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实时荧光PCR熔解曲线法在β-地中海贫血基因诊断和产前诊断中的临床应用评价 被引量：17
1
作者 严提珍 罗世强 +5 位作者 唐宁 钟青燕 聂昌君 李伍高 王秋华 蔡稔 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期407-412,共6页
目的对荧光PCR熔解曲线法用于β-地中海贫血（β-地贫）基因诊断和产前诊断进行临床评价。方法收集2011年1至8月柳州市妇幼保健院外周血标本451份，其中经血液学表型分析为β-地贫阳性表型标本372份，β-地贫阴性表型标本79份。同时收集... 目的对荧光PCR熔解曲线法用于β-地中海贫血（β-地贫）基因诊断和产前诊断进行临床评价。方法收集2011年1至8月柳州市妇幼保健院外周血标本451份，其中经血液学表型分析为β-地贫阳性表型标本372份，β-地贫阴性表型标本79份。同时收集2011年6至9月夫妇双方经PCR-RDB探针法确诊为B一地贫基因携带者，在我院行β-地贫产前诊断的胎儿绒毛、羊水及脐带血标本共84份，其中孕10～13周胎儿绒毛标本16份、孕16～24周羊水标本64份、孕17周以上胎儿脐血标本4份。按双盲对照试验，分别采用荧光PCR熔解曲线法（可检测24种13珠蛋白基因突变）、PCR-反向点杂交（RDB）探针法（可检测17种13珠蛋白基因突变）和DNA测序法同时对451份外周血标本和84份胎儿绒毛、羊水、脐带血产前诊断标本进行检测。计算荧光PCR熔解曲线法和PCR—RDB探针法、DNA基因测序法检测结果的野生型符合率、突变型符合率和总符合率。结果利用荧光熔解曲线法在451份外周血标本中共检出13种突变类型、19种基因型，其中有447份标本与PCR．RDB探针法的基因型检测结果相符，符合率为99．1％（447／451），902个等位基因位点检出符合率为99．6％（898／902），有4份标本与PCR—RDB探针法的基因型检测结果不相符，经DNA测序法验证，有3份标本与荧光熔解曲线法的检测结果完全一致，1份标本的13珠蛋白基因突变不在荧光熔解曲线法检测范围而未被检出。450份外周血标本的荧光熔解曲线法检测结果与DNA测序法相符，符合率为99．8％（450／451）。利用荧光熔解曲线法在84份产前诊断胎儿标本中共检出8种突变类型、18种基因型，168个等位基因位点的检测结果与PCR—RDB探针法和DNA基因测序法检测结果符合率为100％。结论荧光PCR熔解曲线法可同时检测多份待测标本，并可准确检出多种基因突变类型，可用� 展开更多
关键词 Β地中海贫血 聚合酶链反应 熔解曲线分析 基因诊断 产前诊断
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基于实时荧光PCR的探针熔解曲线分析技术和反向点杂交技术应用于β-地中海贫血基因诊断与产前诊断的对比研究 被引量：12
2
作者 肖奇志 周玉球 +1 位作者 谢建红 张永良 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期413-417,共5页
目的评价基于实时荧光PCR的探针熔解曲线分析（PMCA）技术作为β-地中海贫血（β-地贫）基因诊断和产前诊断方法的可行性。方法收集2008至2010年在珠海市妇幼保健院经过血液学表型筛查初步诊断为轻型β-地贫的血标本119份、重型β-地贫... 目的评价基于实时荧光PCR的探针熔解曲线分析（PMCA）技术作为β-地中海贫血（β-地贫）基因诊断和产前诊断方法的可行性。方法收集2008至2010年在珠海市妇幼保健院经过血液学表型筛查初步诊断为轻型β-地贫的血标本119份、重型β-地贫血标本4份和正常血标本12份。此外，收集严重类型β-地贫高风险孕妇的羊水标本44份和脐带血标本8份。采用双盲法，采用PMCA技术和反向点杂交（RDB）技术对上述187份临床标本分别进行β-地贫基因突变检测，并以DNA测序技术作为金标准，对上述两种方法检测B-地贫基因突变的检测性能进行评估。结果探针熔解曲线分析法除了漏检1例Ini（ATG〉AGG）／N和1例不能区分为CD43（G〉T）／N还是CD37（G〉A）／N外，其余的185份标本的β-地贫基因型均能正确检出；而RDB法有1例CD71-72（＋T）／N未正确检出。以DNA测序技术作为金标准，探针熔解曲线分析法检测的敏感度、特异度、阴性预测值、阳性预测值和诊断效率分别为98．75％、100．00％、93．10％、100．00％、98．93％，RDB法分别为99．38％、100．00％、96．42％、100．00％、99．47％；两者间诊断效率的差异无统计学意义（P=0．999）。且产前诊断的结果与胎儿出生或引产后血样的基因诊断或产后随访结果完全一致。结论PMCA技术可作为RDB技术检测中国人群β-地贫基因突变的替代或验证方法。 展开更多
关键词 Β地中海贫血 聚合酶链反应 熔解曲线分析 核酸杂交 产前诊断
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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶及其基因突变的研究 被引量：11
3
作者 郭静 田国力 +2 位作者 王燕敏 周卓 纪伟 《中华妇幼临床医学杂志（电子版）》 CAS 2020年第6期672-679,共8页
目的探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症新生儿G6PD与其基因突变情况。方法 2017年8月至2019年4月,在上海市儿童医院新生儿筛查中心进行G6PD缺乏症筛查的新生儿为105 766例,初筛G6PD缺乏症呈阳性患儿为217例,选择其中被召回进行G6PD... 目的探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症新生儿G6PD与其基因突变情况。方法 2017年8月至2019年4月,在上海市儿童医院新生儿筛查中心进行G6PD缺乏症筛查的新生儿为105 766例,初筛G6PD缺乏症呈阳性患儿为217例,选择其中被召回进行G6PD复筛和(或)基因检测的161例新生儿为研究对象。这161例新生儿均接受G6PD复筛,其中146例接受G6PD基因检测。同时对男性患儿及其母亲、女性患儿及其父母(将男性患儿母亲与女性患儿父母统称为患儿家系成员)进行G6PD活性和基因检测,分析患儿及其家系成员G6PD活性、G6PD基因突变位点地域性分布特点,并分析G6PD活性与不同G6PD基因突变位点的关系。采用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H秩和检验,对不同患儿与其家系成员的G6PD活性,以及不同G6PD基因突变位点患儿及其家系成员的G6PD活性进行比较。本研究研究遵循的程序符合2013年新修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求,并与患儿监护人签署临床研究知情同意书。结果 (1)本组联合实验室诊断和(或)基因诊断的结果,最终确诊的G6PD缺乏症新生儿为124例(经G6PD活性确诊为121例,G6PD基因检测确诊为113例,二者同时确诊为110例)。(2)经G6PD活性检测确诊为G6PD缺乏症的121例患儿中,男、女性患儿分别为103、18例。这121例患儿的G6PD活性为0.42 U/g血红蛋白(Hb)(0.35~0.67 U/g Hb),显著低于其家系成员的1.17 U/g Hb(0.91~1.42 U/g Hb),男性患儿G6PD活性为0.40 U/g Hb(0.32~0.53 U/g Hb),显著低于其母亲的1.12 U/g Hb(0.91~1.28 U/g Hb),女性患儿G6PD活性为1.16 U/g Hb(0.92~1.46 U/g Hb),显著低于其父母的1.74 U/g Hb(0.69~2.80 U/g Hb),并且上述差异均有统计学意义(Z=-9.981、-10.832、-2.021,P<0.001、<0.001、=0.043)。(3)本组161例受试儿中,共计146例患儿及其185例家系成员进行G6PD基因检测的结果显示,227例(113例患儿与114例患儿家系成员)携带G6PD基因突变,其中3例� 展开更多
关键词 葡糖磷酸脱氢酶缺乏 新生儿筛查 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 聚合酶链反应 荧光定量PCR法 荧光PCR熔解曲线法 地域性分布 婴儿 新生
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困惑、挑战与希望——论结核性创面的诊断 被引量：6
4
作者 贾赤宇 毛舒婷 《中华损伤与修复杂志（电子版）》 CAS 2020年第6期423-427,共5页
结核性创面的临床诊断依然是困扰医师实施精确治疗的难题。结核分枝杆菌分离培养、抗酸染色、病理组织学检查、结核菌素试验、色谱法、血清免疫学法和分子生物学诊断等传统的诊断方法虽然均在应用,但普遍存在操作过程复杂、周期较长、... 结核性创面的临床诊断依然是困扰医师实施精确治疗的难题。结核分枝杆菌分离培养、抗酸染色、病理组织学检查、结核菌素试验、色谱法、血清免疫学法和分子生物学诊断等传统的诊断方法虽然均在应用,但普遍存在操作过程复杂、周期较长、检测阳性率较低等缺陷。寻求一种快速、方便、简洁及检测阳性率高的方法是结核性创面临床诊断面临的挑战。新兴分子生物学技术——实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)探针熔解曲线法在结核性创面石蜡组织中的诊断和耐药分析中展示出独特的优越性:用时短、操作简便,能够同时鉴定多种结核分枝杆菌及非结核分枝杆菌,特异度、敏感度高,为解决结核性创面临床诊断难题带来了新希望。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 诊断 结核性创面 挑战与希望 聚合酶链反应探针熔解曲线法
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基于探针熔解曲线分析的多重PCR同步鉴定6种腹泻病原菌
5
作者 任继轩 胡朝晖 +4 位作者 陈嘉昌 王维世 刘向东 刘鑫源 李颖 《检验医学》 CAS 2024年第8期793-799,共7页
目的基于多重聚合酶链反应(PCR)和探针熔解曲线分析技术,建立可同时鉴定6种常见急性感染性腹泻病原菌的高灵敏度诊断方法,并验证其检测性能。方法采用熔解曲线分析6种常见急性感染性腹泻病原菌熔解温度(Tm)值,建立基于探针熔解曲线分析... 目的基于多重聚合酶链反应(PCR)和探针熔解曲线分析技术,建立可同时鉴定6种常见急性感染性腹泻病原菌的高灵敏度诊断方法,并验证其检测性能。方法采用熔解曲线分析6种常见急性感染性腹泻病原菌熔解温度(Tm)值,建立基于探针熔解曲线分析的多重PCR检测方法,并评价其灵敏度、特异性和重复性。采用该方法检测175例疑似感染性腹泻患者粪便样本,比较该方法鉴定结果与细菌培养法和荧光PCR法鉴定结果的差异,不一致结果通过测序进行确认。结果建立的多重PCR检测方法可实现单次PCR同步检测6种肠道病原菌,检测限为1×10^(3)~1×10^(4)拷贝·mL^(-1),不同病原菌间无交叉反应,特异性高。175例腹泻患者粪便样本中共检出91例(52%)阳性样本。6种病原菌的检测内变异系数(CV)均<0.1%。与细菌培养法相比,该方法检测沙门菌、志贺菌的符合率分别为94.85%(kappa=0.894)、100.00%(kappa=1.000);与荧光PCR相比,该方法检测艰难梭菌的符合率为98.28%(kappa=0.900)。结论建立的基于探针熔解曲线分析的多重PCR方法同时鉴定6种腹泻病原菌具有较高的灵敏度和特异性,可为急性感染性腹泻的临床诊断及时提供实验室依据。 展开更多
关键词 多重聚合酶链反应 熔解曲线分析 感染性腹泻 病原菌
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多重实时聚合酶链式反应熔解曲线法同步鉴别蓝鳍金枪鱼、裸盖鱼、异鳞蛇鲭 被引量：2
6
作者 许随根 李家鹏 +7 位作者 李金春 陈曦 杨君娜 熊苏玥 黄鑫 乔晓玲 曲超 王守伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第24期259-266,共8页
为实现鱼类及其制品掺假的快速鉴别,以蓝鳍金枪鱼(Thunnus thynnus)线粒体DNA的D-loop区、裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)线粒体DNA的16S rRNA基因及异鳞蛇鲭(Lepidocybium flavobrunneum)线粒体DNA的ND4L基因为靶位点,设计扩增产物熔解温... 为实现鱼类及其制品掺假的快速鉴别,以蓝鳍金枪鱼(Thunnus thynnus)线粒体DNA的D-loop区、裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)线粒体DNA的16S rRNA基因及异鳞蛇鲭(Lepidocybium flavobrunneum)线粒体DNA的ND4L基因为靶位点,设计扩增产物熔解温度(Tm)具有显著性差异的特异性引物,建立一种快速鉴别鱼类及其制品中蓝鳍金枪鱼、裸盖鱼、异鳞蛇鲭源性成分的3重实时聚合酶链式反应熔解曲线分析法,通过引物特异性、灵敏度及市售样品的检测,对该方法进行检验和评价。结果表明:构建优化的方法具有良好的特异性及灵敏度,单物种DNA检出限为0.001 ng,多物种混合DNA检出限均为0.1 ng,蓝鳍金枪鱼、裸盖鱼、异鳞蛇鲭源性成分的相对检出限分别为0.5%、1%、0.5%,通过对市售样品的检测表明,该方法可用于实际样品掺假的快速鉴别。 展开更多
关键词 鱼类 掺假 多重实时聚合酶链式反应 熔解曲线分析 蓝鳍金枪鱼 裸盖鱼
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qPCR-HRM曲线分析技术与普通PCR加直接测序法检测胶质瘤EGFR突变比较 被引量：3
7
作者 熊亮 梁朝峰 +5 位作者 陈川 罗伦 凌聪 拳峰 蔡梅钦 史志东 《新医学》 2012年第5期327-330,共4页
目的:比较实时聚合酶链反应-高分辨率融解(qPCR-HRM)曲线分析技术和普通PCR法加直接测序法检测胶质瘤患者EGFR基因突变类型,探讨适用于临床的EGFR基因突变检测方法,为胶质瘤患者术后放射、化学治疗及预后判断研究提供可靠的依据。方法:... 目的:比较实时聚合酶链反应-高分辨率融解(qPCR-HRM)曲线分析技术和普通PCR法加直接测序法检测胶质瘤患者EGFR基因突变类型,探讨适用于临床的EGFR基因突变检测方法,为胶质瘤患者术后放射、化学治疗及预后判断研究提供可靠的依据。方法:用普通PCR加测序法与qPCR-HRM曲线分析技术检测胶质瘤患者EGFR基因突变类型,检测结果比较采用卡方检验。结果:两种方法检测EGFR外显子19基因突变结果比较差异无统计学意义,且qPCR-HRM曲线分析技术比直接测序法更快捷、灵敏。结论:与直接测序法相比,qPCR-HRM曲线分析技术可能更适用于临床检测胶质瘤患者标本EGFR突变性质。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 基因突变 普通PCR DNA测序法 实时聚合酶链反应-高分辨率融解曲线分析技术
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胶质瘤表皮生长因子受体基因突变检测方法的对比研究
8
作者 王敏 李兴涛 《检验医学与临床》 CAS 2013年第15期1930-1931,共2页
目的分析普通聚合酶链式反应(PCR)联合直接测序法与实时聚合酶链式反应-高分辨率融解(qPCR-HRM)曲线分析技术对胶质瘤表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的检测效果。方法用普通PCR联合直接测序法与qPCR-HRM曲线分析技术检测胶质瘤患者EGF... 目的分析普通聚合酶链式反应(PCR)联合直接测序法与实时聚合酶链式反应-高分辨率融解(qPCR-HRM)曲线分析技术对胶质瘤表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的检测效果。方法用普通PCR联合直接测序法与qPCR-HRM曲线分析技术检测胶质瘤患者EGFR基因突变类型,检测结果比较采用χ2检验。结果普通PCR联合直接测序法与qPCR-HRM曲线分析技术对胶质瘤患者肿瘤组织EGFR突变的检测结果一致性较高,达90.91%,两者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 qPCR-HRM曲线分析技术操作较普通PCR联合直接测序法简便,实验时间较短,降低了交叉污染的风险,通过HRM曲线分析检测结果可以实现对样品基因型的判定。 展开更多
关键词 普通聚合酶链式反应联合直接测序法 实时聚合酶链式反应-高分辨率融解曲线分析技术 胶质瘤 表皮生长因子受体 突变
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