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瞬时表达比较马铃薯X病毒CP基因3种结构对RNA沉默的诱导效果 被引量：5
1
作者 竺晓平 刘金亮 +3 位作者 田延平 于晓庆 李向东 刘红梅 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-4,共4页
RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性(pathogen-derived resistance,PDR)被认为是通过RNA沉默起作用的.转化的核酸片段在基因组中的位置、长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率.用全长马铃薯X病毒(PVX)CP基因... RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性(pathogen-derived resistance,PDR)被认为是通过RNA沉默起作用的.转化的核酸片段在基因组中的位置、长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率.用全长马铃薯X病毒(PVX)CP基因构建非翻译的正义、反义和反向重复结构转基因的植物表达载体,通过农杆菌渗入法瞬时表达测试了这些转基因对RNA介导抗性的诱导效率和有效性.结果表明,反向重复的PVXCP是更为有效的RNA沉默诱导因子,同时也证明让目的基因在受试植物中瞬时表达,在转化植物之前能比较快速地检测转基因的表达情况以及表达产物的功能,从而节约时间和资源,并减少盲目性. 展开更多
关键词 RNA沉默 马铃薯x病毒(pvx) 外壳蛋白(CP)基因 农杆菌渗入 抗性
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应用RT-PCR法快速检测马铃薯X病毒 被引量：5
2
作者 高昌勇 尚宏芹 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2004年第10期69-71,共3页
根据马铃薯X病毒的外壳蛋白基因序列 ,设计合成了 1对寡核苷酸引物 ,从感染PVX的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA ,进行cDNA合成和PCR扩增 ,得到一条长度约为0 .72kb的特异性PCR扩增产物 ,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。在基因水... 根据马铃薯X病毒的外壳蛋白基因序列 ,设计合成了 1对寡核苷酸引物 ,从感染PVX的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA ,进行cDNA合成和PCR扩增 ,得到一条长度约为0 .72kb的特异性PCR扩增产物 ,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。在基因水平上为PVX的检测提供了一种快速、灵敏、简便的新方法 ,为PVX的防治提供了有效手段。 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 RT—PCR 病毒检测
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马铃薯X病毒荧光定量PCR检测体系的建立及应用 被引量：9
3
作者 尚晓楠 吴蓓蕾 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期165-169,共5页
马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)是危害茄科作物的一种重要病毒,为了建立特异性检测PVX的实时荧光定量PCR体系,本研究以PVX-1985分离物中外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列为模板,设计引物构建重组质粒并选择扩增效率高、特异性强的... 马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)是危害茄科作物的一种重要病毒,为了建立特异性检测PVX的实时荧光定量PCR体系,本研究以PVX-1985分离物中外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列为模板,设计引物构建重组质粒并选择扩增效率高、特异性强的引物成功构建出标准曲线。利用建立的体系,成功检测到以含pCaPVX440侵染性克隆载体的农杆菌C58C1接种后的本氏烟(Nicotiana benthamiana)中PVX病毒RNA的拷贝数。 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 荧光定量PCR 本氏烟
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大麦黄矮病毒运动蛋白核定位信号对PVX病毒运动的影响 被引量：3
4
作者 杨纪君 刘国富 +2 位作者 申永梅 霍晓辉 曹雪松 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期35-44,共10页
应用马铃薯X病毒(PVX)载体研究大麦黄矮病毒运动蛋白(BYDV-MP)核定位信号对PVX病毒运动的影响。我们将BYDV-MP克隆到PVX改造载体pGR107中,同时用GFP作为指示蛋白,研究BYDV-MP对异源病毒PVX系统运动的影响。侵染烟草发现BYDV-MP能够在PV... 应用马铃薯X病毒(PVX)载体研究大麦黄矮病毒运动蛋白(BYDV-MP)核定位信号对PVX病毒运动的影响。我们将BYDV-MP克隆到PVX改造载体pGR107中,同时用GFP作为指示蛋白,研究BYDV-MP对异源病毒PVX系统运动的影响。侵染烟草发现BYDV-MP能够在PVX载体中表达并能加强病毒的系统侵染;将PVX编码系统运动蛋白25kD基因进行缺失突变,重复上述试验发现BYDV-MP能够补偿PVX系统运动;将BYDV-MP的N端的第五、六位氨基酸和第七位氨基酸进行替换突变,侵染烟草发现BYDV-MP的N端的第五、六位氨基酸突变不能完全抑制PVX系统运动,但是可以延迟并减弱PVX系统运动;BYDV-MP的N端的第七位氨基酸突变能够完全抑制PVX系统运动。 展开更多
关键词 大麦黄矮病毒运动蛋白 系统侵染 马铃薯x病毒 绿色荧光蛋白(GFP) 基因瞬时表达
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PVX介导拟南芥Flowering locusT诱导烟草开花研究 被引量：2
5
作者 刘旭新 Stephen Jackson 李春阳 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期65-69,共5页
为研究拟南芥Flowering locus T(FT)基因在开花诱导过程中的重要生物功能,本研究用RT-PCR方法,从拟南芥野生型(WS)中得到全长FT序列,采用Potato Virus X(PVX)野生型病毒构建载体,将全长FT基因连接到PVX第5个阅读框架即Coat Protein(CP)... 为研究拟南芥Flowering locus T(FT)基因在开花诱导过程中的重要生物功能,本研究用RT-PCR方法,从拟南芥野生型(WS)中得到全长FT序列,采用Potato Virus X(PVX)野生型病毒构建载体,将全长FT基因连接到PVX第5个阅读框架即Coat Protein(CP)编码序列之前,经体外转录成PVX-FT病毒RNA,人工感染短日照烟草Maryland mommath,成功诱导短日照烟草在长日照条件下开花。 展开更多
关键词 拟南芥Flowering LOCUS T(FT) 马铃薯x病毒(pvx) RT-PCR 开花
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大麦黄矮病毒运动蛋白在烟草中的瞬时表达 被引量：2
6
作者 王媛媛 李芳芳 +1 位作者 刘国富 曹雪松 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第6期2824-2826,2830,共4页
[目的]快速鉴定运动蛋白基因在烟草中的瞬时表达,进一步研究该外源基因的功能。[方法]将大麦黄矮病毒的运动蛋白基因定向克隆到马铃薯X病毒载体上,得到重组的马铃薯X病毒,电击转化农杆菌后,利用农杆菌渗透注射技术注射到本生烟草的叶片... [目的]快速鉴定运动蛋白基因在烟草中的瞬时表达,进一步研究该外源基因的功能。[方法]将大麦黄矮病毒的运动蛋白基因定向克隆到马铃薯X病毒载体上,得到重组的马铃薯X病毒,电击转化农杆菌后,利用农杆菌渗透注射技术注射到本生烟草的叶片中,观察病毒对烟草的侵染状况。[结果]渗透注射后第7天观察,重组病毒载体侵染的烟草系统叶有病毒侵染症状,而对照组未有此现象。对2组试验进行逐日跟踪观察,重组病毒载体侵染的烟草有较严重的病毒侵染症状和叶片卷曲现象,后期引起注射叶及系统叶坏死。而空病毒载体侵染的烟草只有轻微的病毒侵染症状,并能够恢复健康。对侵染的烟草进行RT-PCR检测,结果表明外源基因BYDV-MP在烟草体内进行了正常的转录和表达。[结论]BYDV-MP蛋白促进了PVX的系统侵染速度,加重了系统侵染的病毒症状,是病毒病症的决定因子;利用PVX表达载体表达异源MP的方法是可行的。 展开更多
关键词 大麦黄矮病毒运动蛋白 马铃薯x病毒 烟草 侵染
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马铃薯X病毒外壳蛋白基因的克隆与系统进化分析 被引量：2
7
作者 黄永会 朱英 刘永翔 《安徽农业科学》 CAS 2014年第27期9283-9285,9420,共4页
从贵州威宁等地采集马铃薯病叶样本,采用试管捕捉反转录PCR(tube-capture-RT-PCR,TC-RT-PCR)的方法克隆出714 bp的PVX CP基因,编码237个氨基酸残基。系统进化分析表明,PVX CP基因可分为两大类群,推测分离物属于X3株系,并建议重型花叶也... 从贵州威宁等地采集马铃薯病叶样本,采用试管捕捉反转录PCR(tube-capture-RT-PCR,TC-RT-PCR)的方法克隆出714 bp的PVX CP基因,编码237个氨基酸残基。系统进化分析表明,PVX CP基因可分为两大类群,推测分离物属于X3株系,并建议重型花叶也可作为PVX病叶样本。 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 外壳蛋白 基因克隆 进化分析
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尘螨变应原Der f1植物表达载体的构建及表达 被引量：1
8
作者 彭江龙 崔玉宝 +3 位作者 王华民 周鹰 牛莉娜 吴洁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期250-253,共4页
目的:构建尘螨变应原Der f1植物表达载体并侵染烟草叶片表达。方法:从保存的含pET28a(+)-Der f1的甘油菌株中扩增Der f1基因,并克隆到质粒载体中,提取质粒,进行测序;以ClaⅠ、SalⅠ双酶切,将Der f1基因克隆到马铃薯X病毒(PVX)载体中,构... 目的:构建尘螨变应原Der f1植物表达载体并侵染烟草叶片表达。方法:从保存的含pET28a(+)-Der f1的甘油菌株中扩增Der f1基因,并克隆到质粒载体中,提取质粒,进行测序;以ClaⅠ、SalⅠ双酶切,将Der f1基因克隆到马铃薯X病毒(PVX)载体中,构建植物病毒表达载体;将PVX-Der f1转化脓杆菌,挑取Kan、Tet抗性阳性的菌株侵染烟草叶片进行蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定和分析。结果:经SDS-PAGE分析,有4株烟草叶片蛋白提取物在34Mr处有特异性蛋白条带;经Western blot进一步验证其变应原,结果显示,烟草叶片中获得的重组蛋白在34Mr处与阳性血清发生特异性结合,而与阴性血清并不发生结合。结论:成功构建了植物病毒表达载体PVX-Der f1并获得表达,为尘螨变应原Der f1的研究提供新思路。 展开更多
关键词 尘螨 Derf1 马铃薯x病毒(pvx) 植物表达
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马铃薯X病毒外壳蛋白基因片段的瞬时表达诱导对PVX的高抗性(英文) 被引量：1
9
作者 黄永会 陶刚 +4 位作者 朱英 Mariena Ketudat-Cairns 邱礽 刘永翔 刘作易 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第2期117-121,共5页
为获得抗马铃薯X病毒(PVX)的植株,从疑似感染马铃薯X病毒的马铃薯叶片中提取出PVXcp cDNA,将其保守片段插入到RNAi质粒pHellsgate12中以构建编码发夹结构RNA的载体,通过Agroinfiltration的方法在本氏烟植株中瞬时表达。结果表明:病毒侵... 为获得抗马铃薯X病毒(PVX)的植株,从疑似感染马铃薯X病毒的马铃薯叶片中提取出PVXcp cDNA,将其保守片段插入到RNAi质粒pHellsgate12中以构建编码发夹结构RNA的载体,通过Agroinfiltration的方法在本氏烟植株中瞬时表达。结果表明:病毒侵染10d后,15株引入该载体的本氏烟植株对PVX均具有抗性,此载体可用于产生对马铃薯X病毒具有高抗性的转基因植物。 展开更多
关键词 马铃薯x病毒 瞬时表达 发夹结构RNA 外壳蛋白
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利用原核表达的衣壳蛋白制备马铃薯X病毒的抗血清 被引量：1
10
作者 于晓庆 温亮 +2 位作者 袁丛阳 陈秀斋 李向东 《山东农业科学》 2010年第3期5-7,共3页
本研究构建了含马铃薯X病毒(PVX)衣壳蛋白(CP)基因的原核表达载体,利用在大肠杆菌内表达的马铃薯X病毒CP制备了效价为1∶1 600的抗血清。该血清可用于马铃薯、番茄、辣椒和烟草等作物携带PVX情况的检测。
关键词 马铃薯x病毒 衣壳蛋白 原核表达载体 抗血清
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