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家蚕核型多角体病毒多角体蛋白的多克隆抗体制备及应用试验
1
作者
胡志刚
董战旗
+2 位作者
蒋亚明
董非凡
潘敏慧
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期398-403,共6页
杆状病毒（baculovirus）多角体蛋白（polyhedrin）是晚期高水平表达的蛋白质,对于维持病毒粒子在自然环境下的稳定性和在宿主之间的传播至关重要。PCR扩增家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV）多角体蛋白基...
杆状病毒（baculovirus）多角体蛋白（polyhedrin）是晚期高水平表达的蛋白质,对于维持病毒粒子在自然环境下的稳定性和在宿主之间的传播至关重要。PCR扩增家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV）多角体蛋白基因polh,亚克隆到原核表达载体p ET32,获得重组质粒p ET32-polh,并转化至大肠埃希菌（Escherichia coli）BL21（DE3）表达菌株进行原核表达,诱导表达的融合蛋白带His标签,经镍柱纯化后用于免疫新西兰大白兔,制备抗多角体蛋白的多克隆抗体。Western blot检测该多克隆抗体能够特异识别Bm NPV的多角体蛋白。利用该多克隆抗体进行免疫荧光和Western blot分析多角体蛋白的亚细胞定位及表达时相,结果显示多角体蛋白定位于细胞质,且在病毒感染后48 h才可以被检测到。该多克隆抗体可用于Bm NPV多角体蛋白的功能研究。
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关键词
家蚕核型多角体病毒
多角体蛋白
多克隆抗体
亚细胞定位
表达时相
下载PDF
职称材料
人尿激酶原cDNA在昆虫杆状病毒真核表达系统中的高效表达
被引量：
6
2
作者
徐扬
张洪涛
+2 位作者
宓怡德
吴祥甫
胡美浩
《生物化学杂志》
CSCD
1993年第6期709-713,共5页
人尿激酶原(pro-urokinase,pro-UK)是一种新型溶栓剂,优于尿激酶,具有血纤维蛋白特异性。为了在昆虫杆状病毒表达系统中高效表达pro-UK,我们在pAc373基础上,插入野生型AcMNPV polyhedrin启动子区-7～1碱基序列,构建了一个高表达转移载体...
人尿激酶原(pro-urokinase,pro-UK)是一种新型溶栓剂,优于尿激酶,具有血纤维蛋白特异性。为了在昆虫杆状病毒表达系统中高效表达pro-UK,我们在pAc373基础上,插入野生型AcMNPV polyhedrin启动子区-7～1碱基序列,构建了一个高表达转移载体pAcYT。分别经三次克隆将pro-UK cDNA正向插入到转移载体pAc373或PAcYT的BarnHI-KpnI位点上。用LiPofectin将pAcyT-UKDNA或pAc373-UK DNA与AcMNPV DNA共转染到昆虫Sf9细胞中,空斑法筛出重组病毒阳性克隆株。高效表达结果是:1.ELISA法确定重组病毒Sf9细胞分泌表达产物pro-UK为96mg/L培养基上清,平板法测定溶圈活性为1600IU/mL培养基上清;2.亲和层析一步法纯化表达产物,回收率选70％,以上,比活约为60000IU/mg;3.纯化的pro-UK,无论是否经还原处理,其SDS-PAGE图谱均为相同的单一条带,MR 50000;4.Western blot与SDS-PAGE图谱吻合。
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关键词
昆虫
杆状病毒
表达
尿激酶原
CDNA
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职称材料
题名
家蚕核型多角体病毒多角体蛋白的多克隆抗体制备及应用试验
1
作者
胡志刚
董战旗
蒋亚明
董非凡
潘敏慧
机构
家蚕基因组生物学国家重点实验室
农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室
西南大学生物技术学院
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期398-403,共6页
基金
国家自然科学基金项目(No.31472152)
现代农业产业技术体系建设专项(No.CARS-18)
文摘
杆状病毒（baculovirus）多角体蛋白（polyhedrin）是晚期高水平表达的蛋白质,对于维持病毒粒子在自然环境下的稳定性和在宿主之间的传播至关重要。PCR扩增家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV）多角体蛋白基因polh,亚克隆到原核表达载体p ET32,获得重组质粒p ET32-polh,并转化至大肠埃希菌（Escherichia coli）BL21（DE3）表达菌株进行原核表达,诱导表达的融合蛋白带His标签,经镍柱纯化后用于免疫新西兰大白兔,制备抗多角体蛋白的多克隆抗体。Western blot检测该多克隆抗体能够特异识别Bm NPV的多角体蛋白。利用该多克隆抗体进行免疫荧光和Western blot分析多角体蛋白的亚细胞定位及表达时相,结果显示多角体蛋白定位于细胞质,且在病毒感染后48 h才可以被检测到。该多克隆抗体可用于Bm NPV多角体蛋白的功能研究。
关键词
家蚕核型多角体病毒
多角体蛋白
多克隆抗体
亚细胞定位
表达时相
Keywords
Bombyx mori nucleo
polyhe
drovirus
polyhe
-
drin
Polyclonal antibody
Subcellular Iocalization
Expre-ssion phase
分类号
Q523.3 [生物学—生物化学]
Q786
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职称材料
题名
人尿激酶原cDNA在昆虫杆状病毒真核表达系统中的高效表达
被引量：
6
2
作者
徐扬
张洪涛
宓怡德
吴祥甫
胡美浩
机构
北京大学生物系生化教研室
上海生化所
出处
《生物化学杂志》
CSCD
1993年第6期709-713,共5页
基金
863高科技项目赞助
文摘
人尿激酶原(pro-urokinase,pro-UK)是一种新型溶栓剂,优于尿激酶,具有血纤维蛋白特异性。为了在昆虫杆状病毒表达系统中高效表达pro-UK,我们在pAc373基础上,插入野生型AcMNPV polyhedrin启动子区-7～1碱基序列,构建了一个高表达转移载体pAcYT。分别经三次克隆将pro-UK cDNA正向插入到转移载体pAc373或PAcYT的BarnHI-KpnI位点上。用LiPofectin将pAcyT-UKDNA或pAc373-UK DNA与AcMNPV DNA共转染到昆虫Sf9细胞中,空斑法筛出重组病毒阳性克隆株。高效表达结果是:1.ELISA法确定重组病毒Sf9细胞分泌表达产物pro-UK为96mg/L培养基上清,平板法测定溶圈活性为1600IU/mL培养基上清;2.亲和层析一步法纯化表达产物,回收率选70％,以上,比活约为60000IU/mg;3.纯化的pro-UK,无论是否经还原处理,其SDS-PAGE图谱均为相同的单一条带,MR 50000;4.Western blot与SDS-PAGE图谱吻合。
关键词
昆虫
杆状病毒
表达
尿激酶原
CDNA
Keywords
Baculovirus
Autographa californica nuclear
polyhe
drosis virus
polyhe
-
drin
promotor
Spodoptera frugiperda cells
pAcYT DNA
Pro-urokinase cDNA
Ex-pression of human pro-urokinase gene
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
家蚕核型多角体病毒多角体蛋白的多克隆抗体制备及应用试验
胡志刚
董战旗
蒋亚明
董非凡
潘敏慧
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
下载PDF
职称材料
2
人尿激酶原cDNA在昆虫杆状病毒真核表达系统中的高效表达
徐扬
张洪涛
宓怡德
吴祥甫
胡美浩
《生物化学杂志》
CSCD
1993
6
下载PDF
职称材料
已选择
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