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介绍一种简易、快速提取和纯化质粒的方法
1
作者 李小林 陈孝英 +1 位作者 刘剑剀 赵晓冬 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1992年第2期198-199,共2页
我们报告一种简单、快速提取和纯化质粒的方法。经过细菌培养、质粒扩增制备出清亮裂解液,经酚处理后,用Sephacryl S—1000凝胶过滤层析除去了菌体RNA。制备出的高纯度质粒DNA可用于限制内切酶等分析与应用。
关键词 质粒 层析 DNA 限制内切酶
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大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1基因的原核克隆表达和免疫学分析 被引量：1
2
作者 唐皓 徐嘉 +5 位作者 梁艳冰 陈志斌 李振宇 吴敬国 胡旭初 马中富 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2010年第5期448-452,共5页
目的 克隆表达大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1基因（SOCS-1）.方法 将大鼠SOCS-1全长编码基因的PCR产物,克隆到原核表达质粒pET-28a（＋）中,构建重组质粒pET-28a（＋）-ratSOCS-1.转化大肠埃希菌BL-21/DE3,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷... 目的 克隆表达大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1基因（SOCS-1）.方法 将大鼠SOCS-1全长编码基因的PCR产物,克隆到原核表达质粒pET-28a（＋）中,构建重组质粒pET-28a（＋）-ratSOCS-1.转化大肠埃希菌BL-21/DE3,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,应用镍离子金属螯合剂亲和层析柱从表达产物中纯化重组蛋白,通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对表达产物和重组蛋白进行鉴定.应用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,抗体滴度达到1：10000以上后进行末次免疫,2周后心脏取血、测定滴度,分离制备免疫血清.用红细胞裂解法制备大鼠外周血白细胞裂解全蛋白.将阴性血清（未用重组蛋白免疫的新西兰大白兔的血清）、免疫血清及兔抗组氨酸标签抗体转入各蛋白条带,用Western免疫印迹检测重组蛋白的免疫学活性.结果 PCR、双酶切及DNA测序分析均表明重组质粒pET-28a（＋）-ratSOCS-1构建成功.SDS-PAGE结果可见转化了重组质粒的大肠埃希菌全菌和经超声裂解后的菌体沉淀的样品均在相对分子质量约26 000处有一明显的蛋白条带,经亲和层析获得的纯化重组蛋白有特异的单一条带与上述条带一致,而在超声裂解后的菌体上清中相同位置却未见有蛋白表达条带.Western免疫印迹表明重组蛋白、大鼠外周血白细胞裂解蛋白中相对分子质量约24000的蛋白条带、兔抗组氨酸标签抗体均可被免疫血清识别,分别出现清晰的相对分子质量26000、24 000、26000的反应条带,表明其具有免疫活性.结论 SOCS-1基因可以在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得表达,其纯化重组蛋白具有良好的抗原性和免疫活性. 展开更多
关键词 细胞因子信号转导抑制因子-1 质粒 基因表达 色谱法 亲和 免疫活性
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