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基于连续流动注射安培法定量检测多糖蛋白结合疫苗中氰化物的残留量
1
作者 张姮婕 唐瑶 +4 位作者 蒋佳兴 马晶 李炎 王叔桥 杨蕾 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期352-356,362,共6页
目的 建立基于连续流动注射安培法的多糖蛋白结合疫苗中氰化物残留量的检测方法,并进行验证。方法 超滤法去除样品中的大分子物质后,采用3700全自动化学分析仪检测氰化物残留量,进样时间为:35 s;进样体积为:200μL;泵速为:40%;样品周期... 目的 建立基于连续流动注射安培法的多糖蛋白结合疫苗中氰化物残留量的检测方法,并进行验证。方法 超滤法去除样品中的大分子物质后,采用3700全自动化学分析仪检测氰化物残留量,进样时间为:35 s;进样体积为:200μL;泵速为:40%;样品周期时间为:140 s;紫外波长为:312 nm;安培检测器。验证方法的专属性、基质效应、线性范围、检出限、定量限、准确性、精密性及稳定性。采用建立的方法检测5个厂家生产的b型流感嗜血杆菌结合疫苗及A群C群脑膜炎球菌结合疫苗多糖衍生物原液(13批)、结合物原液(21批)中氰化物残留量。结果 空白样品对检测无干扰;b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖衍生物和结合物原液、A群C群脑膜炎球菌结合疫苗多糖衍生物和结合物原液基质效应溶液的回收率分别为97.4%、102.4%、96.8%、99.8%,CV均<15%;氰基浓度在0.312 5~80 ng/mL范围内,与峰高呈良好的线性关系,回归方程为:y=133.13 x+57.556,R^(2)=0.999 1;检出限为0.2 ng/mL,定量限为0.6 ng/mL;加入氰基浓度为5、10、20 ng/mL对照溶液样品的回收率均值分别为108.9%、106.5%、103.5%,RSD为6.4%;精密性验证的CV均<15%;氰基浓度为80、40、20、5 ng/mL的对照溶液连续进样20针的平均浓度分别为76、38、18、5 ng/mL,CV均<15%。13批多糖衍生物原液样品均有检出氰化物残留,21批结合物原液样品中2批未检出,其他均有检出。结论 本研究建立的方法具有良好的准确性、精密性及稳定性,可应用于多糖蛋白结合疫苗中氰化物残留量的定量检测。 展开更多
关键词 连续流动注射安培法 多糖蛋白结合疫苗 氰化物 A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗 B型流感嗜血杆菌结合疫苗
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用大肠杆菌制备O157多糖-菌毛蛋白结合物的研究 被引量：2
2
作者 徐敏锐 孙鹏 +2 位作者 张部昌 刘波 吴军 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期598-603,共6页
目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌... 目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌株。在该菌株中共表达脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白基因pilE、寡糖转移酶基因pglL,构建O-糖基化修饰系统。分别转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL与大肠杆菌O157型多糖表达载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,再利用Western印迹检测菌毛蛋白PilE的修饰情况。结果利用抗His-tag单抗进行Western印迹检测,16℃IPTG诱导条件下,转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-wbbL-pglL与其他对照菌相比,不仅在相对分子质量为19×103处有特异性条带,而且在相对分子质量(40～60)×103处也出现了特异的梯状条带;转化大肠杆菌O157的O多糖基因簇克隆载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EHpilE-his/pETtac28-pglL/pACYC184-O157用抗O157多抗和抗His-tag单抗进行Western印迹检测,在相对分子质量(40～60)×103处均产生特异的梯状条带。结论在大肠杆菌中重建的O-糖基化修饰系统可以利用自身的O16型O多糖或异源的O157型O多糖修饰菌毛蛋白PilE,获得多糖-蛋白结合物。本研究为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗提供了技术基础。 展开更多
关键词 奈瑟球菌 脑膜炎 O-糖基化修饰系统 PILE PglL 大肠杆菌 O157型多糖基因簇 多糖-蛋白结合疫苗
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