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稻瘟病新抗性基因Pi39候选基因CRISPR/Cas9敲除载体的构建
被引量：
3
1
作者
刘早利
陈亚红
+1 位作者
王春台
刘新琼
《中国农学通报》
2016年第6期91-95,共5页
Pi39是位于水稻第12染色体上的稻瘟病新抗性基因,为了明确其功能,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建候选基因的敲除载体。通过对候选基因序列分析,将合成的靶位点序列插入入门载体p ENTR-sg RNA,再与表达载体Cas9发生重组。本研究首先在候...
Pi39是位于水稻第12染色体上的稻瘟病新抗性基因,为了明确其功能,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建候选基因的敲除载体。通过对候选基因序列分析,将合成的靶位点序列插入入门载体p ENTR-sg RNA,再与表达载体Cas9发生重组。本研究首先在候选基因的第一个外显子区域找到了2个带有PAM序列的靶位点,将2个目的小片段依次克隆到p ENTR-sg RNA载体上。通过菌落PCR检测及测序,结果表明目的小片段插入位置正确。将入门载体与表达载体进行重组反应后,阳性克隆经菌落PCR和质粒DNA酶切鉴定并测序,结果表明重组载体构建成功。本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除载体操作简单,耗时短,为进一步开展Pi39候选基因的功能研究奠定了基础。
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关键词
水稻
稻瘟病抗性基因
pi
39
CRISPR/Cas9系统
载体构建
下载PDF
职称材料
稻瘟病新抗性基因Pi39候选基因Pi39E长片段载体的构建
2
作者
陈佳莹
宋斯敏
+1 位作者
王春台
刘新琼
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期2882-2885,共4页
稻瘟病新抗性基因Pi39来源于粳稻品种Q15,定位于水稻第12号染色体,前期研究发现候选基因区域预测有12个抗病相关候选基因,其中候选基因Pi39E最大,克隆的难度较大。为了构建Pi39E长片段载体,本实验通过加大反应底物的浓度,目的片段的质...
稻瘟病新抗性基因Pi39来源于粳稻品种Q15,定位于水稻第12号染色体,前期研究发现候选基因区域预测有12个抗病相关候选基因,其中候选基因Pi39E最大,克隆的难度较大。为了构建Pi39E长片段载体,本实验通过加大反应底物的浓度,目的片段的质量浓度为124 ng/μL,质粒载体的质量浓度为158 ng/μL,目的片断与质粒DNA按1.15∶1的摩尔浓度比进行连接反应,在9μL的总体系中加入1μL的PEG4000,同时采用电击大肠杆菌DH5α转化方法优化实验方案,成功构建该载体。本结果对新抗性基因Pi39精细定位及其功能的研究具有重要意义。
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关键词
稻瘟病抗性基因
pi
39
候选基因
pi
39
E
载体构建
原文传递
题名
稻瘟病新抗性基因Pi39候选基因CRISPR/Cas9敲除载体的构建
被引量：
3
1
作者
刘早利
陈亚红
王春台
刘新琼
机构
中南民族大学生命科学学院/武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室/生物技术国家民委重点实验室
出处
《中国农学通报》
2016年第6期91-95,共5页
基金
转基因专项"稻瘟病抗性基因的克隆及其应用"(2014ZX0800904B)
文摘
Pi39是位于水稻第12染色体上的稻瘟病新抗性基因,为了明确其功能,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建候选基因的敲除载体。通过对候选基因序列分析,将合成的靶位点序列插入入门载体p ENTR-sg RNA,再与表达载体Cas9发生重组。本研究首先在候选基因的第一个外显子区域找到了2个带有PAM序列的靶位点,将2个目的小片段依次克隆到p ENTR-sg RNA载体上。通过菌落PCR检测及测序,结果表明目的小片段插入位置正确。将入门载体与表达载体进行重组反应后,阳性克隆经菌落PCR和质粒DNA酶切鉴定并测序,结果表明重组载体构建成功。本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除载体操作简单,耗时短,为进一步开展Pi39候选基因的功能研究奠定了基础。
关键词
水稻
稻瘟病抗性基因
pi
39
CRISPR/Cas9系统
载体构建
Keywords
rice
rice blast resistance gene
pi
39
CRISPR/Cas9 system
vector construction
分类号
S511 [农业科学—作物学]
下载PDF
职称材料
题名
稻瘟病新抗性基因Pi39候选基因Pi39E长片段载体的构建
2
作者
陈佳莹
宋斯敏
王春台
刘新琼
机构
中南民族大学生命科学学院武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室生物技术国家民委重点实验室
出处
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期2882-2885,共4页
基金
国家自然科学基金面上项目(3137306)
中南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金(CZP17052)共同资助
文摘
稻瘟病新抗性基因Pi39来源于粳稻品种Q15,定位于水稻第12号染色体,前期研究发现候选基因区域预测有12个抗病相关候选基因,其中候选基因Pi39E最大,克隆的难度较大。为了构建Pi39E长片段载体,本实验通过加大反应底物的浓度,目的片段的质量浓度为124 ng/μL,质粒载体的质量浓度为158 ng/μL,目的片断与质粒DNA按1.15∶1的摩尔浓度比进行连接反应,在9μL的总体系中加入1μL的PEG4000,同时采用电击大肠杆菌DH5α转化方法优化实验方案,成功构建该载体。本结果对新抗性基因Pi39精细定位及其功能的研究具有重要意义。
关键词
稻瘟病抗性基因
pi
39
候选基因
pi
39
E
载体构建
Keywords
Rice blast resistance gene
pi
39
Candidate gene
pi
39
E
Vector construction
分类号
S435.111.41 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
Q943.2 [农业科学—植物保护]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稻瘟病新抗性基因Pi39候选基因CRISPR/Cas9敲除载体的构建
刘早利
陈亚红
王春台
刘新琼
《中国农学通报》
2016
3
下载PDF
职称材料
2
稻瘟病新抗性基因Pi39候选基因Pi39E长片段载体的构建
陈佳莹
宋斯敏
王春台
刘新琼
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
原文传递
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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