋白。证明原核基因pprI、pprA能够在真核细胞中共表达,为后续实验验证DR菌高抗性基因pprA、pprI及其产物在辐射调控网络中的相互作用和协同作用、提高真核细胞的辐射抗性提供了研究基础。 展开更多
关键词 耐辐射奇球菌 ppri pprA 真核细胞 脂质体2000
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Ring-like nucleoid does not play a key role in radioresistance of Deinococcus radiodurans 被引量:1
9
作者 GAO GuanJun, LU HuiMing, YIN LongFei & HUA YueJin Institute of Nuclear-Agricultural Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2007年第4期525-529,共5页
The conclusion based on transmission electron microscopy, "the tightly packed ring-like nucleoid of the Deinococcus radiodurans R1 is a key to radioresistance", has instigated lots of debates. In this study,... The conclusion based on transmission electron microscopy, "the tightly packed ring-like nucleoid of the Deinococcus radiodurans R1 is a key to radioresistance", has instigated lots of debates. In this study, according to the previous research of PprI’s crucial role in radioresistance of D. radiodurans, we have attempted to examine and compare the nucleoid morphology differences among wild-type D. ra-diodurans R1 strain, pprI function-deficient mutant (YR1), and pprI function-complementary strains (YR1001, YR1002, and YR1004) before and after exposure to ionizing irradiation. Fluorescence mi-croscopy images indicate: (1) the majority of nucleoid structures in radioresistant strain R1 cells ex-hibit the tightly packed ring-like morphology, while the pprI function-deficient mutant YR1 cells carrying predominate ring-like structure represent high sensitivity to irradiation; (2) as an extreme radioresistant strain similar to wild-type R1, pprI completely function-complementary strain YR1001 almost displays the loose and irregular nucleoid morphologies. On the other hand, another radioresistant pprI partly function-complementary strain YR1002’s nucleiods exhibit about 60% ring-like structure; (3) a PprI C-terminal deletion strain YR1004 consisting of approximately 60% of ring-like nucleoid is very sensi-tive to radiation. Therefore, our present experiments do not support the conclusion that the ring-like nucleoid of D. radiodurans does play a key role in radioresistance. 展开更多
关键词 DEINOCOCCUS radiodurans R1 RING-LIKE NUCLEOID ppri ionizing irradiation RADIORESISTANCE
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抗辐射球菌pprI基因活体电转染对受照小鼠睾丸病理学作用的研究 被引量:1
10
作者 连利霞 陈婷婷 +2 位作者 张永芹 王秀珍 杨占山 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2011年第1期17-22,共6页
观察抗辐射球菌pprI基因活体电转染小鼠受γ射线辐照后睾丸组织的形态学变化,探讨一种新的原核基因表达对哺乳动物生殖系统损伤的防治作用。将含有pprI基因的pCMV-HA-pprI质粒注入小鼠肌肉内,然后采用活体基因电转染技术将该基因导入细... 观察抗辐射球菌pprI基因活体电转染小鼠受γ射线辐照后睾丸组织的形态学变化,探讨一种新的原核基因表达对哺乳动物生殖系统损伤的防治作用。将含有pprI基因的pCMV-HA-pprI质粒注入小鼠肌肉内,然后采用活体基因电转染技术将该基因导入细胞内,对照组小鼠和转基因组小鼠均采用60Coγ射线全身照射,吸收剂量为6 Gy,分别于辐照后第1、7、14、28和35天取下注射部位肌肉组织,提取组织总蛋白,进行PprI蛋白的Western blotting检测。同时取小鼠睾丸组织,石蜡包埋制片,苏木精-伊红染色,进行镜下病理学观察。PprI蛋白在辐照后第1天有较强的表达,说明pprI质粒成功转染至小鼠体内。对照组小鼠在照后第1天生精小管结构完整,各级生精细胞未见明显病理变化;第7天在部分生精小管观察到少量精原细胞坏死;第14天生精细胞变性坏死明显加重,生精小管萎缩变细,相互"远离";至第28天各级生精细胞及精子极度减少,生精小管内细胞分层结构基本消失,甚至空虚,仅残留支持细胞,间质疏松;第35天空虚的生精小管内开始出现新生精原细胞。而转基因组小鼠辐照后第1天生精细胞未见明显病理变化;第7天部分生精小管见少量精原细胞坏死,较单纯照射组轻;第14天生精细胞变性坏死加重,各级生精细胞数量减少;第28天局部生精小管内出现新生精原细胞,基底层结构基本显现;第35天转基因组局部生精小管内新生生精细胞增多,出现分层现象。研究结果表明,pprI基因活体电转染对小鼠睾丸γ辐射损伤具有显著的防治作用,睾丸辐射损伤修复明显提前。 展开更多
关键词 抗辐射球菌 ppri 活体电穿孔 睾丸组织 病理学
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一个控制超强电离辐射抗性开关基因的研究进展
11
作者 陆慧智 华跃进 《空间科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期133-140,共8页
电离辐射广泛存在于地球和空间,会引起生物体内的DNA损伤,导致机体突变甚至死亡.生物体的DNA损伤响应对于稳定基因组的完整性至关重要.耐辐射奇球菌因其超强的DNA修复能力成为研究DNA损伤修复的模式生物之一.PprI-DdrO系统是近年来发现... 电离辐射广泛存在于地球和空间,会引起生物体内的DNA损伤,导致机体突变甚至死亡.生物体的DNA损伤响应对于稳定基因组的完整性至关重要.耐辐射奇球菌因其超强的DNA修复能力成为研究DNA损伤修复的模式生物之一.PprI-DdrO系统是近年来发现的一种新型且高效的损伤响应途径,PprI作为响应损伤的重要开关蛋白,通过酶切DdrO调控DNA损伤响应基因的表达.本文从功能、结构、激活机制和潜在应用价值几方面描述了PprI的研究进展. 展开更多
关键词 ppri 电离辐射 DNA损伤响应 耐辐射奇球菌
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针刺联合正骨手法对产后骨盆环损伤综合征患者JOA和ODI的改善效果 被引量:2
12
作者 王明星 李树怀 +4 位作者 董小磊 杜美容 刘伟然 孙映雪 王巍 《西部中医药》 2021年第12期136-138,共3页
目的:探讨针刺联合正骨手法对产后骨盆环损伤综合征(postnatal pelvic ring injury,PPRI)患者日本骨科协会评估治疗评分(Japanese orthopaedic association scores,JOA)和腰椎Oswestry功能障碍指数(oswestry disability index,ODI)的改... 目的:探讨针刺联合正骨手法对产后骨盆环损伤综合征(postnatal pelvic ring injury,PPRI)患者日本骨科协会评估治疗评分(Japanese orthopaedic association scores,JOA)和腰椎Oswestry功能障碍指数(oswestry disability index,ODI)的改善效果。方法:按照随机数字表法将86例PPRI患者随机分为观察组和对照组,每组43例,对照组给予常规康复联合正骨手法治疗,观察组给予常规康复、正骨手法及针刺治疗。观察两组干预前后JOA评分、ODI和疼痛视觉模拟评分(visual analogue score,VAS评分)及临床疗效。结果:干预后两组JOA评分均高于干预前(P<0.05),且观察组增高更明显(P<0.05);干预后两组VAS和ODI均较干预前显著降低(P<0.05),且观察组降低更明显(P<0.05);观察组治疗总有效率[96.67%(42/43)]高于对照组[81.40%(35/43)](P<0.05)。结论:针刺联合正骨手法治疗PPRI,可改善患者腰椎功能,减轻疼痛程度,提高临床有效率。 展开更多
关键词 骨盆环损伤综合征 产后身痛 产后腰痛 针刺 正骨手法
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促DNA修复多效蛋白诱导因子pprI逆转录病毒载体系统的构建及其鉴定
13
作者 付荣 应南娇 《生物技术世界》 2013年第7期61-62,共2页
目的:为实现耐辐射球菌pprI基因在哺乳动物细胞中的稳定遗传与表达,构建重组逆转录病毒载体质粒pLXIN-pprI。方法:将目的基因pprI亚克隆经过双酶切后定向连接到pLXIN质粒上,构建逆转录病毒重组质粒pLXIN-pprI。将pLXIN-pprI转化大肠杆... 目的:为实现耐辐射球菌pprI基因在哺乳动物细胞中的稳定遗传与表达,构建重组逆转录病毒载体质粒pLXIN-pprI。方法:将目的基因pprI亚克隆经过双酶切后定向连接到pLXIN质粒上,构建逆转录病毒重组质粒pLXIN-pprI。将pLXIN-pprI转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,氨苄青霉素筛选后抽提获得重组质粒pLXIN-pprI,双酶切及DNA测序鉴定。结果:酶切鉴定及测序结果显示结果与预期相符,pprI基因成功插入pLXIN逆转录病毒载体中。结论:重组逆转录病毒载体质粒pLXIN-pprI构建成功,为实现耐辐射球菌pprI基因在哺乳动物细胞中的重组与表达奠定了基础。 展开更多
关键词 耐辐射球菌 ppri 逆转录病毒载体 pLXIN
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转pprI基因油菜对^(133)Cs或^(88)Sr胁迫的响应 被引量:7
14
作者 冯德玉 代其林 +3 位作者 崔广艳 鲜先毅 周文波 王劲 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1298-1305,共8页
通过露地盆栽试验,研究了转基因和非转基因油菜幼苗对土壤中不同浓度的133Cs或88Sr单一胁迫的生理响应。结果表明,在不同浓度的133Cs或88Sr处理时,随处理浓度的增加,不管是转基因还是非转基因油菜,其幼苗对133Cs或88Sr的吸收量都增加,... 通过露地盆栽试验,研究了转基因和非转基因油菜幼苗对土壤中不同浓度的133Cs或88Sr单一胁迫的生理响应。结果表明,在不同浓度的133Cs或88Sr处理时,随处理浓度的增加,不管是转基因还是非转基因油菜,其幼苗对133Cs或88Sr的吸收量都增加,其中二者根部的33Cs或88Sr含量均大于地上部分的含量,同时二者根部对88Sr的吸收大于对133Cs的吸收。但是转基因植株根系吸收133Cs或88Sr的含量大于非转基因油菜根系吸收量,转基因油菜地上部分的133Cs或88Sr含量却小于非转基因油菜地上部分的含量,表明转基因油菜根系更易于吸收和固着133Cs或88Sr,并向地上部分进行运输。随核素浓度增加,非转基因和转基因油菜苗叶片中的丙二醛含量逐渐增加,根系活力均表现为不断减弱,幼苗叶片的可溶性蛋白、POD和SOD活性都呈现先上升后下降的趋势;但在相同浓度的133Cs或88Sr处理后,转基因油菜的丙二醛含量总低于非转基因油菜,转基因油菜的可溶性蛋白含量、POD和SOD活性均高于非转基因油菜,同时转基因油菜的根系活力也略高于非转基因油菜。研究表明:转pprI基因油菜比非转基因油菜具有更强的应对133Cs或88Sr胁迫的抗性能力。本研究为进一步研究pprI基因的调控机理及该基因对137Cs成90Sr协迫响应提供理论和实验基础。 展开更多
关键词 ppri基因 油菜 ^133Cs ^88Sr 胁迫响应
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耐辐射球菌PprI蛋白质表达及其纯化的实验研究 被引量:5
15
作者 张永芹 周辉 +1 位作者 陈洁 杨占山 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2011年第2期117-122,共6页
为了在大肠杆菌中高效表达耐辐射球菌PprI融合蛋白并进行纯化,本研究以PCMV-HA-pprI质粒为模板,PCR扩增pprI基因全序列,经Nco I和EcoR I双酶切后定向克隆到pET-28a表达载体中,构建重组原核表达质粒pET-28a-His-pprI,并转入E.coli BL21(D... 为了在大肠杆菌中高效表达耐辐射球菌PprI融合蛋白并进行纯化,本研究以PCMV-HA-pprI质粒为模板,PCR扩增pprI基因全序列,经Nco I和EcoR I双酶切后定向克隆到pET-28a表达载体中,构建重组原核表达质粒pET-28a-His-pprI,并转入E.coli BL21(DE3)RP。IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。对蛋白表达优化诱导时菌液的A600值、IPTG浓度、诱导时间和温度表达条件。诱导表达的PprI融合蛋白采用Ni-NTA His-Bind树脂和分子筛两步法进行纯化。结果显示,Western blotting检测的表达产物确为6×His-PprI融合蛋白,相对分子质量约为37 KD。不同诱导浓度、温度和时间在相对分子量为37 KD处见到特异性的PprI蛋白条带具有一定的差异,目的蛋白在上清和沉淀中均有表达。BCA法测得纯化蛋白质浓度为0.15 mg/mL。结果表明,本研究成功构建了耐辐射球菌pprI基因的pET-28a-His-pprI重组原核表达载体,并获得纯化的毫克级耐辐射球菌PprI融合蛋白,为进一步研究PprI蛋白的抗放作用和免疫等性能奠定了基础。 展开更多
关键词 耐辐射球菌 ppri基因 原核表达质粒 蛋白表达 纯化
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耐辐射球菌PprI蛋白对急性放射损伤小鼠防护作用的初步研究 被引量:7
16
作者 陈洁 张永芹 +1 位作者 毕洁静 杨占山 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2012年第5期286-290,共5页
研究耐辐射球菌PprI蛋白对哺乳动物急性放射损伤的防护作用,初步探讨其作为一种新的抗辐射蛋白的作用机制。将PprI蛋白或生理盐水注射入小鼠肌肉内,观察辐照后第1、7、14、28天小鼠外周血象以及小鼠骨髓、胸腺和脾脏淋巴细胞的凋亡情况... 研究耐辐射球菌PprI蛋白对哺乳动物急性放射损伤的防护作用,初步探讨其作为一种新的抗辐射蛋白的作用机制。将PprI蛋白或生理盐水注射入小鼠肌肉内,观察辐照后第1、7、14、28天小鼠外周血象以及小鼠骨髓、胸腺和脾脏淋巴细胞的凋亡情况。研究结果表明:与生理盐水注射组相比,PprI蛋白注射组外周血白细胞计数于照后第28天显著增高(p<0.05);外周血小板数和淋巴细胞百分率于照后第1、7天显著增高(p<0.05);PprI蛋白注射组脾脏淋巴细胞凋亡率在照后第1、7、14天明显降低(p<0.05);胸腺淋巴细胞凋亡率于照后第14和28天明显降低(p<0.05);骨髓细胞凋亡率在照后第1、14和28天明显降低(p<0.05);并且骨髓细胞凋亡率于照后第28天基本恢复正常。上述结果初步表明,耐辐射球菌PprI蛋白对哺乳动物急性放射损伤有着明显的防护作用。 展开更多
关键词 耐辐射球菌 ppri蛋白 放射损伤 防护
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原核pprⅠ基因活体转染对系统性红斑狼疮小鼠氧化应激的影响 被引量:4
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作者 彭可君 夏洪娇 +1 位作者 何淑雅 廖永强 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1293-1297,共5页
目的:通过检测耐辐射奇球菌ppr I基因活体转染系统性红斑狼疮(SLE)小鼠的氧化应激和疾病活动性指标,探讨其对SLE小鼠氧化应激状态的影响。方法:62只纯品系B6. MRL-Faslpr NJU雌性小鼠随机分成3组,未转染组(20只),pEGFP-c1空载体转染组(2... 目的:通过检测耐辐射奇球菌ppr I基因活体转染系统性红斑狼疮(SLE)小鼠的氧化应激和疾病活动性指标,探讨其对SLE小鼠氧化应激状态的影响。方法:62只纯品系B6. MRL-Faslpr NJU雌性小鼠随机分成3组,未转染组(20只),pEGFP-c1空载体转染组(20只),pEGFP-c1-pprⅠ转染组(22只),纯品系C57BL/6健康小鼠作为健康对照组(20只)。应用活体电转染技术将pEGFP-c1空载体及pEGFP-c1-pprⅠ基因重组质粒转入SLE小鼠股前肌肉。Western blot鉴定转染后SLE小鼠外周血pEGFP-c1和pEGFP-c1-pprⅠ融合基因表达。采用化学比色法检测各组小鼠外周血氧化应激标志物,ELISA法检测抗ds DNA抗体,免疫比浊法检测补体C4和C-反应蛋白。结果:(1)Western blot检测结果提示,质粒转染一周后均能在小鼠体内成功表达,且无毒副作用;(2)与未转染质粒和pEGFP-c1转染组SLE小鼠相比,pEGFP-c1-pprⅠ转染组SLE小鼠GSH含量显著升高(P<0. 01),丙二醛(MDA)、蛋白质羰基(Carbonyls)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量显著降低(P<0. 01),超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性明显升高(P<0. 05),血浆抗ds DNA抗体滴度和CRP含量显著降低(P<0. 01),补体C4明显升高(P<0. 05),与健康组相比,各项指标差异无统计学意义(P>0. 05);(3)与未转染质粒和pEGFP-c1转染组SLE小鼠相比,pEGFPc1-ppr I转染组SLE小鼠淋巴细胞凋亡率和死亡率明显下降(P<0. 01),与健康小鼠相比,差异无统计学意义(P>0. 05)。结论:耐辐射奇球菌ppr I基因活体转染后能在SLE小鼠体内稳定表达且能调节体内的氧化应激状态,降低SLE小鼠的疾病活动度。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮小鼠 氧化应激 淋巴细胞凋亡 ppri基因
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^(60)Co γ射线辐照对转基因和非转基因烟草抗氧化酶活性的影响 被引量:4
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作者 杜世章 代其林 +5 位作者 刘婷婷 奉斌 田霞 龚元亚 孙英坤 王劲 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期456-460,497,共6页
以转pprI基因烟草植株为材料,研究了60Coγ射线辐照后转pprI基因烟草抗氧化酶活性及其基因转录水平的变化。结果表明,经0、100、200、300、400和500Gy 60Coγ射线辐照后,转基因和非转基因烟草的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和... 以转pprI基因烟草植株为材料,研究了60Coγ射线辐照后转pprI基因烟草抗氧化酶活性及其基因转录水平的变化。结果表明,经0、100、200、300、400和500Gy 60Coγ射线辐照后,转基因和非转基因烟草的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)3种抗氧化酶活性及其相应酶基因转录水平都逐渐提高,其中SOD酶活性及其基因转录水平在100Gy辐照后达最大值,而SOD和CAT活性在300Gy辐照后达到最大值,三种酶的活性及其基因转录水平随后都随剂量的增加逐渐降低,但转基因烟草的3种抗氧化酶基因转录水平和酶活性都显著高于非转基因烟草。说明把pprI基因转化到烟草植株体内后,pprI基因能有效地提高烟草在60Coγ射线辐照下SOD、POD和CAT等抗氧化酶基因的转录水平及其活性水平,从而提高了转基因烟草对辐照的耐受能力。 展开更多
关键词 ppri烟草 60Co Γ射线辐照 抗氧化酶
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耐辐射球菌pprI基因转染对受照酵母菌抗氧化能力的影响 被引量:4
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作者 丛瑛 吴伟 +1 位作者 文玲 杨占山 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2013年第4期31-34,共4页
研究不同剂量60Coγ射线对转染了耐辐射球菌pprI基因的毕赤酵母菌过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响,探讨耐辐射球菌pprI基因在酵母菌中的表达对辐射细胞抗氧化能力的作用。Western blot检... 研究不同剂量60Coγ射线对转染了耐辐射球菌pprI基因的毕赤酵母菌过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响,探讨耐辐射球菌pprI基因在酵母菌中的表达对辐射细胞抗氧化能力的作用。Western blot检测酵母菌培养上清液中目的蛋白PprI的表达分泌。分别通过可见光法、单胺氧化法、分光光度比色法测定CAT、SOD和GSH-Px的活性。转染耐辐射球菌pprI基因的毕赤酵母菌中检测到PprI蛋白质的表达。当γ射线剂量为2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy时,不论是转基因毕赤酵母组还是对照组,CAT、SOD、GSH-Px活性均随着剂量的增加出现先升高后降低的趋势,并且受照后转基因毕赤酵母菌中3种酶的活性均显著高于对照组(p<0.01)。耐辐射球菌pprI基因在酵母菌中的表达能显著增强辐射细胞的抗氧化能力,这可能是原核pprI基因转染增强真核细胞抗辐射能力的机理之一。 展开更多
关键词 耐辐射球菌ppri 毕赤酵母 60Coγ射线 过氧化氢酶 超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化物酶
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镉胁迫对转PprⅠ基因油菜生理生化的影响 被引量:3
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作者 谢甜 冯刚 +3 位作者 闫庆龙 魏涛 王茂林 赵云 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期387-392,共6页
利用露天盆栽试验研究了不同浓度Cd胁迫下转PprⅠ基因油菜和野生型油菜对Cd的吸收特性以及生理响应.结果表明:随着Cd胁迫浓度的升高,转基因和野生型油菜对Cd的吸收均显著增加,且二者地下部分的吸收都大于地上部分;在0.5mg/kg Cd处理下,... 利用露天盆栽试验研究了不同浓度Cd胁迫下转PprⅠ基因油菜和野生型油菜对Cd的吸收特性以及生理响应.结果表明:随着Cd胁迫浓度的升高,转基因和野生型油菜对Cd的吸收均显著增加,且二者地下部分的吸收都大于地上部分;在0.5mg/kg Cd处理下,转基因和非转基因油菜对Cd的吸收差异不显著,但1和2mg/kg处理下转基因油菜对Cd的吸收显著低于非转基因油菜.两种油菜对Cd的富集系数和转运系数均随处理浓度的升高而降低;随着Cd浓度的增加,超氧化物歧化酶(SOD)活性呈现先上升后下降的趋势,且在相同处理浓度下,转基因油菜的SOD活性均高于非转基因油菜;丙二醛(MDA)含量呈上升趋势,且其在转基因油菜中的含量均低于非转基因油菜;叶绿素a和叶绿素b的含量随Cd浓度的升高而下降.因此PprⅠ基因的导入,显著降低了油菜对Cd的吸收,提高了其可食部分安全性. 展开更多
关键词 ppri基因 油莱 抗氧化酶 叶绿素 丙二醛
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