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基于PiggyBac转座系统的低溢漏诱导型Tet-On过表达体系的建立及应用
1
作者 张柏权 李中瀚 殷旖珂 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期165-172,共8页
为避免诱导基因稳定表达的Tet-On诱导表达系统溢漏表达,实现简便且高效的外源基因稳定诱导表达,本研究拟在Tet-On调控的转录水平基础上,将基于稳定配体Shield-1的不稳定结构域FK506结合蛋白引入目的基因的N端,从蛋白水平控制其本底表达... 为避免诱导基因稳定表达的Tet-On诱导表达系统溢漏表达,实现简便且高效的外源基因稳定诱导表达,本研究拟在Tet-On调控的转录水平基础上,将基于稳定配体Shield-1的不稳定结构域FK506结合蛋白引入目的基因的N端,从蛋白水平控制其本底表达水平.为验证该系统的效果,本研究以荧光蛋白TdTomato为报告基因,经流式分析结果证明优化后的体系较原体系的溢漏表达在蛋白水平上降低7倍左右.将该系统应用于基于小鼠胚胎干细胞的体外牙向分化模型,在诱导因子Dox和稳定配体Shield-1的协同作用下,诱导表达牙齿发育相关转录因子Hand2提高了牙向分化诱导的完成度. 展开更多
关键词 piggybac转座系统 Tet-on诱导型过表达系统 溢漏表达 不稳定结构域 稳定配体Shield-1
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利用PiggyBac转座系统构建稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系 被引量：4
2
作者 胡跃 孙英杰 +5 位作者 王晓旭 仇旭升 宋翠萍 谭磊 胡桂学 丁铲 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第3期53-60,共8页
维甲酸诱导基因-I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年发现的一种细胞内模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒RNA,进而发挥抗病毒效应。RIG-I在进化中相对保守,但已有报道和我们的前期研究显示:家禽中鸭和鹅体内均有R... 维甲酸诱导基因-I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年发现的一种细胞内模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒RNA,进而发挥抗病毒效应。RIG-I在进化中相对保守,但已有报道和我们的前期研究显示:家禽中鸭和鹅体内均有RIG-I受体,但鸡却缺乏RIG-I受体。为了研究这种天然缺失对鸡是否有不利影响,本研究利用PiggyBac转座系统将鹅源RIG-I转染入鸡胚成纤维细胞系DF-1,两次亚克隆后获得单个克隆,以荧光、RT-PCR及Western blot进行鉴定,最终获得稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系,为进一步研究鸡的先天性免疫机制和鹅RIG-I的功能打下基础。 展开更多
关键词 鹅维甲酸诱导基因-I 鸡胚成纤维细胞系DF-1 piggybac转座系统
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载体介导无遗传物质整合的诱导性多能干细胞的生成 被引量：1
3
作者 栗楠 郭红梅 +6 位作者 王明玉 令文慧 邱小燕 李跃民 刘旭蕾 邓雅楠 肖雄 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第11期1486-1496,共11页
诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)因其具有类似胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)的"自我更新"和分化潜能而成为生物学和医学等领域的研究热点之一。但是,目前i PSCs的生成主要以逆转录病毒或... 诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)因其具有类似胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)的"自我更新"和分化潜能而成为生物学和医学等领域的研究热点之一。但是,目前i PSCs的生成主要以逆转录病毒或慢病毒为载体,而病毒载体和外源性重编程因子在受体细胞基因组中的整合,使得i PSCs存在致瘤性的安全隐患。同时,采用无载体介导的方法如重组蛋白、小分子物质的重编程效率较低。为此,目前已成功开发一些载体和方法可以介导无外源性遗传物质整合的i PSCs的生成。该文就整合后可删除的基因表达载体(Cre/lox P重组系统、piggy Bac转座子/转座酶系统)和非整合基因表达载体(ori P/EBNA1附加型载体、微环DNA载体)在i PSCs生成上的应用研究作一综述,以期为i PSCs的临床安全应用提供理论和技术参考。 展开更多
关键词 诱导性多能干细胞(iPSCs) CRE/LOXP重组系统 piggybac转座系统 oriP/EBNA1附加型载体 微环DNA载体
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基于PiggyBac转座系统构建稳定表达ABEmax基因的HEK293T细胞系
4
作者 张璐 安莉莎 +1 位作者 金孝华 马旭 《中国计划生育学杂志》 2022年第7期1472-1475,共4页
目的:使用PiggyBac(PB)转座系统在HEK293T细胞中敲入腺嘌呤碱基编辑工具ABEmax基因,构建稳定表达ABEmax基因的工具细胞系.方法:根据PB转座原理,将ABEmax基因和抗生素筛选基因以同源重组的方法插入到PB质粒内,构建pPB-ABEmax真核重组表... 目的:使用PiggyBac(PB)转座系统在HEK293T细胞中敲入腺嘌呤碱基编辑工具ABEmax基因,构建稳定表达ABEmax基因的工具细胞系.方法:根据PB转座原理,将ABEmax基因和抗生素筛选基因以同源重组的方法插入到PB质粒内,构建pPB-ABEmax真核重组表达质粒.将重组质粒和辅助质粒共同转染至HEK293T细胞中,利用嘌呤霉素抗性筛选细胞,流式细胞仪分选单克隆细胞.单细胞扩增培养后,利用PCR鉴定ABEmax基因的插入水平,RT-qPCR鉴定ABEmax的表达水平以及利用sgRNA测试工具细胞的编辑水平.结果:成功构建pPB-ABEmax真核重组表达质粒,筛选出特异性插入ABEmax基因的HEK293T细胞系,HEK293T-ABEmax的基因编辑效率与HEK293T细胞转染Test-sgRNA与ABEmax的对照组无统计学差别(P>0.05).结论:利用PiggyBac基因编辑技术成功构建并获得了腺嘌呤碱基编辑工具ABEmax基因稳定表达细胞系. 展开更多
关键词 piggybac转座系统 碱基编辑 ABEmax 细胞系
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稳定表达猪IRF7基因的PK-15细胞系建立及其抗病毒效果评价
5
作者 赵永祥 李永涛 +3 位作者 赵军 陈陆 常洪涛 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1991-1996,共6页
为探讨猪IRF7基因对某些猪源病毒在PK-15细胞系中增值的影响,利用Piggy Bac真核转座子系统将猪源IRF7基因转染入PK-15细胞中,通过嘌呤霉素和绿色荧光进行双重筛选获得阳性转化细胞,再经克隆纯化得到单个阳性细胞克隆株。通过观察细胞荧... 为探讨猪IRF7基因对某些猪源病毒在PK-15细胞系中增值的影响,利用Piggy Bac真核转座子系统将猪源IRF7基因转染入PK-15细胞中,通过嘌呤霉素和绿色荧光进行双重筛选获得阳性转化细胞,再经克隆纯化得到单个阳性细胞克隆株。通过观察细胞荧光和荧光定量PCR鉴定,最终获得了稳定表达IRF7基因的PK-15细胞系。在Poly I:C诱导下,该细胞系能够显著上调IFN-β的表达。初步研究了该细胞系对病毒复制的影响,结果表明过表达IRF-7基因能够显著抑制猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪水泡性口炎病毒(VSV)的复制。本研究为进一步探索猪IRF7基因的功能与作用机制提供有效工具。 展开更多
关键词 IRF-7基因 piggybac转座子系统 PK一15细胞系 抗病毒
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