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核磁共振氢谱和高压液相分子排阻层析-十八角激光散射仪对肺炎链球菌荚膜多糖的结构及分子质量分析 被引量:5
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作者 石继春 罗树全 +6 位作者 李茂光 李阿妮 王春娥 杨英英 叶强 谢贵林 赵志强 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期700-705,共6页
目的对6种血清型肺炎链球菌荚膜多糖进行结构和分子质量分析。方法核磁共振氢谱(1 H NMR)对6种血清型肺炎链球菌荚膜多糖的结构进行分析,通过各特征质子的化学位移来确定多糖结构的完整性及批间一致性;高压液相分子排阻层析-十八角... 目的对6种血清型肺炎链球菌荚膜多糖进行结构和分子质量分析。方法核磁共振氢谱(1 H NMR)对6种血清型肺炎链球菌荚膜多糖的结构进行分析,通过各特征质子的化学位移来确定多糖结构的完整性及批间一致性;高压液相分子排阻层析-十八角激光散射仪( HPSEC-MALLS)对荚膜多糖的分子质量进行分析,以确定其分子质量及分布情况。结果6种血清型肺炎链球菌荚膜多糖特征质子的化学位移与其标准化学位移一致;重均分子质量范围为7.182×104 g/mol (19A型)~1.273×106 g/mol(9V型)。结论 NMR和HPSEC-MALLS能够快速、高效地对各型肺炎链球菌荚膜多糖进行结构和分子质量分析。6种血清型肺炎链球菌荚膜多糖谱图中各个质子的化学位移完全符合该型肺炎链球菌荚膜多糖的化学结构,但荚膜多糖中存在含量不等的C多糖以及纯化过程中未去除彻底的醋酸盐类物质;由于荚膜多糖特性及纯化方式的不同,6种型肺炎链球菌荚膜多糖之间分子质量存在一定差异。 展开更多
关键词 肺炎链球菌荚膜多糖 1HNMR 化学结构 HPSEC-MALLS 重均分子质量
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14型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗研究 被引量:4
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作者 谈宁芝 栗克喜 +3 位作者 刘玉清 冯晓虎 蔡勤 余文三 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期625-628,共4页
目的 探讨制备肺炎球菌荚膜多糖 (PNCPS) 蛋白结合疫苗的适宜条件。方法 采用碳二亚胺法将 14型PNCPS与破伤风类毒素 (TT)结合 ,将结合物免疫NIH小鼠 ,用ELISA法检测小鼠血清中抗 14型PNCPS的IgG抗体滴度。结果 结合反应产率和结合... 目的 探讨制备肺炎球菌荚膜多糖 (PNCPS) 蛋白结合疫苗的适宜条件。方法 采用碳二亚胺法将 14型PNCPS与破伤风类毒素 (TT)结合 ,将结合物免疫NIH小鼠 ,用ELISA法检测小鼠血清中抗 14型PNCPS的IgG抗体滴度。结果 结合反应产率和结合物中多糖、蛋白含量的测定显示试验成功合成了 14型PNCPS TT结合物 ,该结合物具有 14型PNCPS的血清学特异性 ,将之免疫小鼠诱生的抗 14型PNCPS特异性IgG抗体水平显著高于单纯 14型PNCPS。结论 试验成功地合成了 14型PNCPS TT结合物 。 展开更多
关键词 肺炎球菌荚膜多糖 破伤风类毒素 结合疫苗 碳二亚胺 免疫原性 肺炎球菌性肺炎
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一种高效快速肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗纯化方法的建立 被引量:4
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作者 刘荣凤 寇佳琳 +3 位作者 黄前荣 张永强 任新刚 李红臣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第7期764-768,共5页
目的建立一种高效快速肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗CPS9V-CRM_(197)的纯化方法。方法将9V型肺炎球菌多糖(CPS9V)与载体蛋白(CRM197)通过胺还原法进行偶连结合,制备成多糖蛋白结合物CPS9V-CRM_(197)。通过超滤及阴离子层析两步法纯化后,经... 目的建立一种高效快速肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗CPS9V-CRM_(197)的纯化方法。方法将9V型肺炎球菌多糖(CPS9V)与载体蛋白(CRM197)通过胺还原法进行偶连结合,制备成多糖蛋白结合物CPS9V-CRM_(197)。通过超滤及阴离子层析两步法纯化后,经皮下免疫BALB/c小鼠,5μg/只,首次免疫后14d进行第2次免疫。于末次免疫后0、7、14、21d经颈动脉采血,分离血清,ELISA法检测血清中的IgG及IgM抗体滴度。结果纯化的CPS9V-CRM_(197)结合物纯度达100%,多糖的总回收率为95%,分子半径为8.4nm,CL-4B色谱洗脱体积为50.32ml,酶解敏感性高于载体蛋白CRM197。末次免疫后7、14、21d时,CPS9V-CRM_(197)免疫小鼠血清中IgG及IgM的滴度均明显高于CPS9V组(P<0.05)。结论本实验建立的肺炎多糖结合物两步纯化法具有高效、快速等优点,可用于进一步提高实际工业化生产中的生产效率。 展开更多
关键词 肺炎球菌多糖 载体蛋白 结合疫苗 纯化 免疫原性
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核磁共振氢谱分析法在肺炎球菌荚膜多糖疫苗质量控制中的应用 被引量:3
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作者 王玺 李阿妮 +4 位作者 张轶 张新庄 任克明 王剑虹 沈荣 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期2681-2686,共6页
目的:将一维核磁共振氢谱(~1H-NMR)法分析应用于肺炎球菌荚膜多糖(Pn Ps)的质量控制。方法:用~1H-NMR法检测供试品Pn Ps,对部分特征信号进行归属,判断供试品化学结构是否与文献公布结果一致。对图谱异常的Pn Ps22F、23F的1H-NMR... 目的:将一维核磁共振氢谱(~1H-NMR)法分析应用于肺炎球菌荚膜多糖(Pn Ps)的质量控制。方法:用~1H-NMR法检测供试品Pn Ps,对部分特征信号进行归属,判断供试品化学结构是否与文献公布结果一致。对图谱异常的Pn Ps22F、23F的1H-NMR图谱进一步分析,辨认其水解特征信号。分析样品中是否有C-多糖(3.23ppm)、乙酸盐(1.92ppm)和Tris(3.73 ppm)等残留。结果:~1H-NMR分析结果显示Pn Ps14,6B,1,12F和33F结构与分析文献公布结果一致,样品中均含有少量的C多糖残留。图谱异常的Pn Ps22F和Pn Ps23F分别有部分脱氧乙酰基和部分脱磷酸甘油酯基团。3型中含有Tris残留。结论:1H-NMR检定方法快捷、所需样品量少、结果直观,可用于Pn Ps的质量控制。 展开更多
关键词 肺炎球菌荚膜多糖 核磁共振 质控控制
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核磁共振氢谱对6群肺炎链球菌荚膜多糖的结构分析 被引量:3
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作者 陈琼 许美凤 +5 位作者 余勇 龙新星 王春娥 李茂光 陈翠萍 叶强 《中国医药导报》 CAS 2016年第29期16-19,共4页
目的对6群型肺炎链球菌荚膜多糖进行结构分析。方法应用分子生物学方法将6群肺炎链球菌分为6A型、6B型、6C型和6D型,提纯其荚膜多糖,并采用核磁共振氢谱(1H NMR)对6群肺炎链球菌荚膜多糖的结构进行分析,比较6A型、6B型、6C型和6D型多糖... 目的对6群型肺炎链球菌荚膜多糖进行结构分析。方法应用分子生物学方法将6群肺炎链球菌分为6A型、6B型、6C型和6D型,提纯其荚膜多糖,并采用核磁共振氢谱(1H NMR)对6群肺炎链球菌荚膜多糖的结构进行分析,比较6A型、6B型、6C型和6D型多糖结构1H NMR谱的端基质子区和环质子区化学位移的差异。结果 6A型谱图中,三个特征质子峰化学位移值分别为δ5.62、δ5.13和δ5.05;6C型谱图中,三个特征质子峰化学位移值分别为δ5.59、δ5.13和δ5.05;6B型谱图中,三个特征质子峰化学位移分别为δ5.62、δ5.17和δ5.15;6D型谱图中,三个特征质子峰化学位移分别为δ5.59、δ5.17和δ5.15。6A、6B、6C和6D型的环质子区(δ4.40~3.30)化学位移表现出不同的位移特性。结论获得6A型、6B型、6C型和6D型肺炎链球菌荚膜多糖1H NMR谱图,其端基质子区和环质子区化学位移存在差异,为荚膜多糖质量控制提供基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌荚膜多糖 核磁共振氢谱 端基质子 环质子 化学位移
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多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物对小鼠免疫应答的影响
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作者 任克明 陈晓航 +4 位作者 张轶 刘爱萍 陈美华 王剑虹 沈荣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第8期792-794,共3页
目的探讨多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物对小鼠免疫应答的影响。方法分别用单一载体(破伤风类毒素)和混合载体(破伤风类毒素和白喉类毒素)作为多糖结合物的载体蛋白,制备5~9价肺炎链球菌荚膜多糖结合物,免疫NIH小鼠,采用间接ELISA法测... 目的探讨多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物对小鼠免疫应答的影响。方法分别用单一载体(破伤风类毒素)和混合载体(破伤风类毒素和白喉类毒素)作为多糖结合物的载体蛋白,制备5~9价肺炎链球菌荚膜多糖结合物,免疫NIH小鼠,采用间接ELISA法测定免疫小鼠血清中抗荚膜多糖特异性IgG抗体水平。结果多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物的免疫效果优于相应的单价结合物;随着结合物配制价数的增高,小鼠的免疫应答能力趋于下降;多价结合物中使用两种载体能缓解此现象,但载体含量过高时,依然会抑制免疫应答。结论多价肺炎链球菌荚膜多糖结合物免疫小鼠后,随着载体剂量的增高,会出现载体诱导的表位抑制现象,使小鼠的免疫应答反应减弱。两种载体蛋白同时使用能缓解此现象。 展开更多
关键词 肺炎链球菌荚膜多糖 结合物 破伤风类毒素 白喉类毒素 免疫应答 表位抑制
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哮喘患儿和非哮喘儿童血中抗肺炎链球菌荚膜多糖IgG水平的差异 被引量:11
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作者 陈蒙 田曼 +1 位作者 陆悦倩 赵德育 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1046-1049,共4页
目的探讨哮喘患儿对侵袭性肺炎链球菌疾病(IPD)易感性的体液免疫机制。方法收集43例哮喘患儿和20例非哮喘择期手术患儿的血浆标本,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定并比较两组血中抗肺炎链球菌荚膜多糖(PPS)IgG水平。结果哮喘患儿血中抗PPS... 目的探讨哮喘患儿对侵袭性肺炎链球菌疾病(IPD)易感性的体液免疫机制。方法收集43例哮喘患儿和20例非哮喘择期手术患儿的血浆标本,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定并比较两组血中抗肺炎链球菌荚膜多糖(PPS)IgG水平。结果哮喘患儿血中抗PPS-14、19A及23F 3种血清型IgG水平均高于非哮喘儿童,差异有统计学意义(P均<0.05);其3型IgG水平达到保护性抗体水平(≥0.2μg/ml)以上的比例均为100%。结论哮喘患儿体内防御IPD的抗PPS-IgG免疫功能正常,但哮喘患儿可能比非哮喘儿童更容易发生肺炎链球菌感染或定植。 展开更多
关键词 哮喘 侵袭性肺炎链球菌疾病 抗肺炎链球菌荚膜多糖IgG
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速率比浊法测定13价肺炎球菌结合疫苗中的各型多糖含量 被引量:5
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作者 陈琼 王珊珊 +4 位作者 梁丽 王春娥 李茂光 石继春 叶强 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1954-1958,共5页
目的:建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量。方法:采用免疫化学系统(IMMAGE 800),选择非竞争性浊度模式,样品或标准品20μL,血清20μL,反应缓冲液200μL,增益系数为4,反应时间为2.5 min;用氢氧化钠解吸附法处理样... 目的:建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量。方法:采用免疫化学系统(IMMAGE 800),选择非竞争性浊度模式,样品或标准品20μL,血清20μL,反应缓冲液200μL,增益系数为4,反应时间为2.5 min;用氢氧化钠解吸附法处理样品和标准品。结果:在本文条件下,1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型肺炎球菌荚膜多糖浓度在1~6μg·mL^-1检测范围内,线性良好(r〉0.99);重复性RSD均低于7%;各型多糖含量回收率在70%~130%;专属性考察结果显示,除9N型多糖的存在会干扰9V型多糖含量检测外,13价肺炎球菌结合疫苗中不包含的多糖(2、8、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F型)对此方法没有影响;耐用性研究结果显示,氢氧化钠解吸附法处理样品和标准品时,控制在10 s左右即中和解吸附过程中加入的氢氧化钠;用所建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型肺炎球菌荚膜多糖含量,结果显示4批成品检测值在理论值的70%~130%之间。结论:所建立的检测方法准确,重复性好,可作为13价肺炎球菌结合疫苗的质控标准。 展开更多
关键词 速率比浊法 13价肺炎球菌结合疫苗 肺炎球菌荚膜多糖含量 非竞争性浊度模式 氢氧化钠解吸附法
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6B型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫原性 被引量:4
9
作者 栗克喜 谈宁芝 +4 位作者 刘玉清 冯晓虎 蔡勤 王国钦 余文山 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第6期353-356,共4页
目的 制备6B型肺炎球菌荚膜多糖(6B-PNCPS)-破伤风类毒素蛋白(TT)结合疫苗,并研究其免疫原性。方法6B-PNCPS用溴化氰活化后与己二酰肼形成多糖-酰肼基衍生物,然后在蛋白活化剂碳二亚胺作用下将6B-PNCPS与TT进行共价结合。分别将其结合... 目的 制备6B型肺炎球菌荚膜多糖(6B-PNCPS)-破伤风类毒素蛋白(TT)结合疫苗,并研究其免疫原性。方法6B-PNCPS用溴化氰活化后与己二酰肼形成多糖-酰肼基衍生物,然后在蛋白活化剂碳二亚胺作用下将6B-PNCPS与TT进行共价结合。分别将其结合物及多糖免疫NIH小鼠,用ELISA检测小鼠血清中抗6B-PNCPS抗体。结果6B-PNCPS-TT结合物经凝胶色谱分析显示具有较6B-PNCPS更大的相对分子质量,多糖/蛋白比为1.42-1.66。结合物具有6B-PNCPS的血清学特异性,所诱生的抗6B-PNCPS特异性IgG抗体滴度与6B-PNCPS差异有显著意义。结论 用该法制备6B-PNCPS-TT结合疫苗,具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 6B型肺炎球菌荚膜多糖 破伤风类毒素 疫苗 制备 免疫原性 共价结合菌苗
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6A型肺炎链球菌荚膜多糖水解物的制备及其结合物在小鼠体内免疫原性研究 被引量:3
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作者 罗树权 杨英英 +10 位作者 张钰奇 李献林 杜娇 胡浩 刘佳 刘月萍 李阿妮 任珍芸 刘爱萍 侯亚莉 谢贵林 《微生物学免疫学进展》 2017年第6期1-8,共8页
目的制备6A型肺炎链球菌荚膜多糖(PS6A)水解物及其结合物,研究结合物在小鼠体内的免疫原性。方法在60℃水解温度下,筛选出PS6A水解适宜的醋酸水解浓度和水解时间。通过水解物和原糖(PS6A)的核磁共振氢谱(1H NMR)和磷谱(31P NMR)比较验... 目的制备6A型肺炎链球菌荚膜多糖(PS6A)水解物及其结合物,研究结合物在小鼠体内的免疫原性。方法在60℃水解温度下,筛选出PS6A水解适宜的醋酸水解浓度和水解时间。通过水解物和原糖(PS6A)的核磁共振氢谱(1H NMR)和磷谱(31P NMR)比较验证水解物结构的正确性。以1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(1-Cyano-4-(dimethylamino)pyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化水解物的羟基,并与破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物(TTAH)结合,制备结合物PS6A-TTAH;并检测结合物的理化性质。通过抑制ELISA分析原糖、水解物和结合物的抗原性。将小鼠分为2组(PS6A组和PS6A-TTAH组),分别免疫3剂次,用间接ELISA分析原糖和结合物在小鼠体内的免疫原性。结果多糖经0.2 mol/L醋酸60℃水解8 h后,其相对分子质量大小(KD)由0.03升高为0.51,重均相对分子质量(Mw)由8.127×10~5g/mol降为1.175×10~5g/mol。核磁共振结果表明,各特征质子的化学位移相比原糖未发生改变。结合物的游离多糖质量分数为4.55%,游离载体蛋白质质量分数为1.08%。抑制ELISA结果显示,水解物、结合物的抑制曲线与原糖基本吻合。PS6A-TTAH组有剂次加强效应(P分别为0.001、0.004和0.001),其第1~3针免后IgG抗体水平均高于PS6A组,差异均具有统计学意义(P分别为0.001、0.002和0.001)。结论制备的PS6A水解物能有效的保留天然多糖的特异基团,以此水解物制备的结合物在小鼠体内具有良好的免疫应答。 展开更多
关键词 6A型肺炎球菌荚膜多糖 水解物 结合物 免疫原性
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6A型肺炎球菌结合物分子大小对小鼠免疫原性的影响 被引量:1
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作者 杨英英 张钰奇 +10 位作者 马凯凯 周海飞 李献林 杜娇 杨田瑶 乔瑞洁 王玺 任珍芸 苗鑫 刘爱萍 罗树权 《微生物学免疫学进展》 2019年第3期16-21,共6页
目的 比较不同分子大小的6A型肺炎球菌(serotype 6A Streptococcus Pneumoniae )结合物和佐剂吸附在小鼠体内免疫原性的影响。方法 通过乙酸水解降低6A型荚膜多糖的相对分子质量制备成水解物,水解物经1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(C... 目的 比较不同分子大小的6A型肺炎球菌(serotype 6A Streptococcus Pneumoniae )结合物和佐剂吸附在小鼠体内免疫原性的影响。方法 通过乙酸水解降低6A型荚膜多糖的相对分子质量制备成水解物,水解物经1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化并与破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物TT AH 结合,制备成结合物。用Sepharose 4 Fast Flow 纯化结合物,并根据化学检测结果将结合物分为 K D 0.0~0.2、 K D 0.2~0.4、 K D 0.4~0.6等3个组分,每个组分分别以磷酸铝佐剂吸附,将吸附前后的各个组分按照每针次每只小鼠0.2 μg分别免疫小鼠,并采用ELISA检测结合物在小鼠体内的抗体水平。结果 3种不同相对分子质量吸附前后的结合物在小鼠体内均能产生较高水平的抗体,各组2、3针之间具有明显的加强效应。在吸附组和未吸附组中,3种不同分子大小的结合物在小鼠体内产生抗体水平无明显差异。各组分佐剂吸附后的结合物血清抗体滴度高于未吸附组,但这种差异无统计学意义( P > 0.05)。结论 结合物的分子大小对小鼠体内抗体水平的产生没有明显影响;磷酸铝佐剂吸附对于不同分子大小的结合物在小鼠体内的免疫原性有一定的增强效应,但这种增强效应差异无统计学意义。 展开更多
关键词 6A型肺炎球菌荚膜多糖 结合物 分子大小 佐剂 免疫原性
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不同载体蛋白制备的3型肺炎球菌结合物在小鼠体内免疫原性比较
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作者 杨英英 张钰奇 +10 位作者 任珍芸 张丽芝 马凯凯 高晶晶 杜娇 王欣茹 乔瑞洁 马钰 周海飞 王玺 罗树权 《甘肃医药》 2020年第1期1-5,共5页
目的:比较由破伤风类毒素(TT)、破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物(TTAH)、重组铜绿假单胞菌外毒素A(r EPA)、重组铜绿假单胞菌外毒素A己二酸酰肼衍生物(r EPAAH)4种载体蛋白与3型肺炎球菌荚膜多糖制备的3型肺炎球菌结合物在小鼠体内免疫原... 目的:比较由破伤风类毒素(TT)、破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物(TTAH)、重组铜绿假单胞菌外毒素A(r EPA)、重组铜绿假单胞菌外毒素A己二酸酰肼衍生物(r EPAAH)4种载体蛋白与3型肺炎球菌荚膜多糖制备的3型肺炎球菌结合物在小鼠体内免疫原性。方法:3型荚膜多糖先经0.5M乙酸水解降低其分子量制备成水解物,水解物经1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化后分别与4种载体蛋白制备成结合物。结合物均经Sepharose 4 Fast Flow柱层析纯化,收集KD0.0~0.2部分得到4种结合物,将结合物分别免疫小鼠,采用ELISA法检测,比较各结合物在小鼠体内产生的抗体水平。结果:4种结合物均能在小鼠体内产生较高水平的Ig G抗体。对于同类载体蛋白,PS3-TTAH在小鼠体内产生的Ig G抗体水平比PS3-TT低,但二者抗体水平的差异无统计学意义(P>0.05);PS3-r EPAAH在小鼠体内产生的Ig G抗体水平比PS3-r EPA低,二者抗体水平的差异也无统计学意义(P>0.05);对于不同类载体蛋白,PS3-TT在小鼠体内产生的Ig G抗体水平比PS3-r EPA及PS3-r EPAAH高,抗体水平的差异无统计学意义(P>0.05);PS3-TTAH在小鼠体内产生的Ig G抗体水平比PS3-r EPAAH高,但与PS3-r EPA相当,其抗体水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:对于3型肺炎球菌多糖,TT、TTAH、r EPA及r EPAAH均是较好的载体,r EPA可以作为一种新的候选载体运用于肺炎球菌结合疫苗。 展开更多
关键词 3型肺炎球菌荚膜多糖 载体蛋白 结合物 免疫原性
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