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聚合酶链反应检测深部致病真菌的实验研究 被引量：16
1
作者 刘军 刘维达 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期503-505,共3页
目的建立能用于临床实践的检测常见致病真菌的聚合酶链反应(PCR)方法。方法设计了以热启动PCR为基础的实验方法,首先用真菌通用引物对标本进行单重PCR,若阳性,再用白念珠菌、烟曲霉和新生隐球菌的种特异性引物进行三重PCR来检测这3种常... 目的建立能用于临床实践的检测常见致病真菌的聚合酶链反应(PCR)方法。方法设计了以热启动PCR为基础的实验方法,首先用真菌通用引物对标本进行单重PCR,若阳性,再用白念珠菌、烟曲霉和新生隐球菌的种特异性引物进行三重PCR来检测这3种常见致病真菌。结果对9属55种78株常见深部真菌均扩增出260bp的DNA片段,而对细菌和人DNA均未扩增出目的片段,具有高度特异性和敏感性,该方法操作简便且成本低。结论以热启动PCR为基础的单重PCR和三重PCR方法可能成为临床上深部真菌感染理想的快速诊断工具。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 念珠菌属 曲霉菌属 隐球菌属 聚合酶链反应检测 深部真菌感染 致病真菌 实验研究 PCR方法 种特异性引物
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聚合酶链反应检测人细小病毒B19-DNA 被引量：4
2
作者 张国成 许东亮 +2 位作者 李佐华 王瑞华 王绮云 《第四军医大学学报》 1993年第6期463-464,共2页
作者业已通过检测血清中特异性IgG,首先在我国证明存在人细小病毒B19感染[王绮云,等.第四军医大学学报 1991;12(2):134～136]。为探索敏感的临床诊断技术,研究B 19病毒的致病性,作者建立了聚合酶链反应检测人细小病毒B 19-DNA方法,并用... 作者业已通过检测血清中特异性IgG,首先在我国证明存在人细小病毒B19感染[王绮云,等.第四军医大学学报 1991;12(2):134～136]。为探索敏感的临床诊断技术,研究B 19病毒的致病性,作者建立了聚合酶链反应检测人细小病毒B 19-DNA方法,并用于临床标本检测。1 材料和方法1.1 PCR引物和试剂 引物选自编码 展开更多
关键词 人 细小病毒B19 聚合酶链反应
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原位聚合酶链技术检测肝细胞癌组织内丙型肝炎病毒核酸及其意义 被引量：10
3
作者 曾维政 蒋明德 +5 位作者 褚桂珍 张建华 陈泰庆 楚人俊 邓桂英 张家碧 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第11期747-750,共4页
应用一步反转录。聚合酶链原位扩增法（ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ）检测肝细胞癌（ＨＣＣ）及癌周组织内丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ），同时以一步反转录－ＰＣＲ（ＯＲＴ－ＰＣＲ）法检测血清及肝组织匀浆内ＨＣＶＲＮＡ。发现癌和... 应用一步反转录。聚合酶链原位扩增法（ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ）检测肝细胞癌（ＨＣＣ）及癌周组织内丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ），同时以一步反转录－ＰＣＲ（ＯＲＴ－ＰＣＲ）法检测血清及肝组织匀浆内ＨＣＶＲＮＡ。发现癌和癌周组织经原位扩增后ＨＣＶＲＮＡ检出率为７７．８％（２／２７）及８１．５％（２２／２７），而血清及组织匀浆内仅为２９．６％及３７．Ｏ％，两者与癌及癌周组织相比差异均有显著性（Ｐ＜０．０１）。ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ示在癌组织中ＨＣＶＲＮＡ以核型为主（１２／２１），阳性细胞点样分布，细胞内信号强度多为＋（５７．１％）；而癌周组织以核浆型为主（１４／２２），阳性细胞弥漫分布，信号强度多为＋＋＋（５０．０％）。无论在癌还是在癌周组织均未发现ＨＣＶｃＤＮＡ存在。结果提示ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ优于ＲＴ－ＰＣＲ，ＨＣＶ对本地区ＨＣＣ发生、发展起着极为重要的作用。癌周ＨＣＶ复制较癌组织内活跃，癌和癌周细胞核阳性表明ＨＣＶＲＮＡ在核内整合或复制，这种整合或复制对肝细胞基因组ＤＮＡ产生的影响可能与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相类似。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 肝肿瘤 丙型肝炎病毒 DNA
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逆转录多聚酶链反应检测白血病多药耐药性基因表达 被引量：5
4
作者 仇红刚 史国利 +1 位作者 王景明 林梓稼 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第7期463-467,共5页
以逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）结合溴介导生物素标记寡核苷酸探针杂交（ｄｏｔｂｌｏｔ）对７３例各型、各期白血病细胞中多药耐药（ＭＤＲ１）基因表达进行了检测并以ＭＤＲ１／β２Ｍ（β＿２微球蛋白）对其进行了半定量分析... 以逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）结合溴介导生物素标记寡核苷酸探针杂交（ｄｏｔｂｌｏｔ）对７３例各型、各期白血病细胞中多药耐药（ＭＤＲ１）基因表达进行了检测并以ＭＤＲ１／β２Ｍ（β＿２微球蛋白）对其进行了半定量分析，结果表明在初治、复发及完全缓解急性白血病及慢粒急变白血病中均有ＭＤＲ１阳性检出其表达水平不同，发现临床白血病化疗耐药的发生主要与ＭＤＲ＿１高表达有关，对可作预后评价的病例分析表明ＭＤＲ＿１的高表达与其化疗反应显著相关，认为ＲＴ－ＰＣＲ检测ＭＤＲ＿１基因表达可作为一个临床化疗耐药指标有助于针对性的白血病个体化疗方案的判定。 展开更多
关键词 白血病 聚合酶链反应 基因表达 抗药性
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快速DNA提取法在检测卡氏肺孢子虫PCR中的应用 被引量：2
5
作者 安春丽 姜丽 +1 位作者 闻功丽 田边将信 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第5期71-72,91,共3页
为寻求一种适用于临床诊断的PCR方法。方法用快速PCR模板DNA制备方法提取实验大鼠肺组织，支气管肿泡灌洗液和血液中的卡氏肺孢子虫DNA，进行PCR扩增，并与传统的DNA提取法进行对比。结果两种方法收到一致的理想结果。结论快速法提取的... 为寻求一种适用于临床诊断的PCR方法。方法用快速PCR模板DNA制备方法提取实验大鼠肺组织，支气管肿泡灌洗液和血液中的卡氏肺孢子虫DNA，进行PCR扩增，并与传统的DNA提取法进行对比。结果两种方法收到一致的理想结果。结论快速法提取的DNA适用于卡氏肺孢子虫的PCR检测。将此法试用于临床病例检测，也收到如期结果，初步显示其推广应用前景。 展开更多
关键词 模板DNA 卡氏肺孢子虫 聚合酶链反应
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雷公藤甲素抑制外周血单个核细胞分泌IL-1β及其基因多态性的关系 被引量：3
6
作者 涂胜豪 盛冬云 +1 位作者 陈红波 胡永红 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2005年第9期518-521,共4页
目的探讨雷公藤甲素抑制外周血单个核细胞(PBMC)分泌白细胞介素-1β(IL-1β)及其基因多态性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法,对31名健康志愿者IL-1β基因启动子区-511位点C-T多态性进行基因型检测,同时... 目的探讨雷公藤甲素抑制外周血单个核细胞(PBMC)分泌白细胞介素-1β(IL-1β)及其基因多态性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法,对31名健康志愿者IL-1β基因启动子区-511位点C-T多态性进行基因型检测,同时进行PBMC培养,用脂多糖(LPS)刺激培养细胞,并予以雷公藤甲素处理PBMC,收集培养上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中IL-1β的含量。结果携带IL-1β-511T/T纯合子基因型PBMC经LPS刺激后,IL-1β的分泌量明显较非T/T纯合子为高(P<0.05);雷公藤甲素能显著抑制LPS诱导的C/C和C/T基因型PBMC分泌IL-1β(P<0.05),但对T/T基因型的抑制作用不明显(P>0.05)。结论IL-1β基因-511C-T多态性与IL-1β的分泌量相关,雷公藤甲素对不同基因型的IL-1β抑制作用有差异,这可能是导致雷公藤药理作用出现个体差异的原因之一。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 外周血 单个核细胞 细胞分泌 IL-1Β 基因多态性 类风湿关节炎
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聚合酶链反应鉴定艰难梭菌产毒株 被引量：2
7
作者 陈村龙 周殿元 +2 位作者 潘令嘉 邓惠欢 王继德 《中华医学检验杂志》 CSCD 1994年第3期169-171,共3页
以艰难梭菌Ａ毒素基因非重复片段中的２个寡核苷酸链作引物，扩增３０６ｂｐ，用多聚酶链反应技术扩增３１株细菌，结果１９株艰难梭菌产毒株均扩增出单一特异的电泳带，而８株艰难梭菌无毒株、２株索氏梭菌和２株大肠杆菌均无特异带出... 以艰难梭菌Ａ毒素基因非重复片段中的２个寡核苷酸链作引物，扩增３０６ｂｐ，用多聚酶链反应技术扩增３１株细菌，结果１９株艰难梭菌产毒株均扩增出单一特异的电泳带，而８株艰难梭菌无毒株、２株索氏梭菌和２株大肠杆菌均无特异带出现。将艰难梭菌产毒株的模板ＤＮＡ从５０ｎｇ稀释至０．５ｎｇ后再进行聚合酶链反应，结果仍可见特异扩增带。说明聚合酶链反应鉴定艰难梭菌产毒株较之细菌分离培养、细胞毒素测定方法具有快速、简便、特异、敏感的优点，可望用于临床标本的直接检测。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 艰难梭菌 产毒株
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聚合酶链反应检测HBV-DNA及临床意义的再认识
8
作者 钟玉芳 刘耀敏 张建华 《青岛医药卫生》 1996年第10期11-12,共2页
采用聚合酶链反应检测114例肝病患者血清HBV-DNA。结果:血清HBV-DNA阳性率为35.96％,其中AH,CPH、CAH、LC组HBV-DNA阳性率分别为41.67％、21.43％、53.66％和26.31％;HBeAg阳性组为39.02％;抗HBe阳性组为22.73％;HBsAg、抗HBc阳性组为47... 采用聚合酶链反应检测114例肝病患者血清HBV-DNA。结果:血清HBV-DNA阳性率为35.96％,其中AH,CPH、CAH、LC组HBV-DNA阳性率分别为41.67％、21.43％、53.66％和26.31％;HBeAg阳性组为39.02％;抗HBe阳性组为22.73％;HBsAg、抗HBc阳性组为47.37％;抗HBs阳性组为41.18％;HBVM阴性组为11.11％。结果提示:①CAH组阳性率较高(53.66％);③抗HBe阳性患者血清中有较高滴度HBV-DNA,仍有传染性;③抗HBe阳性、抗HBs阳性、HBVM阴性的患者HBV-DNA阳性可能为HBV的变异株感染。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 HBV-DNA
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