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广西仔猪腹泻病毒病原流行病学调查 被引量：31
1
作者 郭旋 陈静 +7 位作者 刘欢 侯韶毅 龙凤 李莹莹 曾娟 兰家暖 刘芳 黄伟坚 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期155-160,共6页
【目的】了解引起广西仔猪腹泻的主要病毒病原及其分子流行病学特点，为其防控提供理论依据。【方法】采用RT-PCR对2011年至2012年7月从广西11个城市的养猪场采集的232份病料进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）... 【目的】了解引起广西仔猪腹泻的主要病毒病原及其分子流行病学特点，为其防控提供理论依据。【方法】采用RT-PCR对2011年至2012年7月从广西11个城市的养猪场采集的232份病料进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（PoRV）检测和流行病学调查；对部分PEDV阳性病料的M基因进行克隆，并与国内部分省（市）及国外的一些M基因序列进行比对和遗传进化分析。【结果】广西11个城市采集的232份病料中PEDV、PoRV的阳性率分别为37.50%和0.03%，而TGEV均为阴性。对部分PEDV阳性病料进行M基因扩增，获得14条M基因，其核苷酸同源性及推导氨基酸序列同源性分别为97.4%~100.0%和96.0%~100.0%。将扩增获得的14条PEDV M基因与GenBank上发表的40条国内外PEDV M基因进行比对分析，发现有13条同位于一大支上（G1），其中9条与我国2011年分离获得的广东、四川、江苏参考株及泰国2008年分离获得的5条参考株、韩国2007年分离获得的两条参考株同位于G1-1上，4条与我国2011年分离获得的江西、江苏、广东、福建毒株及江苏2004年分离株JS-2004-2 同位于G1-2上。另外一条PEDV M基因（NNA-11）却与其余13条相距较远，位于G2上。【结论】从2011年至今致使广西仔猪腹泻的病毒主要是PEDV，各市均有不同程度感染，且感染全年存在；大部分广西流行毒株与2011年以来我国广东、福建、江苏、江西四省流行毒株的亲缘性较高，与2007年以来泰国、韩国的流行毒株亲缘关系也非常密切，但与我国2006年前分离获得的北方毒株、经典疫苗株、韩国疫苗株相距较远。 展开更多
关键词 仔猪腹泻病 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 流行病学 M基因 广西
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PEDV、TGEV、PoRV 3种猪病毒性腹泻病毒的流行现状及控制策略 被引量：26
2
作者 王艳丰 张丁华 +2 位作者 李爱心 程征 刘守铉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期518-527,共10页
引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征... 引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征,哺乳仔猪发病率和病死率较高,后备猪、母猪或育肥猪呈一过性腹泻,发病率较低。特别是自2010年以来,PEDV变异毒株的流行已对全球的生猪产业造成严重影响,而已有的防控措施已经不能应对新的流行态势。近年来,针对PEDV、TGEV、PoRV的毒株流行变化及防控措施研究的较多,许多新技术、新方法已应用于3种病原的控制。作者基于当前3种病毒的遗传变异分析和流行现状,从饲养管理、免疫预防、中药疗法、干扰疗法、特异疗法及返饲疗法等方面对防控措施进行综述,以期为猪病毒性腹泻的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪轮状病毒(PoRV) 流行现状 防控措施
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应用多重RT-PCR方法检测158例猪粪样中的两种冠状病毒 被引量：24
3
作者 杨群 何孔旺 陆承平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期431-435,共5页
根据GenBank上发表的猪流行性腹泻(PEDV)和猪传染性胃肠炎(TGEV)基因序列,针对其PEDVM(膜蛋白)基因保守区及TGEV的S基因(纤突蛋白基因)5′端保守区,各设计一对引物,可特异扩增出目的条带大小分别为467bp和1062bp。用上述两对引物对同一... 根据GenBank上发表的猪流行性腹泻(PEDV)和猪传染性胃肠炎(TGEV)基因序列,针对其PEDVM(膜蛋白)基因保守区及TGEV的S基因(纤突蛋白基因)5′端保守区,各设计一对引物,可特异扩增出目的条带大小分别为467bp和1062bp。用上述两对引物对同一样品中的PEDV和TGEV可进行鉴别检测,对猪的其它病毒和细菌的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明:该双重PCR方法能检出PEDV1pg、TGEV0.1pg的模板。同时采用建立的多重RT-PCR及韩国引进的PEDV和TGEV病毒抗原快速诊断试剂盒检测结果显示:此多重RT-PCR方法特异性强,且较快速试剂盒更加敏感。应用多重RT-PCR对158份临床猪粪样的检测结果表明:我国很多猪场普遍存在TGEV和PEDV,尤其以PEDV污染更为严重,感染率达53.2%,但双重感染率较低,仅为4.4%。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪呼吸道冠状病毒 双重RT-PCR
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猪流行性腹泻病毒(PEDV)与抗病毒天然免疫 被引量：25
4
作者 张百灵 陈建飞 +2 位作者 邢雅玲 冯力 陈忠斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期516-523,共8页
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪流行性腹泻病等肠道疾病的一种动物冠状病毒.PEDV与宿主系统相互作用,特别是其对宿主抗病毒天然免疫调节作用和机制是目前动物冠状病毒研究的基础科学问题之一.基于作... 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪流行性腹泻病等肠道疾病的一种动物冠状病毒.PEDV与宿主系统相互作用,特别是其对宿主抗病毒天然免疫调节作用和机制是目前动物冠状病毒研究的基础科学问题之一.基于作者近几年来对人类重要冠状病毒对宿主抗病毒天然免疫系统调节作用的研究,本文对PEDV基因组与编码蛋白主要功能以及PEDV调节宿主抗病毒天然免疫反应及其可能机制的进展和现状进行了分析.与人类冠状病毒相似,PEDV编码的木瓜样蛋白酶(papain-like protease,PLP)是一个多功能蛋白酶,除了蛋白酶活性外,还具有去泛素化酶(DUB)活性和宿主干扰素拮抗活性,是PEDV编码的一种新型病毒来源DUB和宿主干扰素拮抗蛋白.这些研究为阐明PEDV对宿主抗病毒天然免疫反应调节作用和其致病机制提供了重要的理论依据,为研制新型PEDV免疫防治措施提供了重要理论基础. 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 木瓜样蛋白酶 去泛素化酶 抗病毒天然免疫反应 干扰素
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TaqMan荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立与初步应用 被引量：22
5
作者 刘邓 袁秀芳 +4 位作者 冉多良 徐丽华 牛登元 王朝文 王一成 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第1期28-34,共7页
根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒Ⅳ基因序列，设计了一对特异性引物和探针，扩增长度为186bp的片段。以克隆Ⅳ基因的质粒作为阳性标准品，建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法在10^9-10^1copies... 根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒Ⅳ基因序列，设计了一对特异性引物和探针，扩增长度为186bp的片段。以克隆Ⅳ基因的质粒作为阳性标准品，建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法在10^9-10^1copies／μL范围内具有良好的线性关系，可检测到初始模板中10copies／μL的质粒DNA，以猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为模板时，均检测不到荧光信号，而重复性实验中其变异系数均小于2％，表明此方法具有很好的特异性和重复性。应用此方法对采集的60份，陆床样品进行检测，其阳性检出率为92％，而用常规RT-PCR方法进行检测，阳性检出率仅为80％。表明荧光定量RT-PCR方法的敏感性明显高于常规PcR检测方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针
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2011年-2014年广西猪流行性腹泻病毒检测及其M基因的序列分析 被引量：21
6
作者 卢冰霞 秦毅斌 +12 位作者 何颖 李莹莹 梁家幸 黎珂钰 李斌 苏乾莲 周英宁 蒋冬福 卢敬专 闭炳芬 梁保忠 段群棚 赵武 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期549-557,共9页
本试验应用RT-PCR方法对2011年1月—2014年4月采自广西南宁、玉林等14个地区的331份仔猪腹泻粪便样品进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测。结果显示331份样品中有210份为PEDV阳性,阳性率为63.44%。对其中25份阳性样品的PEDV M基因进行克... 本试验应用RT-PCR方法对2011年1月—2014年4月采自广西南宁、玉林等14个地区的331份仔猪腹泻粪便样品进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测。结果显示331份样品中有210份为PEDV阳性,阳性率为63.44%。对其中25份阳性样品的PEDV M基因进行克隆和测序,将测序结果与GenBank中PEDV参考毒株的M基因序列进行同源性比对分析并构建系统进化树。25个PEDV M基因序列与51个参考毒株M基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.9%、94.3%~99.6%。PEDV M基因遗传变异分析结果表明,广西2013年—2014年的PEDV流行毒株与北京、安徽、武汉、河北、广东等地2010年—2013年的流行毒株亲缘关系较近,而与中国早期分离株CH/S（GenBank登录号：JN547228）、疫苗株CV777（GenBank登录号：AF353511）和Attenuated DR13（GenBank登录号：JQ023162）的遗传距离较远。提示广西现流行的PEDV与早期毒株相比已发生较为明显的变异。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) M基因 遗传变异
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猪β-干扰素的原核表达及其对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研究 被引量：16
7
作者 曹瑞兵 包晶晶 +3 位作者 周海霞 郑其升 周斌 陈溥言 《中国病毒学》 CSCD 2004年第4期364-368,共5页
本研究通过PCR技术克隆了猪β干扰素全基因,设计引物亚克隆猪β干扰素成熟蛋白编码基因并对,5’端1个稀有密码子进行了大肠杆菌偏嗜性改造。构建了猪IFN-β原核单纯表达载体pRLC-poIFNβ,实现了poIFN-β在大肠杆菌中的表达,表达产物约... 本研究通过PCR技术克隆了猪β干扰素全基因,设计引物亚克隆猪β干扰素成熟蛋白编码基因并对,5’端1个稀有密码子进行了大肠杆菌偏嗜性改造。构建了猪IFN-β原核单纯表达载体pRLC-poIFNβ,实现了poIFN-β在大肠杆菌中的表达,表达产物约占菌体总蛋白的17.3%。表达产物以包涵体形式存在,用含6mol/L盐酸胍的变性液溶解及含GSH-GSSG复性液复性处理,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后,MDBK细胞-VSV病变抑制法测定结果表明,重组猪β干扰素具有良好的抗病毒活性,约为5.6x105U/mg。用重组猪β干扰素处理猪肾传代细胞PK-15后,细胞病变抑制法(CPE50)测定结果表明:重组猪β干扰素可显著抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染。 展开更多
关键词 干扰素 猪β-干扰素 原核表达 猪流行性腹泻病毒 克隆
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猪流行性腹泻病毒的分离培养与鉴定 被引量：19
8
作者 钱永清 闻人楚 +1 位作者 唐永兰 孙智锋 《上海农业学报》 CSCD 1999年第2期41-44,共4页
上海市农业科学院畜牧兽医研究所在上海郊区分离到一株猪流行性腹泻病毒（PEDV）。以人工攻毒发病猪的小肠粘膜无菌处理后接种已长成单层的VERO（非洲绿猴肾）传代细胞，并在维持液中加入胰酶50μg／mL和2％的小牛血清。盲传第4代时，... 上海市农业科学院畜牧兽医研究所在上海郊区分离到一株猪流行性腹泻病毒（PEDV）。以人工攻毒发病猪的小肠粘膜无菌处理后接种已长成单层的VERO（非洲绿猴肾）传代细胞，并在维持液中加入胰酶50μg／mL和2％的小牛血清。盲传第4代时，于接种后的第3天出现致细胞病变作用（CPE）。自第8代开始，CPE于接种后16h开始出现，以后就一直有规律地稳定出现。CPE的主要表现为细胞的折光度降低、细胞圆缩、颗粒变性、细胞融合而形成多核巨细胞。至40～48h，CPE明显，细胞部分脱落，收获。同时，将人工攻毒发病猪的小肠粘膜无菌处理后的病毒与经胰酶消化分散的VERO一起培养。并在生长液中加入胰酶50μg／mL，3～4d长成单层。如此经盲传若干代，可用荧光抗体检测到在细胞浆内有特异性的荧光颗粒出现。目前，该带毒的VERO细胞已传至102代。 展开更多
关键词 猪 流行性腹泻病毒 分离培养 鉴定 病毒
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新发猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒SYBR GreenⅠ双重荧光RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：20
9
作者 张利卫 曹贝贝 +4 位作者 李炳晓 张云飞 韦学雷 韩丽 胡慧 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期618-624,共7页
猪Delta冠状病毒（porcine delta coronavirus，PDCoV）是一种新发现的仔猪腹泻类冠状病毒，感染仔猪主要表现出水样腹泻、呕吐和脱水等临床症状，和猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）临床症状极其类似，且I临床上混合感... 猪Delta冠状病毒（porcine delta coronavirus，PDCoV）是一种新发现的仔猪腹泻类冠状病毒，感染仔猪主要表现出水样腹泻、呕吐和脱水等临床症状，和猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）临床症状极其类似，且I临床上混合感染病例较多，单靠临床症状和剖检变化很难辨别这2种疾病，因此建立同时检测且能区分PDCoV和PEDV的检测方法具有重要意义。参照GenBank登录的PDCoVM基因和PEDVORF3基因特异性序列设计引物，扩增相应的基因片段，克隆构建重组质粒pMD-18T—PDCovM与pMD-18T—PEDVORF8，测序验证后，分别以此重组质粒为标准品，建立了能同时检测PDCoV和PEDV的SYBRGreenI双重荧光RTPCR方法，并对其扩增体系和扩增条件等进行了优化，同时对所建立的双重荧光RT—PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行了检测。结果显示，该试验成功建立了能同时检测PDCov和PEDv的SYBRGreenI双重荧光RTPCR方法，最低能检测到PDCoV和PEDV分别是28．6拷贝/μL和99．6拷贝/μL的质粒浓度，显示出较好的敏感性；在同样扩增条件下该方法具有较好的重复性；特异性试验表明，该方法仅能检测出PEDV和PDCoV，而对猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪伪狂犬病毒（PRV）等均不产生特异性扩增曲线。将所建立的双重荧光RTPCR方法以及单重荧光定量RT—PCR方法分别对198份临床收集的仔猪腹泻样品进行PEDV和PD—CoV检测，结果显示，PDCoV阳性样品41份，阳性率为20．7％；PEDV阳性样品59份，阳性率为29．8％；同时感染这2种病毒的样品17份，阳性率为8．6％。与单重荧光定量RT—PCR方法对PEDV和PDCoV的检出率一样，符合率100．0％。本研究成功建立了PDCoV和PEDV的双重荧光RT—PCR方法，能同时准确地检测PDCoV和PEDV，这为PDCoV和PEDV的临床鉴别诊断和流行病学� 展开更多
关键词 猪Delta冠状病毒(PDCoV) 猪流行性腹泻病毒(pedv) 双重荧光RT—PCR SYBR Green I
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PEDV S蛋白B细胞抗原表位的筛选和鉴定 被引量：15
10
作者 孙东波 朗洪武 +5 位作者 时洪艳 陈建飞 崔晓辰 王承宝 佟有恩 冯力 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第9期971-977,共7页
以猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的免疫优势区S1(1～2367bp)为靶基因,利用基于gⅢ表达外源多肽的fd丝状噬菌体展示系统,构建S1基因噬菌体展示肽库,以纯化病毒制备的兔抗PEDV多克隆血清为靶蛋白,对S1基... 以猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的免疫优势区S1(1～2367bp)为靶基因,利用基于gⅢ表达外源多肽的fd丝状噬菌体展示系统,构建S1基因噬菌体展示肽库,以纯化病毒制备的兔抗PEDV多克隆血清为靶蛋白,对S1基因噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选,结果获得3个高亲和力的序列,分别命名为S1P1(248～280位氨基酸)、S1P2(442～499位氨基酸)和S1P3(697～742位氨基酸).ELISA和蛋白质印迹结果显示,S1P1、S1P2和S1P3短肽都能被兔抗PEDV多克隆血清识别,其中S1P3反应性最强.为了进一步揭示S1P1、S1P2和S1P3短肽的抗原性,制备了3个短肽GST融合蛋白和它们串连后GST融合蛋白的单因子血清,间接免疫荧光试验(IFA)结果证实,抗S1P2-GST、S1P3-GST和S1P123-GST融合蛋白的单因子血清能够识别Vero细胞培养物中天然的PEDV. 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S蛋白 抗原表位 噬菌体展示
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猪流行性腹泻病毒SD201604株的分离鉴定及致病性研究 被引量：17
11
作者 吴白 苏玮玮 +3 位作者 鞠德财 夏铭崎 张树成 王炜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期3229-3236,共8页
本研究旨在获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离株,并对其致病性进行研究。应用Vero细胞从山东某猪场腹泻病料中进行病毒分离,通过细胞病变、免疫荧光试验、电镜观察和RT-RCR进行鉴定,并对分离株的S基因序列进行分析;应用10^(3.5) TCID_(50)... 本研究旨在获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离株,并对其致病性进行研究。应用Vero细胞从山东某猪场腹泻病料中进行病毒分离,通过细胞病变、免疫荧光试验、电镜观察和RT-RCR进行鉴定,并对分离株的S基因序列进行分析;应用10^(3.5) TCID_(50)/mL分离株口服接种3日龄仔猪并观察临床症状和病理变化;用不同滴度的分离株分别口服接种3日龄仔猪(3mL/只),统计各组仔猪的死亡率,确定最小致死量。结果显示,成功分离到1株PEDV,命名为PEDV SD201604株。该分离毒株能在Vero细胞上增殖,产生细胞病变,传代至F6代时病毒滴度可达10^(3.5) TCID_(50)/mL,免疫荧光试验和RT-RCR检测均为PEDV阳性。电镜观察可见直径大小约为100nm的病毒粒子,有明显的囊膜和纤突,具有PEDV病毒粒子典型的形态特征,确定分离株为PEDV。S基因序列分析显示,分离株为国内流行的PEDV变异株。动物回归试验结果显示,口服感染该分离株的5头3日龄仔猪全部出现典型的PED临床症状和病理变化,其中3头死亡。最小致死量试验结果表明,口服感染3 mL病毒含量为10^(4.5) TCID_(50)/mL的分离株可使仔猪全部死亡。本试验结果可为PEDV的分离鉴定及生物学研究提供参考与借鉴。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) 分离 鉴定 致病性
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猪流行性腹泻病毒环介导等温扩增检测方法的建立及应用 被引量：17
12
作者 罗亚坤 梁琳 +5 位作者 王静 刘存 刘琪 刘畅 蔺文成 崔尚金 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期344-349,共6页
试验旨在建立一种快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的环介导等温扩增方法(LAMP),为诊断PEDV提供简便、敏感、准确可靠的工具。参考GenBank中PEDV基因序列(登录号:KT799997),针对PEDV N基因设计了6条引物,对所建立的LAMP反应体系、反应温... 试验旨在建立一种快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的环介导等温扩增方法(LAMP),为诊断PEDV提供简便、敏感、准确可靠的工具。参考GenBank中PEDV基因序列(登录号:KT799997),针对PEDV N基因设计了6条引物,对所建立的LAMP反应体系、反应温度进行优化,建立可特异性扩增PEDV的LAMP方法。结果显示,本试验成功建立了PEDV LAMP检测方法,在60℃恒温下反应60min,能特异性地检测PEDV,检测限量为91拷贝/μL,比常规PCR方法的敏感性高100倍。对比75份临床样本的LAMP和常规RT-PCR法检测结果,显示两种方法符合率为97.3%。综上所述,本试验建立的LAMP方法具有特异性强、敏感性高,操作简单,设备要求低的特点,适用于PEDV临床样本的快速检测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 环介导等温扩增技术 检测
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猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法建立及初步应用研究 被引量：17
13
作者 吴学敏 陈如敬 +5 位作者 王隆柏 车勇良 刘玉涛 庄向生 严山 周伦江 《中国农学通报》 CSCD 2012年第26期59-62,共4页
为建立一种特异、敏感的PEDV的检测方法。根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒CV777株的M基因序列,设计了一对特异性引物,扩增长度为680bp的片段。将PCR产物进行测序,与CV777株、SH5株M基因的同源性分别为99.2%和97.6%。试验表明:该方... 为建立一种特异、敏感的PEDV的检测方法。根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒CV777株的M基因序列,设计了一对特异性引物,扩增长度为680bp的片段。将PCR产物进行测序,与CV777株、SH5株M基因的同源性分别为99.2%和97.6%。试验表明:该方法具有较好的特异性和敏感性,并能检测到PEDV的RNA浓度下限为100pg/μL。从福建省的3个地区共采集58份哺乳仔猪腹泻样品,并应用此方法进行检测,其阳性检出率为87.9%。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 RT-PCR M基因
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抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的制备及应用 被引量：15
14
作者 李冰 张显浩 +2 位作者 裴仉福 陈瑞爱 贺东生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期68-72,共5页
本试验利用猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)SC株免疫产蛋鸡,收集高免卵黄,采用水稀释法和水稀释-盐析法获得鸡源抗PEDV卵黄抗体,采用已建立的ELISA方法对卵黄抗体效价进行测定。以3日龄无母源抗体的易感仔猪为... 本试验利用猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)SC株免疫产蛋鸡,收集高免卵黄,采用水稀释法和水稀释-盐析法获得鸡源抗PEDV卵黄抗体,采用已建立的ELISA方法对卵黄抗体效价进行测定。以3日龄无母源抗体的易感仔猪为试验动物,对抗PEDV卵黄抗体的治疗效果及安全性进行测定,并进一步利用自然发病猪场的治疗效果进行验证。结果表明,经PEDV SC株细胞毒免疫的鸡可在2次加强免疫后15d产生高水平的特异性抗体。在实验室治疗试验中,攻毒治疗组仔猪的存活率达60%,攻毒对照组存活率为20%;用于自然发病猪场时,饲喂抗PEDV卵黄抗体饲料的仔猪存活率亦为60%,而自然发病对照组的存活率为10%。以上结果表明抗PEDV卵黄抗体对感染PEDV的仔猪有一定治疗作用。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 产蛋鸡 卵黄抗体
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华南地区猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其S基因抗原表位片段的遗传变异分析 被引量：14
15
作者 田野 苏丹萍 +4 位作者 蒋伟 钟望 张显浩 陈瑞爱 贺东生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第5期3-5,8,共4页
应用RT-PCR方法对华南地区某大型猪场疑似猪流行性腹泻病料检测,选取阳性病料接种到Vero细胞,命名为CH/GDGZ/2012(简称GD-12)株。用病毒RNA抽提物为模板,对GD-12的S基因抗原区片段的扩增、克隆后进行核苷酸测序。序列分析表明,CH/GDGZ/2... 应用RT-PCR方法对华南地区某大型猪场疑似猪流行性腹泻病料检测,选取阳性病料接种到Vero细胞,命名为CH/GDGZ/2012(简称GD-12)株。用病毒RNA抽提物为模板,对GD-12的S基因抗原区片段的扩增、克隆后进行核苷酸测序。序列分析表明,CH/GDGZ/2012与CV777、Chinju99、Br1/87、DR13和SM98的核苷酸序列同源性分别为96.9%、93.0%、95.7%、96.7%和96.0%,氨基酸序列的同源性分别为97.7%、91.5%、95.4%、98.0%和94.8%。进化树分析结果显示,华南地区CH/GD-01/2011、CH/GDGZ/2012、GDHSY/2011、CH/GXQZ/2011毒株与经典毒株的遗传距离较大,处于不同的亚群。研究表明,PEDV GD-12株已发生遗传变异、关键抗原表位发生较大变化,该研究可为诊断和防控该病提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 S基因 变异
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猪Delta冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒多重PCR检测方法的建立和应用 被引量：11
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作者 李莎莎 纪立凯 +2 位作者 王中华 陈冈 严亚贤 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第9期74-79,共6页
旨在建立快速准确检测与猪腹泻相关的猪Delta冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRoV)多重PCR检测方法。针对PDCoV、PEDV、TGEV、PRoV的基因组序列设计了4对特异性引物,分别扩增PDCoV N基... 旨在建立快速准确检测与猪腹泻相关的猪Delta冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRoV)多重PCR检测方法。针对PDCoV、PEDV、TGEV、PRoV的基因组序列设计了4对特异性引物,分别扩增PDCoV N基因(447 bp)、PEDV M基因(204 bp)、TGEV M基因(612 bp)、PRoV VP6基因(329 bp),经过对反应条件的优化,成功建立了能同时特异性检测PDCoV、PEDV、TGEV、PRoV的多重RT-PCR,且特异性好。应用该检测方法对上海及周边地区养殖场临床猪腹泻病料进行检测,结果检出PEDV阳性样品16份,其中PEDV和TGEV混合感染1份,PDCoV和PRoV均未检出,与单一RT-PCR检测结果完全吻合。该快速检测方法的成功建立,将有助于提高对PDCoV、PEDV、TGEV、PRoV的病原学调查和疾病监测,为生态养殖提供技术储备。 展开更多
关键词 猪Delta冠状病毒(PDCoV) 猪流行性腹泻病毒(pedv) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪轮状病毒(PRoV) 多重PCR
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猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步临床应用 被引量：12
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作者 丁庆文 闫晓光 +6 位作者 张红垒 李倩倩 张云飞 舒祥力 单法 李林姣 胡慧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期615-620,632,共7页
猪δ冠状病毒(PDCoV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)可引起新生仔猪腹泻、呕吐,猪萨佩罗病毒(PSV)可引起猪脑脊髓灰质炎、腹泻等多系统综合征,临床上这3种病毒混合感染很普遍,疾病症状相似,依靠临床症状和剖检变化很难对这3种病毒做鉴别检测... 猪δ冠状病毒(PDCoV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)可引起新生仔猪腹泻、呕吐,猪萨佩罗病毒(PSV)可引起猪脑脊髓灰质炎、腹泻等多系统综合征,临床上这3种病毒混合感染很普遍,疾病症状相似,依靠临床症状和剖检变化很难对这3种病毒做鉴别检测,需借助实验室诊断方法。为了建立快速鉴别检测这种病毒的方法,本研究参照GenBank中登录的PEDV M基因、PDCoV N基因和PSV 2C基因的保守序列,利用Prime6.0软件设计3对引物,经各反应条件的优化建立了能同时检测PDCoV、PEDV和PSV的多重RT-PCR方法,并进行特异性、敏感度和重复性试验。结果显示,该方法除了对PDCoV、PEDV和PSV有特异性扩增外,对猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪博卡病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等猪常见病毒的扩增结果均为阴性,特异性较强;建立的多重RT-PCR方法对3种重组质粒标准品的最低检测限分别为1.40×10^(2)拷贝/μL(PDCoV)、1.53×10^(2)拷贝/μL(PEDV)、1.57×10^(3)拷贝/μL(PSV);而以3种质粒标准品为模板的各单一PCR对PDCoV、PEDV和PSV的检测限分别为1.40×10^(2)拷贝/μL、1.53×10^(2)拷贝/μL、1.57×10^(2)拷贝/μL,该方法虽然对PSV质粒标准品检测的敏感性较低,但总体而言敏感性较高。以PDCoV、PSV病毒核酸及PEDV阳性病料的cDNA为模板,不同时间重复检测3次,检测结果均一致,表明该方法重复性较好。利用该方法和各单一PCR分别对河南部分地市的92份临床腹泻猪的粪便样品和肠道样品进行检测。多重RT-PCR的检测结果显示,PDCoV、PEDV和PSV阳性检出率分别为39.13%(36/92)、57.61%(53/92)和22.83%(21/92);PDCoV、PEDV和PSV 3种病毒混合感染样品3份,阳性检出率为3.26%;与单一RT-PCR方法的检测结果均一致,且两种方法的符合率均为100%。本研究建立的多重RT-PCR检测方法为PDCoV、PEDV和PSV的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪δ冠状病毒 猪流行性腹泻病毒 猪萨佩罗病毒 多重RT-PCR
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槲皮素对PEDV感染幼龄仔猪肠道形态、抗氧化功能及空肠脂质代谢基因表达的影响 被引量：11
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作者 王帅杰 谭子涵 +5 位作者 李晗博 孙香雪 艾思含 王蕾 赵迪 侯永清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期3391-3399,共9页
【目的】通过研究槲皮素对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染仔猪肠道形态、肠道抗氧化功能及空肠脂质代谢相关基因相对表达量的影响,旨在探讨槲皮素对PEDV感染仔猪肠道的保护作用。【方法】选取18头健康的7日龄断奶仔猪,随机分为3组:对照组、... 【目的】通过研究槲皮素对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染仔猪肠道形态、肠道抗氧化功能及空肠脂质代谢相关基因相对表达量的影响,旨在探讨槲皮素对PEDV感染仔猪肠道的保护作用。【方法】选取18头健康的7日龄断奶仔猪,随机分为3组:对照组、PEDV组和槲皮素+PEDV组,每组6个重复,每个重复1头猪。试验期8 d,于试验第0~7天,对槲皮素+PEDV组仔猪每天口腔灌服10 mg/kg BW的槲皮素,其余组灌服等体积的人工奶。于试验第5天晚上给PEDV组和槲皮素+PEDV组仔猪口腔灌服10TCID的PEDV,对照组仔猪灌服相同体积的PBS溶液。于试验第8天早上屠宰,取仔猪十二指肠、空肠、回肠及结肠组织样品进行检测。【结果】与对照组相比,PEDV组仔猪空肠和回肠的绒毛高度以及绒毛高度与隐窝深度比值极显著降低(P<0.01),空肠、回肠和结肠中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)的活力显著降低(P<0.05),十二指肠、空肠、回肠和结肠中过氧化氢酶(CAT)的活力显著降低(P<0.05),回肠和结肠中丙二醛(MDA)的含量显著升高(P<0.05),空肠中载脂蛋白A1(APOA1)、载脂蛋白B(APOB)、载脂蛋白C2(APOC2)、脂肪酸结合蛋白2(FABP2)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员3(ACSL-3)和脂肪酸合酶(FASN)基因的相对表达量极显著下调(P<0.01)。与PEDV组相比,槲皮素+PEDV组仔猪空肠和回肠的绒毛高度以及绒毛高度与隐窝深度比值极显著提高(P<0.01),空肠、回肠和结肠中GSH-Px和T-SOD的活力显著提高(P<0.05),十二指肠、空肠和结肠中CAT的活力显著提高(P<0.05),回肠和结肠中MDA的含量显著降低(P<0.05),空肠中APOB、FABP2和FASN基因的相对表达量极显著上调(P<0.01)。【结论】添加槲皮素可有效缓解PEDV感染导致的仔猪肠道损伤,提高仔猪肠道抗氧化能力以及空肠脂质代谢的能力。 展开更多
关键词 槲皮素 仔猪 猪流行性腹泻病毒(pedv) 肠道形态 抗氧化功能 脂质代谢
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2018-2020年中国部分省市猪流行性腹泻病毒S1基因的监测及遗传变异分析 被引量：11
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作者 颜忠 杨汉春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期424-434,共11页
【目的】调查中国规模化猪场猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行情况。【方法】利用RT-PCR检测方法对2018-2020年采集于全国11个省市318个规模化猪场的2391份样品进行PEDV核酸检测,对30份阳性样品进行S1全... 【目的】调查中国规模化猪场猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行情况。【方法】利用RT-PCR检测方法对2018-2020年采集于全国11个省市318个规模化猪场的2391份样品进行PEDV核酸检测,对30份阳性样品进行S1全基因扩增与测序,并利用MegAlign、Mega 7.0等软件进行分析。【结果】2018-2020年,猪场PEDV核酸阳性率分别为48.57%、10.96%和4.72%,样品PEDV核酸阳性率分别为28.97%、8.27%和7.50%,猪场和样品PEDV核酸阳性率呈现逐年下降的趋势。S1基因相似性分析显示,获得的30株毒株全部为GⅡ基因型,其中17株毒株为GⅡa基因亚型、5株毒株为GⅡb亚型、8株毒株为GⅡc亚型,GⅡa基因亚型毒株为2018-2020年流行的主要毒株类型;30株毒株S1基因序列之间核苷酸相似性为93.0%~99.5%,氨基酸相似性为91.7%~100%,其中22株毒株与2017-2018年流行的GⅡ基因型毒株相比S1氨基酸序列表现出特征性插入和缺失。【结论】本研究结果为监测和分析中国PEDV的变异和演化提供了临床数据,为猪流行性腹泻防控和疫苗研制提供了参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) S1基因 遗传变异分析
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PEDV双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：12
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作者 马宇聪 刘增素 +8 位作者 王书博 周晗 姜艳萍 崔文 王丽 乔薪瑗 唐丽杰 徐义刚 李一经 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1152-1159,共8页
为了快速检测猪流行性腹泻病毒,本研究以纯化的家兔抗猪流行性腹泻病毒多隆抗体为捕获抗体,以小鼠抗猪流行性腹泻单克隆抗体为检测抗体,并对单克隆抗体进行HRP标记,由此建立了双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测法,检测抗体的最佳工作浓度... 为了快速检测猪流行性腹泻病毒,本研究以纯化的家兔抗猪流行性腹泻病毒多隆抗体为捕获抗体,以小鼠抗猪流行性腹泻单克隆抗体为检测抗体,并对单克隆抗体进行HRP标记,由此建立了双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测法,检测抗体的最佳工作浓度为浓度为0.75ug/m L。当D450≥0.233且P/N≥2时判定为阳性。该方法特异性强,与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒均无交叉反应,最低检测量为3.125×103TCID50/m L。该方法重复性较好:批间和批内重复率均小于10%,临床样品检测结果与RT-PCR方法比较,符合率为90.5%。上述结果表明,本研究建立的检测猪流行性腹泻病毒的双抗体夹心ELISA特异性强、灵敏度高,可用于对猪粪样中PEDV的检测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
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