金龙胆草醇提取物对慢性牙周炎的体外抑菌抗炎作用研究 被引量：1

1

作者 陈海鹰 汪龙凤 +2 位作者 林清凡 王伟德 付东杰 《中医药导报》 2023年第2期28-34,共7页

目的:探讨金龙胆草醇提取物对慢性牙周炎常见致病菌牙龈卟啉单胞菌(Pg)、具核梭杆菌(Fn)的体外抑菌效果,观察金龙胆草醇提取物对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)诱导人牙龈成纤维细胞(HGF)炎症反应的影响。方法:以乙醇为提取剂,采用索式... 目的:探讨金龙胆草醇提取物对慢性牙周炎常见致病菌牙龈卟啉单胞菌(Pg)、具核梭杆菌(Fn)的体外抑菌效果,观察金龙胆草醇提取物对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)诱导人牙龈成纤维细胞(HGF)炎症反应的影响。方法:以乙醇为提取剂,采用索式提取法、热水浴浸提法和超声辅助提取法对金龙胆草进行提取,冷冻干燥后计算提取率;使用滤纸片扩散法观察提取物对Pg、Fn的抑菌效果;采用细胞计数试剂-8(CCK-8)检测金龙胆草醇提取物和Pg-LPS、HGF共同培养24 h、48 h对细胞增殖的影响;通过酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))分泌水平;应用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测HGF炎症模型中核因子-кB(NF-кB)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)蛋白表达水平,分析金龙胆草醇提取物对NF-кB信号通路的抑制情况。结果:3种提取方式的金龙胆草提取率比较,超声辅助提取法显著高于索式提取法和热水浴浸提法(P<0.05)。金龙胆草醇提取物对Pg、Fn的最小抑菌浓度分别为20 mg/mL和40 mg/mL,索式提取法的抑菌效果优于超声辅助提取法和热水浴浸提法。干预24、48 h后,10、20、50μg/mL药液组HGF活性与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);100、200、500、1000μg/mL药液组HGF活性显著低于对照组(P<0.05)。干预12、24 h后,Pg-LPS组HGF培养液上清液中TNF-α、IL-1β、PGE_(2)水平均高于对照组(P<0.05);干预12、24 h后,Pg-LPS+20μg/mL药液组、Pg-LPS+50μg/mL药液组TNF-α水平均低于Pg-LPS组(P<0.05);干预12 h后,Pg-LPS+10μg/mL药液组、Pg-LPS+20μg/mL药液组、Pg-LPS+50μg/mL药液组IL-1β水平均明显低于Pg-LPS组(P<0.05);干预12、24 h后,Pg-LPS+10μg/mL药液组、Pg-LPS+20μg/mL药液组、Pg-LPS+50μg/mL药液组PGE_(2)水平均低于Pg-LPS组(P<0.05)。干预12、24 h后,Pg-LPS组HGF中NF-κB、MMP-1蛋白相对表达量均高于对照组(P 展开更多

关键词 慢性牙周炎 金龙胆草 醇提取物 牙龈卟啉单胞菌 体外抑菌 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 牙龈成纤维细胞 炎症 NF-кB

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AMPK/NF-κB参与牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙周韧带细胞的炎症反应 被引量：2

2

作者 李归平 成益凡 +2 位作者 古丽其合热·阿布来提 秦旭 朱光勋 《临床口腔医学杂志》 2023年第1期7-11,共5页

目的:探索牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide, PgLPS)刺激对人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells, hPDLCs)引起炎症反应的机制的影响。方法:体外培养hPDLCs,以PgLPS梯度浓度进行干预,CCK-... 目的:探索牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide, PgLPS)刺激对人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells, hPDLCs)引起炎症反应的机制的影响。方法:体外培养hPDLCs,以PgLPS梯度浓度进行干预,CCK-8法检测细胞活性,qRT-PCR法检测细胞IL-6、IL-8、AMPK、NF-κB mRNA的表达水平,ELISA法检测上清IL-6、IL-8的浓度,Western Blot法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)、核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、核转录因子抑制蛋白α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)的蛋白活性。结果:与对照组相比,PgLPS刺激能提高细胞IL-6、IL-8分泌,降低细胞p-AMPK表达,增强p-IκBα、p-NF-κB表达,且均呈现浓度依赖性(P<0.05);AMPK、NF-κB、IL-6和IL-8的核酸表达水平(mRNA)与蛋白变化一致(P<0.05)。结论:在体外培养的hPDLCs中,AMPK/NF-κB信号通路可能参与了PgLPS诱导的炎症反应。 展开更多

关键词 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 腺苷酸活化蛋白激酶 炎症 人牙周韧带细胞

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灯盏花素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞损伤的影响

3

作者 晁晓芹 赵国廷 +2 位作者 董振耀 马民英 姚毅章 《医学分子生物学杂志》 CAS 2024年第1期63-68,共6页

目的探讨灯盏花素(breviscapine,BVP)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(porphyromonas gingivalis,Pg-LPS,简称LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)损伤的影响。方法体外培养HGFs细胞,分为对照组、LPS组、LPS+BVP低、... 目的探讨灯盏花素(breviscapine,BVP)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(porphyromonas gingivalis,Pg-LPS,简称LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)损伤的影响。方法体外培养HGFs细胞,分为对照组、LPS组、LPS+BVP低、中、高剂量组。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞上清液中IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、IL-6水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;蛋白质印迹法检测细胞中细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素B1(Cyclin B1)及凋亡相关B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL-2相关X蛋白(BCL-2-associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平;TBA比色法检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;二氢荧光素二乙酸酯(dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)法测定细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果与对照组比较,LPS组HGFs细胞存活率、细胞迁移率、Cyclin B1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平及SOD活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平及MDA、ROS水平显著升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+BVP低、中、高剂量组细胞存活率、细胞迁移率、Cyclin B1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平及SOD活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平及MDA、ROS水平显著降低(P<0.05)。结论BVP可通过抗炎、抗氧化作用减轻LPS诱导的HGFs细胞损伤。 展开更多

关键词 灯盏花素 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 人牙龈成纤维细胞 细胞损伤

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生长停滞特异性蛋白6在牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导内皮细胞黏附因子及趋化因子表达中的作用 被引量：5

4

作者 刘颖君 欧阳翔英 +2 位作者 王宇光 吕培军 安娜 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期20-25,共6页

目的:探讨维生素K依赖的生长停滞特异性蛋白6(growth-arrest-specific protein 6,Gas6,一种维生素K依赖性蛋白,参与细胞增殖、存活、黏附和迁移,也在炎症反应中起重要作用)在牙龈卟琳单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysac... 目的:探讨维生素K依赖的生长停滞特异性蛋白6(growth-arrest-specific protein 6,Gas6,一种维生素K依赖性蛋白,参与细胞增殖、存活、黏附和迁移,也在炎症反应中起重要作用)在牙龈卟琳单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)诱导血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)表达黏附因子和趋化因子过程中的作用。方法:在血管内皮细胞中过表达和敲低Gas6基因后,用1 mg/L P.g-LPS刺激血管内皮细胞3 h和24 h,利用实时定量荧光聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和E选择素(E-selectin),以及趋化因子白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)的表达。过表达或敲低Gas6基因后,细胞划痕实验检验内皮细胞迁移的生物学功能表型的变化。结果:P.g-LPS刺激3 h后,敲低Gas6组的黏附因子及趋化因子的表达情况与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),过表达Gas6组的黏附因子及趋化因子与对照组相比显著降低(E-selectin、ICAM-1、IL-8和MCP-1分别下降81%±0%、47%±3%、76%±3%和26%±6%,P<0.01);P.g-LPS刺激24 h后,敲低组的黏附因子及趋化因子表达情况与对照组相比显著升高(E-selectin、ICAM-1、IL-8和MCP-1上调的倍数分别是2.06±0.07、1.99±0.11、3.14±0.15和1.84±0.03),过表达组的黏附因子及趋化因子与对照组相比显著降低(E-selectin、ICAM-1、IL-8和MCP-1分别下降29%±1%、62%±3%、69%±1%和41%±2%),实验组与对照组黏附分子及趋化分子表达差异具有统计学意义(P<0.01)。细胞划痕实验结果显示,敲低Gas6组细胞迁移能力与对照组相比增强,过表达组细胞迁移能力较对照组弱,与realtime PCR检测结果趋势一致。结论:下调Gas6基因后,P.g-LPS促进ICAM-1、E-selectin、IL-8和MCP-1表达作用增强,上调Gas6基因后,P.g-LPS促进 展开更多

关键词 人脐静脉血管内皮细胞 生长停滞特异性蛋白6 牙龈卟琳单胞菌脂多糖 细胞因子

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牙龈卟啉单胞菌脂多糖对多形核白细胞凋亡的影响 被引量：4

5

作者 王惠宁 余杰 《口腔医学》 CAS 2011年第3期166-168,共3页

目的研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人的外周血中多形核白细胞的凋亡作用。方法通过流式细胞仪对10名健康人外周血中多形核白细胞培养组(对照组)与不同浓度的牙龈卟啉单胞菌脂多糖和多形核白细胞共同培养组(实验组)进行比较研究,观察多形... 目的研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人的外周血中多形核白细胞的凋亡作用。方法通过流式细胞仪对10名健康人外周血中多形核白细胞培养组(对照组)与不同浓度的牙龈卟啉单胞菌脂多糖和多形核白细胞共同培养组(实验组)进行比较研究,观察多形核白细胞的凋亡情况。结果实验组和对照组相比,多形核白细胞凋亡数明显减少(P<0.05)。结论牙龈卟啉单胞菌脂多糖以浓度依赖的形式延缓多形核白细胞的凋亡,细菌延缓细胞凋亡在牙周可疑致病菌的致病机制中可能具有重要的作用。 展开更多

关键词 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 多形核白细胞 牙周病

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硒代蛋氨酸通过NF-κB和MAPK通路抑制P.g-LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS和COX-2表达

6

作者 张福 周平 +2 位作者 向锋 汪春艳 李镭 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期236-241,共6页

目的:探讨硒代蛋氨酸(Selenomethionine,SeMet)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)诱导的RAW264.7细胞的作用和机制。方法:使用P.g-LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7体外构建炎症细胞模型,CCK-8... 目的:探讨硒代蛋氨酸(Selenomethionine,SeMet)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)诱导的RAW264.7细胞的作用和机制。方法:使用P.g-LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7体外构建炎症细胞模型,CCK-8法检测不同浓度SeMet对RAW264.7细胞活性的影响。以不同浓度的SeMet(10、25、50μmol/L)干预细胞1 h后,再使用P.g-LPS诱导细胞24 h。RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)相关基因表达,ELISA法检测iNOS和COX-2相关蛋白分泌情况。Western blot检测NF-κB和MAPK信号通路相关蛋白表达情况。结果:浓度低于50μmol/L的SeMet对RAW264.7细胞活性没有显著影响。对RAW264.7使用SeMet预处理后,SeMet明显抑制P.g-LPS诱导的iNOS和COX-2相关基因表达和蛋白分泌增加,其作用与SeMet浓度有关,浓度越高,抑制作用越明显。其作用机制是通过抑制NF-κB通路的p65向核内转移,以及抑制MAPK通路的p38、ERK和JNK磷酸化发挥作用,并且其抑制作用呈浓度依赖性。结论:SeMet抑制P.g-LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS和COX-2表达,其作用机制可能与SeMet抑制NF-κB p65核内转移和抑制MAPK通路p38、ERK和JNK的磷酸化有关。 展开更多

关键词 硒代蛋氨酸 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 巨噬细胞 NF-ΚB信号通路

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二极管激光对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激下人牙龈成纤维细胞增殖和炎症反应的影响

7

作者 杨文文 张献丽 +4 位作者 张欣然 王萌 薛栋 唐路 赵颖 《临床口腔医学杂志》 2023年第11期648-652,共5页

目的:探讨二极管激光对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast cells,HGFs)增殖和炎症反应的影响,初步揭示二极管激光对慢性牙周... 目的:探讨二极管激光对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast cells,HGFs)增殖和炎症反应的影响,初步揭示二极管激光对慢性牙周炎的作用机制。方法:原代培养HGFs;不同浓度的LPS和2μg/mL LPS+二极管激光作用于HGFs 24、48、72 h后,细胞增殖实验检测增殖能力变化;2μg/mL LPS,2μg/mL LPS+二极管激光作用于HGFs 24 h后,免疫荧光实验观察波形蛋白(Vimentin)的表达,实时定量PCR检测炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-8的表达。结果:运用组织块贴壁法培养出HGFs;与对照组相比,LPS抑制HGFs的增殖,但二极管激光改善LPS对HGFs增殖影响,促进HGFs的增殖;LPS能够提高HGFs中IL-6和IL-8的表达,抑制Vimentin的表达,二极管激光可显著逆转LPS刺激下HGFs中IL-6、IL-8和Vimentin的表达水平。结论:二极管激光可逆转P.gingivalis LPS对HGFs的增殖作用及其对炎症反应影响,二极管激光能够抑制LPS在慢性牙周炎过程中的作用。 展开更多

关键词 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 人牙龈成纤维细胞 增殖 炎症

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牙髓干细胞外泌体来源的miR-150对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导内皮细胞损伤的影响 被引量：2

8

作者 南飞 王睿迪 《解剖学研究》 CAS 2022年第4期325-331,共7页

目的 探讨牙髓干细胞(DPSC)外泌体来源的miR-150对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)诱导的内皮细胞损伤的影响。方法 培养DPSC,转染miR-150模拟物后分离并鉴定外泌体。培养内皮细胞HUVEC,分为Blank组、Pg-LPS组、NC exosome组、miR-NC exos... 目的 探讨牙髓干细胞(DPSC)外泌体来源的miR-150对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)诱导的内皮细胞损伤的影响。方法 培养DPSC,转染miR-150模拟物后分离并鉴定外泌体。培养内皮细胞HUVEC,分为Blank组、Pg-LPS组、NC exosome组、miR-NC exosome组和miR-150 exosome组。qRT-PCR检测外泌体和各组HUVEC细胞中miR-150表达水平;ELISA检测各组HUVEC细胞中炎症因子IL-6和IL-8水平;CCK-8和流式细胞术检测各组HUVEC细胞增殖、凋亡;划痕愈合实验和Transwell实验检测各组HUVEC细胞迁移、侵袭。结果 成功从DPSC细胞中分离出外泌体,并诱导miR-150表达上调(P<0.05);Pg-LPS诱导后,HUVEC细胞中miR-150水平降低,IL-6和IL-8水平增高,细胞活力降低,凋亡率增高,划痕愈合率和侵袭细胞数量降低(P<0.05);添加DPSC外泌体和外泌体来源的miR-150可在一定程度上减少Pg-LPS对HUVEC细胞的影响,且后者的效果要优于前者(P<0.05)。结论 DPSC外泌体来源的miR-150可削弱Pg-LPS诱导的内皮细胞损伤。 展开更多

关键词 牙髓干细胞 外泌体 miR-150 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 内皮细胞损伤

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脂联素对P.g LPS刺激下人牙龈成纤维细胞分泌TNF-α、IL-6、PGE2及MMP-1的影响 被引量：3

9

作者 王丽美 肖俐 +3 位作者 支敏 吕沛颖 高鹏飞 王永兰 《现代口腔医学杂志》 CAS 2019年第6期340-344,共5页

目的通过对健康人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)的原代及传代培养,观察脂联素(adiponectin,APN)对牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激HGFs分泌肿瘤坏死因子-α(tumor ... 目的通过对健康人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)的原代及传代培养,观察脂联素(adiponectin,APN)对牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激HGFs分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、前列腺素E2(prostaglandin-E2,PGE2)、基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)的影响,初步揭示APN对牙周微生物致病作用的影响,为进一步揭示肥胖相关疾病与牙周炎相关性的内在机制提供依据。方法运用组织块培养法体外培养HGFs,取5代HGFs随机分为3组,分别用2μg/ml P.g LPS+10%FBS培养基,2μg/ml P.g LPS+1μg/ml APN+10%FBS培养基,空白对照(10%FBS培养基)刺激,持续24h,运用实时定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,real-time PCR)法检测不同时间点(6、8、24h)HGFs中TNF-α、,IL-6、PGE2、MMP-1 mRNA表达水平。结果运用组织块贴壁法成功培养出HGFs并传代,免疫组化结果显示细胞为中胚层来源的HGFs。相较于空白对照组,P.g LPS明显促进HGFs分泌PGE2、IL-6、MMP-1及TNF-α(P<0.05),在P.g LPS各炎性介质最佳刺激时间点,APN可显著抑制P.g LPS刺激HGFs分泌IL-6及MMP-1(P<0.05),APN可促进P.g LPS刺激HGFs分泌PGE2和TNF-α,但与P.g LPS组相比无统计学意义(P>0.05)。结论APN可抑制P.g LPS刺激HGFs分泌IL-6及MMP-1,抑制病原微生物在牙周炎致病过程中所起的作用,产生抗炎、抗骨吸收和基质降解等作用。 展开更多

关键词 牙周炎 脂联素 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 肥胖 炎症

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茶多酚对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞中MCP-1、IL-6表达水平的影响 被引量：2

10

作者 高丽 许伟 +2 位作者 李萍 杨琨 宋琦 《遵义医科大学学报》 2020年第3期333-337,共5页

目的探讨茶多酚(Tea polyphenol,TP)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、白细胞... 目的探讨茶多酚(Tea polyphenol,TP)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)表达水平的影响。方法分别选取一定浓度的TP和一定浓度的牙龈卟啉单胞菌LPS作用于人脐静脉内皮细胞,用ELISA法及Western blot法检测HUVEC中MCP-1、IL-6的表达水平。结果IL-6、MCP-1表达水平在阳性对照组(LPS)HUVEC中明显升高(P<0.05),其在TP预处理组HUVEC中的表达水平则明显降低(P<0.05);此外,IL-6、MCP-1蛋白表达水平也较LPS组显著下降(P<0.05)。结论TP可抑制牙龈卟啉单胞菌LPS诱导的HUVEC中MCP-1、IL-6表达水平上调,具有保护内皮细胞的作用。 展开更多

关键词 人脐静脉内皮细胞 茶多酚 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 单核细胞趋化蛋白-1 白细胞介素-6

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细菌脂多糖对牙周膜干细胞的矿化分化作用的影响 被引量：2

11

作者 郭婷 曹罡 +5 位作者 李芷 陈伟 冷旭 刘秉尧 徐金科 毛钊 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2018年第6期573-577,共5页

目的牙周组织工程技术可引导牙周组织再生,对于治疗牙周病有良好的应用前景,但临床应用并不理想。文中通过体外模拟牙周炎症环境,观测牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、分化及矿化活性的变化,探寻目前牙周组织工程技术临床疗效不佳的原因。方... 目的牙周组织工程技术可引导牙周组织再生,对于治疗牙周病有良好的应用前景,但临床应用并不理想。文中通过体外模拟牙周炎症环境,观测牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、分化及矿化活性的变化,探寻目前牙周组织工程技术临床疗效不佳的原因。方法取正畸拔除的年轻恒牙牙周组织,原代培养并分离筛选出牙周膜干细胞。取生长状态良好的第3代PDLSCs,分别接种于氟磷灰石(FA)-聚己内酯(PCL)纳米纤维三维支架(FA-PCL)和聚己内酯(PCL)纳米纤维三维支架。再将细胞随机分为A^F组。A组:加入终浓度为10 ng/m L的牙龈卟啉单胞菌脂多糖(PG-LPS)+FA-PCL组;B组:加入终浓度为10 ng/m L的PG-LPS+PCL组;C组:加入终浓度10μg/m L的PG-LPS+FA-PCL组;D组:加入终浓度10μg/m L的PG-LPS+PCL组;E组:纯FA-PCL组;F组:纯PCL组。观察细胞增殖、分化、矿化活性的变化。结果细胞接种于支架后黏附生长良好。接种后7 d,A、B组较E、F组细胞增殖显著增高;而C、D组较E组和F组细胞增殖显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。在E组表面生长的PDLSCs已大量表达碱性磷酸酶和矿化相关基因runx2和spp1,显著高于其他各组,差异均有统计学意义(P<0.05);且A、C组明显高于B、D组,A组明显高于C组。接种后28 d时,茜素红及Von Kossa染色提示E组表达量远高于其他各组,而A、C组染色重于B、D组,A组重于C组。结论炎性环境不仅影响PDLSCs的增殖,而且会抑制PDLSCs分化和矿化。改性的FA-PCL支架可减轻PG-LPS产生的细胞毒性作用。 展开更多

关键词 牙周组织再生 细菌脂多糖 牙周膜干细胞 矿化 分化

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牙龈卟啉单胞菌脂多糖对大鼠骨髓间充质干细胞生物学行为影响的研究 被引量：1

12

作者 罗彬艳 陈畅行 闫福华 《中国实用口腔科杂志》 CAS 2021年第2期177-182,共6页

目的研究不同浓度牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g LPS)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)增殖、炎症因子分泌能力和成骨分化的影响。方法使用不同质量浓度P.g... 目的研究不同浓度牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g LPS)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)增殖、炎症因子分泌能力和成骨分化的影响。方法使用不同质量浓度P.g LPS(1.0、2.5、5.0、10.0μg/mL)刺激大鼠BMMSCs,记为P.g LPS组;同时设立对照组,即不使用P.g LPS培养的大鼠BMMSCs。利用CCK-8法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测细胞内和上清液中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)的表达;qRT-PCR和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色分别检测成骨诱导早期的成骨分化情况。结果P.g LPS刺激1、3、5 d后,各组细胞增殖活性差异不明显(均P>0.05);P.g LPS刺激3 d后,各质量浓度P.g LPS组相较于对照组中TNF-α及IL-10的mRNA表达水平均升高;成骨诱导4、7 d后,各质量浓度P.g LPS组相较于对照组中成骨分化相关因子ALP、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx 2)和Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,COL-Ⅰ)的表达水平均受到抑制(均P<0.05);成骨诱导7 d后,5.0、10.0μg/mL P.g LPS组ALP活性明显低于对照组,1.0、2.5μg/mL P.g LPS组ALP活性相比于对照组差异不明显。结论P.g LPS对BMMSCs的增殖无明显影响,但可增加BMMSCs中炎症因子的表达水平,并影响其成骨分化。 展开更多

关键词 大鼠骨髓间充质干细胞 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 成骨分化

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脂联素受体在人牙龈成纤维细胞中的表达研究 被引量：1

13

作者 王丽美 支敏 +4 位作者 吕沛颖 高鹏飞 蔺晨 杨艳艳 王永兰 《口腔医学》 CAS 2020年第3期204-208,共5页

目的研究健康人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)中脂联素受体信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivali... 目的研究健康人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)中脂联素受体信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、脂联素(Adiponectin,APN)对HGFs中脂联素受体1(adiponectin receptor 1,AdipoR1)、脂联素受体2(adiponectin receptor 2,AdipoR2)mRNA表达的影响,探讨牙周炎相关因素与HGFs脂联素受体表达的相关性。方法运用组织块贴壁法体外培养健康HGFs,逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测其脂联素受体的表达,将细胞随机分为4组,分别用TNF-α50 ng/mL,P.g LPS 0.1μg/mL,APN 1μg/mL,空白对照(10%FBS培养基)刺激,持续24 h,然后运用实时定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测不同时间点(0、0.5 h、12 h、24 h)HGFs中AdipoR1、AdipoR2 mRNA表达水平。结果RT-PCR显示HGFs均表达AdipoR1和AdipoR2,其中AdipoR2条带较AdipoR1更亮,与空白对照组相比,TNF-α下调了HGFs的AdipoR2 mRNA表达(P<0.05),P.g LPS与APN明显上调了HGFs的AdipoR1/R2 mRNA的表达(P<0.05)。结论脂联素受体(AdipoR1、AdipoR2)在人牙龈成纤维细胞中均有表达,且主要以AdipoR2为主,并且在炎症状态下,脂联素受体表达下降。 展开更多

关键词 牙周炎 脂联素受体 脂联素 肿瘤坏死因子-Α 牙龈卟啉单胞菌脂多糖

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Pg-lps对大鼠血管平滑肌细胞增殖和ALP活性的影响

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作者 刘桂荣 邓婧 +4 位作者 王明臻 娄秀秀 张鹏梅 隋爱华 潘克清 《临床口腔医学杂志》 2014年第7期395-398,共4页

目的：观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg－lps）对体外培养大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：采用组织块贴壁法培养大鼠VSMCs，传代培养并鉴定。Pg－lps （1～10000 ng... 目的：观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg－lps）对体外培养大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：采用组织块贴壁法培养大鼠VSMCs，传代培养并鉴定。Pg－lps （1～10000 ng／mL）干预VSMCs 0．5～4 d，采用CCK－8法和碱性磷酸酶试剂盒测定其增殖和ALP活性。结果：1 d后（1－10000 ng／mL）Pg－lps均显著促进VSMCs增殖，并随时间的延长，促进作用越明显；而（1 ng／mL、1μg／mL）Pg－lps在0．5～4 d均显著促进VSMCs的ALP活性，随着时间的延长促进作用更明显，且4 d时1μg／mL较1 ng／mL对ALP活性促进作用更明显。结论：Pg－lps能促进VSMCs的异常增殖；还可能通过促进VSMCs的ALP活性而影响其钙化过程，进而提示Pg－lps对心血管疾病的发生发展可能有重要作用。 展开更多

关键词 血管平滑肌细胞 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 细胞增殖 ALP活性

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比较牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导THP-1和HL-60细胞分泌IL-1β能力及相关信号通路受体的差异 被引量：2

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作者 李盛来 张迪亚 +1 位作者 严杰 陈莉丽 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期176-179,共4页

目的探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis,Pg-LPS)诱导人单核巨噬细胞株THP-1和人粒细胞白血病细胞株HL-60分泌白介素-1β(interleukin,IL-1β)能力差异,并了解其相关Toll样受体。方法采用酚水法提取牙龈卟啉单胞菌ATCC3... 目的探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis,Pg-LPS)诱导人单核巨噬细胞株THP-1和人粒细胞白血病细胞株HL-60分泌白介素-1β(interleukin,IL-1β)能力差异,并了解其相关Toll样受体。方法采用酚水法提取牙龈卟啉单胞菌ATCC33277株脂多糖(Pg-LPS)。采用ELISA试剂盒定量检测Pg-LPS作用的THP-1和HL-60细胞分泌IL-1β水平。采用TLR2或TLR4抗体阻断试验联合ELISA检测,了解Pg-LPS结合不同靶细胞上Toll样受体的类型。实验中采用大肠杆菌脂多糖(E-LPS)作为Pg-LPS对照。结果1μg/mlPg-LPS作用6h或1μg/mlE-LPS作用24h,THP-1细胞分泌的IL-1β水平明显升高(P<0.01),但Pg-LPS和E-LPS诱生的细胞因子最高浓度相近(P>0.05)。而1μg/mlPg-LPS作用24h或1μg/mlE-LPS分别作用48h,HL-60细胞分泌的IL-1β水平明显升高(P<0.01),且Pg-LPS诱生的最高浓度明显高于E-LPS(P<0.05),但HL-60细胞分泌的上述胞因子最高浓度均明显低于THP-1细胞(P<0.01);TLR2和TLR4抗体均可有效阻断Pg-LPS诱导THP-1细胞分泌IL-1β的活性(P<0.05),但仅发现TLR2抗体可阻断Pg-LPS诱导HL-60细胞分泌IL-1β的活性(P<0.05)。E-LPS诱导THP-1细胞或HL-60细胞分泌IL-1β的活性仅可被TLR4抗体所阻断(P<0.05)。结论Pg-LPS诱导THP-1和HL-60细胞分泌IL-1β高于E-LPS。TLR2和/或TLR4作为Pg-LPS受体取决于细胞种类。 展开更多

关键词 牙龈卟啉单胞菌 脂多糖 细胞 IL-1Β Toll样受体

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牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人脐静脉内皮细胞超微结构及细胞间黏附分子1表达的影响 被引量：6

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作者 吴贇 叶春玲 +2 位作者 林李嵩 陈凌 林志坚 《中华高血压杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期420-425,共6页

目的通过观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖(PgLPS)对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的影响,探讨PgLPS在动脉粥样硬化(AS)的发生发展过程中可能发挥的作用。方法本文以EA.hy926细胞为研究对象,随机提取2~4代增殖旺盛的细胞进行实验(n=5),用不同浓度... 目的通过观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖(PgLPS)对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的影响,探讨PgLPS在动脉粥样硬化(AS)的发生发展过程中可能发挥的作用。方法本文以EA.hy926细胞为研究对象,随机提取2~4代增殖旺盛的细胞进行实验(n=5),用不同浓度(0.01、0.1、1、10 mg/L)PgLPS刺激EA.hy926细胞,用细胞增殖检测试剂盒(CCK8)检测PgLPS对其细胞增殖影响,用透射电镜观察PgLPS对其细胞结构变化的影响,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清可溶型细胞间黏附分子1(sICAM-1),以及用Western-blot法检测细胞膜结合型细胞间黏附分子1(mICAM-1)的表达。结果当PgLPS浓度达到1 mg/L时,作用时间为24 h以上即可抑制EA.hy926细胞增殖(P<0.05);PgLPS浓度达到0.1 mg时透射电子显微镜可观察出现符合内皮细胞焦亡的改变;低浓度和高浓度PgLPS均能促进内皮细胞sICAM-1的表达增加(P<0.01),其中0.1 mg/L组sICAM-1表达水平最高,且上清液中的sICAM-1浓度随着PgLPS作用时间的延长而递增;Western-blot法检测结果显示PgLPS浓度达到1、10 mg/L时内皮细胞mICAM-1的相对表达量明显下降;在PgLPS浓度为10 mg/L时,不同的刺激时间作用下,各组mICAM-1的表达差异无统计学意义。结论PgLPS可以抑制人脐静脉内皮细胞增殖,使其发生焦亡的形态学改变,促进其sICAM-1的表达。 展开更多

关键词 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 细胞间黏附分子-1 细胞焦亡

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环孢素A联合脂多糖对牙周膜成纤维细胞增殖的影响 被引量：6

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作者 黄美香 闫福华 +4 位作者 姚丽艳 李大兰 郑瑜谦 李艳芬 林敏魁 《中华口腔医学研究杂志（电子版）》 CAS 2011年第5期11-15,共5页

目的探讨环孢素A(CsA)联合牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)增殖的影响。方法改良组织块法培养hPDLFs,分别用CsA(10、100、200、400ng/ml),Pg-LPS(10、100、1000ng/ml),CsA(100ng/ml)加Pg-LPS(100ng/ml),CsA(1... 目的探讨环孢素A(CsA)联合牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)增殖的影响。方法改良组织块法培养hPDLFs,分别用CsA(10、100、200、400ng/ml),Pg-LPS(10、100、1000ng/ml),CsA(100ng/ml)加Pg-LPS(100ng/ml),CsA(100ng/ml)加Pg-LPS(1000ng/ml)作用于生长良好的第3～5代细胞,MTT法测其药物作用用下的增殖情况。结果细胞经上述浓度CsA或Pg-LPS作用后形态无明显变化,CsA在100ng/ml浓度情况下,促细胞增殖作用最明显;高浓度Pg-LPS(1000ng/ml)显著抑制细胞增殖,100ng/mlCsA能够显著降低Pg-LPS(1000ng/ml)对细胞增殖的抑制效应;CsA(100ng/ml)与Pg-LPS(100ng/ml)联合作用于细胞时,对细胞的增殖无明显影响。结论在一定的浓度下,CsA促PDLF增殖作用明显;CsA能对抗脂多糖(LPS)抑制细胞增殖的效应。 展开更多

关键词 环孢素A 脂多糖 牙周膜成纤维细胞

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牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人主动脉内皮细胞表达ICAM-1影响的研究 被引量：4

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作者 刘斌 程岚 +4 位作者 刘大力 汪嘉 张秀丽 束蓉 梁景平 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期568-572,共5页

目的:分别观察牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)和大肠杆菌(E.coli)LPS对人主动脉内皮细胞(HAECs)在转录和翻译水平表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:在体外分别以P.gingivalisLPS和E.coliLPS刺激HAECs,实时荧光定量PC... 目的:分别观察牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)和大肠杆菌(E.coli)LPS对人主动脉内皮细胞(HAECs)在转录和翻译水平表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:在体外分别以P.gingivalisLPS和E.coliLPS刺激HAECs,实时荧光定量PCR技术检测ICAM-1基因表达,蛋白质印迹技术检测ICAM-1膜蛋白表达。采用SPSS18.0软件包中ANOVA对数据进行分析。结果:P.gingivalisLPS作用6 h后开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14 h达到高峰,22 h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而E.coliLPS作用2 h后即开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14 h达到高峰,22 h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。两种LPS均能在蛋白水平上调ICAM-1的表达,这种上调作用呈浓度和时间依赖,且P.gingivalisLPS的作用较之E.coliLPS要缓和。结论:P.gingivalisLPS能够在转录和翻译水平上调HAECs表达ICAM-1,提示P.gingivalisLPS在动脉粥样硬化(AS)的发生发展过程中可能发挥了重要作用。E.coliLPS可能与急性炎症性疾病有关而与AS无关。 展开更多

关键词 牙龈卟啉单胞菌 脂多糖 人主动脉内皮细胞 细胞间粘附分子-1

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牙龈卟啉单胞菌脂多糖对泡沫细胞中NF-κB信号通路的影响

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作者 李厚轩 雷浪 闫福华 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期725-730,共6页

目的:研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.gingivalisLPS)在氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)刺激巨噬细胞形成泡沫细胞过程中和形成泡沫细胞后对NF-κB信号通路的影响... 目的:研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.gingivalisLPS)在氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)刺激巨噬细胞形成泡沫细胞过程中和形成泡沫细胞后对NF-κB信号通路的影响。方法:用oxLDL诱导THP-1人单核细胞源性巨噬细胞形成泡沫细胞,在巨噬细胞和泡沫细胞中加入P.gingivalisLPS和oxLDL,利用免疫细胞化学技术检测NF-κB p65亚单位核转位情况,Western blot检测细胞质内IκB-α变化。结果:P.gingivalisLPS能促进巨噬细胞和泡沫细胞中p65亚单位核转位,在2h时达到最高水平;也能降低细胞质内IκB-α水平,在2h时达到最低水平;在2h时,10μg/ml比10、100ng/ml、1μg/mlP.gingivalisLPS更能提高p65核转位率。结论:P.gingivalisLPS可以促进泡沫细胞形成过程中和形成后NF-κB信号通路的激活,促进动脉粥样硬化进展。 展开更多

关键词 牙龈卟啉单胞菌 脂多糖 核因子 泡沫细胞

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N-乙酰半胱氨酸影响脂多糖调节骨唾液酸蛋白基因转录

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作者 李新月 小方赖昌 《天津医药》 CAS 北大核心 2009年第8期649-651,共3页

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)调节成骨细胞(ROS17/2.8)骨唾液酸蛋白(BSP)基因表达和转录的影响。方法:将ROS17/2.8细胞随机分为4组:空白对照组、LPS(0.01mg/LP.g.LPS)组、NAC(20mmol/L)组、NAC+LPS组(NAC提... 目的:研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)调节成骨细胞(ROS17/2.8)骨唾液酸蛋白(BSP)基因表达和转录的影响。方法:将ROS17/2.8细胞随机分为4组:空白对照组、LPS(0.01mg/LP.g.LPS)组、NAC(20mmol/L)组、NAC+LPS组(NAC提前30min预刺激后,NAC与P.g.LPS共同作用),持续作用细胞12h后,用实时荧光定量PCR检测BSPmRNA的表达,用瞬时转染法分析BSP启动子的转录活性。结果:各组细胞BSPmRNA表达量均与空白对照组的表达量取比值,0.01mg/LP.g.LPS使比值升高(F=9.998,P<0.05),NAC使其降低(F=6.821,P<0.05),NAC使LPS对比值的升高变化降低(F=6.744,P<0.05);各组细胞BSP基因启动子(pLUC3)转录活性值与空白载体(pLUCB)活性值取比值,0.01mg/LP.g.LPS使比值升高(F=5.546,P<0.05),NAC使其降低(F=11.544,P<0.01),NAC使LPS对比值的升高变化降低(F=5.624,P<0.05)。结论:NAC抑制0.01mg/LP.g.LPS对ROS17/2.8细胞BSP基因表达和转录的增强调节。 展开更多

关键词 乙酰半胱氨酸 紫单胞菌 龈 脂多糖类唾液糖蛋白类 成骨细胞

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