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植物基因工程表达载体的改进和优化策略 被引量:54
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作者 侯丙凯 夏光敏 陈正华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期492-497,共6页
外源基因在转基因植物中表达效率低一直是令相关研究者困扰的一个问题。转基因植物的生物安全性最近在全球范围内开始引起世人的担忧。本文简要介绍了近年来在植物表达载体构建方面所采用的一些新策略 ,这些策略有助于增强外源基因的表... 外源基因在转基因植物中表达效率低一直是令相关研究者困扰的一个问题。转基因植物的生物安全性最近在全球范围内开始引起世人的担忧。本文简要介绍了近年来在植物表达载体构建方面所采用的一些新策略 ,这些策略有助于增强外源基因的表达水平、提高生物工程体的安全性。 展开更多
关键词 植物 转基因 表达载体 优化 改进
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抗草甘膦抗虫植物表达载体的构建及其转基因烟草的分析 被引量:22
2
作者 谢龙旭 徐培林 +1 位作者 聂燕芳 田颖川 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期545-550,T001,共7页
构建了含草甘膦抗性突变基因 (aroAM12 )和人工合成重组Bt抗虫基因 (Bts1m)的植物表达载体pCM12_s1m。aroAM12基因的表达由CaMV35S启动子控制 ,Bts1m基因的表达由 2E_CaMV35S启动子和Ω因子控制。通过农杆菌介导 ,将aroAM12和Bts1m基因... 构建了含草甘膦抗性突变基因 (aroAM12 )和人工合成重组Bt抗虫基因 (Bts1m)的植物表达载体pCM12_s1m。aroAM12基因的表达由CaMV35S启动子控制 ,Bts1m基因的表达由 2E_CaMV35S启动子和Ω因子控制。通过农杆菌介导 ,将aroAM12和Bts1m基因转化到烟草中 ,转基因烟草通过在含草甘膦的MS培养基上筛选而获得。Southernblot分析表明所有经过草甘膦筛选出的转化植株都整合有aroAM12基因 ,约 70 %的转化植株同时整合有aroAM12和Bts1m基因。Northernblot、Immunodotblot分析进一步证明整合的两个基因在转录、翻译水平上均进行了表达 ,不同植株之间表达存在着差异。草甘膦抗性和虫试实验证明 。 展开更多
关键词 草甘膦 抗虫植物 表达载体 转基因烟草
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昆虫抗冻蛋白基因转化烟草的抗寒性 被引量:27
3
作者 王艳 邱立明 +4 位作者 谢文娟 黄薇 叶锋 张富春 马纪 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期397-402,共6页
将准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因MPAFP149亚克隆至pCAMBIA1302中,构建成单价植物表达载体pCAMBIA1302-MPAFP149,转化至农杆菌EHA105中,利用叶圆盘法转化烟草。通过PCR、PCR-Southern及RT-PCR检测表明,抗冻蛋白基因已整合至烟草基因组中,... 将准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因MPAFP149亚克隆至pCAMBIA1302中,构建成单价植物表达载体pCAMBIA1302-MPAFP149,转化至农杆菌EHA105中,利用叶圆盘法转化烟草。通过PCR、PCR-Southern及RT-PCR检测表明,抗冻蛋白基因已整合至烟草基因组中,并发生了转录。对T0代转基因烟草以-1℃处理48h,转基因烟草的相对电导率和表型明显优于野生型烟草。室温恢复试验验证,转基因烟草可存活并恢复生长,而野生型烟草受到了不可逆的低温冻害。研究证明,转化后携带昆虫抗冻蛋白基因的烟草比野生型烟草具有明显的抗寒能力,该结果为减轻冷敏感经济作物在春季遭受霜害提供了理论依据和应用基础。 展开更多
关键词 昆虫抗冻蛋白 植物表达载体 烟草 抗寒性
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小麦耐逆基因-TaLEA_2转化拟南芥的研究 被引量:20
4
作者 赵咏梅 杨建雄 +1 位作者 俞嘉宁 原江锋 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-6,共6页
研究小麦第3组LEA基因中T aLEA2对耐旱和耐盐性能的影响.将小麦第3组LEA基因T aLEA2连接在双元表达载体pB I121 C aM V 35S启动子下游,构建了能在植物中高效表达的载体pB I121-T aLEA2.通过农杆菌介导的真空渗透法,将其转入野生拟南芥中... 研究小麦第3组LEA基因中T aLEA2对耐旱和耐盐性能的影响.将小麦第3组LEA基因T aLEA2连接在双元表达载体pB I121 C aM V 35S启动子下游,构建了能在植物中高效表达的载体pB I121-T aLEA2.通过农杆菌介导的真空渗透法,将其转入野生拟南芥中,经抗性筛选及PCR验证,获得T0代转基因植株,并用不同浓度的PEG 4000和N aC l对转基因拟南芥的耐逆性进行检测.结果表明,这些转基因植株可明显改进拟南芥在10%PEG及0.8%N aC l培养基上的生长状态.在实验条件下,转基因拟南芥的耐旱性及耐盐性均有所提高,提示T aLEA2基因在植物水分调节方面有重要作用. 展开更多
关键词 TnLEA2基因 植物表达载体 转基因 耐逆性
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甘蓝型油菜BcNA1基因启动子在转基因烟草中对GUS基因表达的调控 被引量:5
5
作者 石东乔 周奕华 +3 位作者 万里红 刘桂珍 胡赞民 陈正华 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2001年第4期313-320,共8页
通过PCR扩增 ,从甘蓝型油菜 (Brassicanapus)品种H16 5中克隆了种子贮藏蛋白基因BcNA1的启动子 ,将此启动子与GUS基因相连构建了植物表达载体 ,利用农杆菌介导法将其导入烟草。对转基因烟草GUS基因检测分析表明 ,BcNA1基因启动子能特异... 通过PCR扩增 ,从甘蓝型油菜 (Brassicanapus)品种H16 5中克隆了种子贮藏蛋白基因BcNA1的启动子 ,将此启动子与GUS基因相连构建了植物表达载体 ,利用农杆菌介导法将其导入烟草。对转基因烟草GUS基因检测分析表明 ,BcNA1基因启动子能特异地启动GUS基因在种子中的表达 ;而且GUS酶的活性随着转基因烟草种子的发育而变化 。 展开更多
关键词 油菜 BcNA1启动子 植物表达载体 农杆菌介导 烟草
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种子特异性启动子(napinB promoter)分离、表达载体构建及转基因植物获得 被引量:13
6
作者 李丽 张景昱 +1 位作者 杜桂森 宋艳茹 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2001年第2期216-220,共5页
利用PCR技术从油菜BrassicanapusH1 65基因组DNA中分离了napinB启动子。序列分析表明 ,扩增片段 (nap30 0 )与文献报道的napinB启动子相应区域的同源性为 97%。将其与gus连接构建种子特异性表达载体 ,农杆菌介导转化烟草。PCR、Souther... 利用PCR技术从油菜BrassicanapusH1 65基因组DNA中分离了napinB启动子。序列分析表明 ,扩增片段 (nap30 0 )与文献报道的napinB启动子相应区域的同源性为 97%。将其与gus连接构建种子特异性表达载体 ,农杆菌介导转化烟草。PCR、Southern结果显示 ,nap30 0已整合到烟草基因组DNA中 ,获得了转基因植株。 展开更多
关键词 种子 特异性启动子 植物 表达载体 转基因植株
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细胞质雄性不育相关基因orf224的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:16
7
作者 王永飞 马三梅 +2 位作者 张鲁刚 王鸣 郑学勤 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第4期9-12,共4页
利用 PCR技术从油菜 Polim a不育系中扩增出细胞质雄性不育相关基因 orf 2 2 4 ,并将其克隆到p GEM- T Easy载体上得到重组质粒 p GEMORF。在此基础上 ,用限制性内切酶将 orf 2 2 4基因从质粒 p GEMORF上切下 ,连接在 p BI12 1质粒的 Ca... 利用 PCR技术从油菜 Polim a不育系中扩增出细胞质雄性不育相关基因 orf 2 2 4 ,并将其克隆到p GEM- T Easy载体上得到重组质粒 p GEMORF。在此基础上 ,用限制性内切酶将 orf 2 2 4基因从质粒 p GEMORF上切下 ,连接在 p BI12 1质粒的 Ca MV 35 S启动子和 NOS终止子之间。经 PCR和酶切鉴定 ,得到了 orf 2 2 4基因的植物表达载体 p 展开更多
关键词 细胞质 雄性不育 相关基因 orf224 克隆 植物 表达载体
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双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta的构建及转基因烟草的初步检测 被引量:16
8
作者 范媛媛 庞永珍 +3 位作者 吴为胜 姚剑虹 唐克轩 武天龙 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2004年第1期1-6,共6页
用限制性内切酶HindⅢ酶切分别含有CryIA(a)和CryIA(c)基因的pGEM-4zf质粒得到Ubiquitin(玉米泛素)基因启动子驱动的CryIA(a)和CryIA(c)基因表达盒,将它们分别插入到用HindⅢ开环的pCAMBIA3300(含编码抗除草剂草丁膦的bar基因)载体上形... 用限制性内切酶HindⅢ酶切分别含有CryIA(a)和CryIA(c)基因的pGEM-4zf质粒得到Ubiquitin(玉米泛素)基因启动子驱动的CryIA(a)和CryIA(c)基因表达盒,将它们分别插入到用HindⅢ开环的pCAMBIA3300(含编码抗除草剂草丁膦的bar基因)载体上形成中间载体p3300-bt。采用Pfu高保真DNA聚合酶用PCR的方法从质粒pBI121-pta上扩增得到含CaMV35S启动子和NOS终止子的pta基因表达盒,然后插入到用SmaⅠ切开的中间载体p3300-bt中,获得带有抗性基因的双价抗虫基因表达载体p3300-bt-pta。通过根癌农杆菌介导的叶盘法转化烟草品种百日红,获得一批抗除草剂的转基因烟草植株。 展开更多
关键词 转基因植株 表达载体 限制性内切酶 质粒 DNA聚合酶 PCR 双价抗虫基因 转基因技术
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转金属硫蛋白突变体αα的烟草具有较高的重金属抗性 被引量:12
9
作者 张晓钰 周慰 茹炳根 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第4期416-420,共5页
金属硫蛋白 (MT)有α、β两个结构域 ,其中α结构域优先结合Cd2 + 、Hg2 + ,以α结构域代替 β结构域而得到的αα突变体在大肠杆菌构建及表达后 ,体外实验证明其具有同天然MT相似的稳定性 ,但结合重金属的能力稍强于天然MT。将αα突... 金属硫蛋白 (MT)有α、β两个结构域 ,其中α结构域优先结合Cd2 + 、Hg2 + ,以α结构域代替 β结构域而得到的αα突变体在大肠杆菌构建及表达后 ,体外实验证明其具有同天然MT相似的稳定性 ,但结合重金属的能力稍强于天然MT。将αα突变体转入植物表达载体 ,以CaMV 35S为启动子 ,利用根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)介导的叶盘法转化烟草 (NicotianatabacumL .cv.NC89)。Southern、Western证明了外源基因在烟草内的整合与表达。重金属抗性结果证明 :转αα突变体烟草在含 30 0 μmol/LCdCl2 的培养基中可正常生长 ,转天然MT的烟草在含 2 0 0 μmol/LCdCl2 的培养基中生长 ,而野生型烟草只能在含 75 μmol/LCdCl2 的培养基中生长。Cd2 + 含量及分布实验证明 :转基因烟草同天然烟草相比 ,根部吸收了大部分的Cd2 + ,从而降低了叶部Cd2 + 含量。 展开更多
关键词 抗性 转基因 烟草 重金属 MT 土壤污染
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NtSKP1-GFP植物表达载体的构建及亚细胞定位 被引量:17
10
作者 张付云 陈士云 +2 位作者 赵小明 白雪芳 杜昱光 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期144-148,共5页
用PCR技术扩增NtSKP1基因的编码区,定向克隆至表达载体pCAMBIA1302上构建用于瞬时表达NtSKP1蛋白的重组质粒。重组质粒经PCR和测序鉴定后用冻融法转入农杆菌LBA4404,进而经农杆菌LBA4404介导转入烟草悬浮细胞,激光共聚焦显微镜观察确定... 用PCR技术扩增NtSKP1基因的编码区,定向克隆至表达载体pCAMBIA1302上构建用于瞬时表达NtSKP1蛋白的重组质粒。重组质粒经PCR和测序鉴定后用冻融法转入农杆菌LBA4404,进而经农杆菌LBA4404介导转入烟草悬浮细胞,激光共聚焦显微镜观察确定其亚细胞定位。测序结果表明,插入片段与预期序列完全一致,与载体形成了一个完整的基因表达盒;亚细胞定位结果表明NtSKP1蛋白在胞浆和核部位均有分布。 展开更多
关键词 NtSKP1基因 植物表达载体 亚细胞定位
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多基因植物表达载体的构建 被引量:13
11
作者 冯道荣 邱国华 +2 位作者 许新萍 刘秋云 李宝健 《西北植物学报》 CAS CSCD 2001年第4期609-614,共6页
将功能互补的抗真菌病基因或抗虫基因共同转化水稻植株 ,可望获得既抗病又抗虫的转基因水稻植株。马铃薯蛋白酶抑制剂 基因 Pin ,苏云金杆菌毒蛋白 Cry ( b)基因 B.t.,以及 PPT乙酰转移酶基因 bar构建在一个载体上。水稻碱性几丁质酶基... 将功能互补的抗真菌病基因或抗虫基因共同转化水稻植株 ,可望获得既抗病又抗虫的转基因水稻植株。马铃薯蛋白酶抑制剂 基因 Pin ,苏云金杆菌毒蛋白 Cry ( b)基因 B.t.,以及 PPT乙酰转移酶基因 bar构建在一个载体上。水稻碱性几丁质酶基因 RC2 4与大麦核糖体失活蛋白基因 B- RIP构建在另一个载体上。两载体共同转化水稻植株的工作正在进行之中。 展开更多
关键词 PinⅡ B.t RC24 B-RIP 植物 表达载体 转基因 多基因表达 抗病抗虫性
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双价抗虫基因植物表达载体的构建 被引量:16
12
作者 张志云 张虎生 +1 位作者 孙毅 梁爱华 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第8期1402-1408,共7页
将蝎毒基因BmKITS和几丁质酶基因chitinase2个抗虫基因采用不同的启动子ubi或35S,连到2个高效的植物表达载体pWM101和pBI101中,2个重组表达质粒分别经过限制性酶切分析和PCR鉴定,实验结果表明2个含有双价抗虫基因的植物重组表达质粒均... 将蝎毒基因BmKITS和几丁质酶基因chitinase2个抗虫基因采用不同的启动子ubi或35S,连到2个高效的植物表达载体pWM101和pBI101中,2个重组表达质粒分别经过限制性酶切分析和PCR鉴定,实验结果表明2个含有双价抗虫基因的植物重组表达质粒均已构建成功. 展开更多
关键词 蝎毒基因 几丁质酶基因 植物表达载体 PGR鉴定
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烟草β-1,3-葡聚糖酶cDNA克隆、大肠杆菌表达及植物表达载体的构建 被引量:5
13
作者 蓝海燕 田颖川 +3 位作者 张丽华 刘桂珍 王兰岚 陈正华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期412-418,共7页
用015%乙烯利诱导烟草幼苗后,提取叶片总RNA,并通过反转录及多聚酶链式反应(RTPCR)扩增出β1,3葡聚糖酶基因的cDNA。将其克隆至载体pBluescriptSK后,完成了此基因的全序列分析。测序结果... 用015%乙烯利诱导烟草幼苗后,提取叶片总RNA,并通过反转录及多聚酶链式反应(RTPCR)扩增出β1,3葡聚糖酶基因的cDNA。将其克隆至载体pBluescriptSK后,完成了此基因的全序列分析。测序结果表明:所克隆的cDNA除第1008位碱基与所报道的不同外,其它序列完全一致。为制备抗血清,构建了此基因的大肠杆菌表达载体,并在表达宿主菌BL21(DE3)plysS中得到表达,进行了Westernblot分析。同时,还构建了此基因的植物表达载体。 展开更多
关键词 烟草 葡聚糖酶 cDNA 大肠杆菌 植物表达 载体
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RNA干扰及其植物抗病毒应用 被引量:15
14
作者 张恭 刘立峰 马峙英 《中国农学通报》 CSCD 2007年第1期42-45,共4页
【研究目的】RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是分子生物学研究领域的一项新兴技术,在动植物的遗传改良、功能基因组、基因治疗等研究中广泛应用;【方法】它是指一些小的双链RNA分子介导的、序列特异的转录后基因沉默现象;【结果】本文就... 【研究目的】RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是分子生物学研究领域的一项新兴技术,在动植物的遗传改良、功能基因组、基因治疗等研究中广泛应用;【方法】它是指一些小的双链RNA分子介导的、序列特异的转录后基因沉默现象;【结果】本文就RNA干扰的作用机制、RNA干扰与植物病毒间的互作以及RNA干扰表达载体构建的一些研究进展进行了综述;【结论】随着RNAi研究的进一步深入,RNAi必将成为遗传育种工作者培育抗病毒植物的有力手段,促进植物抗病育种的发展。 展开更多
关键词 RNA干扰 植物抗病毒 表达载体
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抗旱基因HDCS1的植物表达载体构建 被引量:9
15
作者 郭卫东 饶景萍 +2 位作者 徐炎 李嘉瑞 郑学勤 《西北植物学报》 CAS CSCD 1999年第3期371-375,共5页
在克隆了二棱大麦第 3 组 L E A c D N A,抗旱基因 H D C S1 的基础上,将其连接于p B I121 的 Ca M V35 S 启动子和 N O S终止子之间,构建了 H D C S1 的植物表达载体 p B H C,并进... 在克隆了二棱大麦第 3 组 L E A c D N A,抗旱基因 H D C S1 的基础上,将其连接于p B I121 的 Ca M V35 S 启动子和 N O S终止子之间,构建了 H D C S1 的植物表达载体 p B H C,并进行了 P C R 和酶切鉴定。 展开更多
关键词 抗旱 LEA CDNA 植物表达载体
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中国葡萄属野生种抗白粉病抗逆基因植物表达载体的构建 被引量:8
16
作者 徐伟荣 王跃进 +2 位作者 王西平 郝炜 孙马 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期851-857,共7页
将质粒pSB166中包含ED35s启动子、Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303,构建了中间表达载体pWR306;以中国野生葡萄华东葡萄白河35-1cDNA为模板,通过PCR扩增出葡萄芪合成酶基因(STS)、醛脱氢酶基因(ALDH),与... 将质粒pSB166中包含ED35s启动子、Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303,构建了中间表达载体pWR306;以中国野生葡萄华东葡萄白河35-1cDNA为模板,通过PCR扩增出葡萄芪合成酶基因(STS)、醛脱氢酶基因(ALDH),与pGEM-TEasy克隆载体连接,获得重组质粒pGEM-TEasy-STS和pGEM-TEasy-ALDH;双酶切重组质粒及表达载体pWR306,将STS、ALDH基因片段与线性表达载体pWR306进行定向连接,构建了葡萄芪合成酶基因及醛脱氢酶基因的植物表达载体pWR-STS、pWR-ALDH,并用改进冻融法导入农杆菌GV3101。 展开更多
关键词 中国野生葡萄 葡萄芪合成酶基因 葡萄醛脱氢酶基因 植物表达载体
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ubi启动子驱动的花生芪合酶基因表达载体的构建及玉米遗传转化初报 被引量:11
17
作者 郭志鸿 王汉宁 +3 位作者 陶玲 张金文 白斌 陈正华 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第2期117-123,共7页
研究克隆了玉米的ubi启动子,以pBI 121为基本载体,构建了含有ubi启动子的中间载体pBI UB及ubi启动子驱动的GFP基因的植物表达载体pBI UG;采用基因枪法将载体pBI UG转入洋葱表皮细胞对启动子活性进行检测,结果表明GFP基因在洋葱表皮细胞... 研究克隆了玉米的ubi启动子,以pBI 121为基本载体,构建了含有ubi启动子的中间载体pBI UB及ubi启动子驱动的GFP基因的植物表达载体pBI UG;采用基因枪法将载体pBI UG转入洋葱表皮细胞对启动子活性进行检测,结果表明GFP基因在洋葱表皮细胞中得到了表达。本实验同时采用RT-PCR技术克隆了花生的芪合酶基因(Res),该基因编码的蛋白质的氨基酸序列与已公布的芪合酶的氨基酸序列的同源性为99.49 %,并且164位的活性中心Cys没有发生突变;将该Res基因插入载体pBI UB构建了ubi启动子控制下的花生芪合酶基因植物表达载体pBI UA,并对玉米进行了遗传转化,得到了转化苗。 展开更多
关键词 花生芪合酶基因 玉米ubi启动子 植物表达载体 玉米 遗传转化
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DREB基因双T-DNA植物表达载体的构建及验证 被引量:10
18
作者 韩兆雪 曹墨菊 +1 位作者 朱祯 荣廷昭 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第1期7-12,共6页
W 34基因经 pGEM T EASY载体 ,克隆到 pBDREB载体EcoRI位点 ,得到在Amp平板上生长的转化子 pBW 34-DREB质粒 ;质粒pBW 34-DREB、pSPROK、pBlueks分别经PstI/KpnI、KpnI/EcoRI、PstI/EcoRI双酶切 ,三片段连接构建成中间表达载体 pBWD Tn... W 34基因经 pGEM T EASY载体 ,克隆到 pBDREB载体EcoRI位点 ,得到在Amp平板上生长的转化子 pBW 34-DREB质粒 ;质粒pBW 34-DREB、pSPROK、pBlueks分别经PstI/KpnI、KpnI/EcoRI、PstI/EcoRI双酶切 ,三片段连接构建成中间表达载体 pBWD Tnos;再用SmaI/EcoRV双酶切 pBWD Tnos,将回收的DREB基因的完整的表达结构元插入到经SmaI酶切的质粒载体 pCDMAR Hyg中 ,构建成双T DNA植物表达载体 pCDMAR pWDT Hyg ,大小为 13 5 9kb ,经酶切鉴定 ,证明构建的载体与预期设计的一致。将此双T载体用农杆菌介导法转化玉米胚性愈伤组织 ,期望得到无选择标记的安全的转基因植物。 展开更多
关键词 DREB基因 双T-DNA 植物表达载体 无选择标记 中间载体
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人白介素-12植物表达载体的构建 被引量:14
19
作者 邵敏 周鹤峰 葛正龙 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第10期868-870,共3页
目的构建人白介素-12(hIL-12)基因的植物表达载体.方法采用PCR技术从质粒pCA13-hIL-12中扩增hIL-12基因,SmaI,SacI分别酶切hIL-12基因和植物表达载体pBI121,回收,T4DNA连接酶连接得到重组质粒pBI121-hIL-12,双酶切和DNA测序鉴定后,通过... 目的构建人白介素-12(hIL-12)基因的植物表达载体.方法采用PCR技术从质粒pCA13-hIL-12中扩增hIL-12基因,SmaI,SacI分别酶切hIL-12基因和植物表达载体pBI121,回收,T4DNA连接酶连接得到重组质粒pBI121-hIL-12,双酶切和DNA测序鉴定后,通过三亲杂交法将表达载体pBI121-hIL-12分别导入根癌农杆菌EHA105和GV3101,用PCR法进行鉴定.结果双酶切及DNA序列测定证实hIL-12已插入到表达载体pBI121中,PCR扩增表明构建的重组表达载体pBI121-hIL-12成功转入根癌农杆菌EHA105和GV3101中.结论成功构建了植物表达载体pBI121-hIL-12,为进一步利用转基因植物生产hIL-12奠定了实验基础. 展开更多
关键词 人白细胞介素-12 植物表达载体 载体构建 根瘤菌属
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EuFPS基因表达载体构建及对杜仲遗传转化的研究 被引量:14
20
作者 赵丹 赵德刚 李岩 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期27-33,共7页
本实验用EcoRI和BamHI双酶切植物表达载体pSH737和含有目的基因的pUC—FPS,定向连接得到重组质粒pSH-FPS,将其导入农杆菌EHA105。采用农杆菌介导法对杜仲进行遗传转化,研究了卡那霉素(kanamycin,Kin)浓度、预培养时间、菌液浓度... 本实验用EcoRI和BamHI双酶切植物表达载体pSH737和含有目的基因的pUC—FPS,定向连接得到重组质粒pSH-FPS,将其导入农杆菌EHA105。采用农杆菌介导法对杜仲进行遗传转化,研究了卡那霉素(kanamycin,Kin)浓度、预培养时间、菌液浓度及侵染时间、乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)浓度、共培养时间等对杜仲遗传转化效率的影响。结果表明,选择无菌苗苗龄15d的杜仲下胚轴,卡那霉素浓度50mg/L,农杆菌浓度OD600值0.3~0.6,侵染时间8min,侵染时菌体重悬液中添加50μmol/L乙酰丁香酮,共培养时间3d,抗性芽的获得率最高。对再生植株进行GUS检测发现有45%的植株呈阳性。 展开更多
关键词 杜仲 FPS基因 植物表达载体 遗传转化
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