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大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统改造对产L-色氨酸的影响 被引量:11
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作者 吴涛 赵津津 毛贤军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1877-1882,共6页
L-色氨酸是芳香族氨基酸的一种,被广泛应用于医药、食品和饲料等领域。大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(PTS系统)在葡萄糖转运和磷酸化过程中起重要作用,是糖代谢基因表达调控的核心。利用Red同源重组系统,构建包含两类典型... L-色氨酸是芳香族氨基酸的一种,被广泛应用于医药、食品和饲料等领域。大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(PTS系统)在葡萄糖转运和磷酸化过程中起重要作用,是糖代谢基因表达调控的核心。利用Red同源重组系统,构建包含两类典型PTS系统突变(ptsHIcrr^-glf-glk^+和ptsG^-)的L-色氨酸生产菌,并对相关菌株进行补料分批发酵研究。结果表明,不同类型PTS系统突变对菌体生长、L-色氨酸产量、糖酸转化率及副产物生成均有较大影响。与出发菌相比,ptsHIcrr^-glf-glk^+突变株最高OD_(600)达到125,提高47.0%,产酸38.5 g/L,提高25.9%,糖酸转化率16.7%,提高26.5%,乙酸生成略有增加;ptsG^-突变株最高OD_(600)达到100,提高17.6%,产酸33.4 g/L,提高9.4%,糖酸转化率15.5%,提高17.4%,乙酸生成略有减少。对葡萄糖转运系统的进一步研究将为大肠杆菌合成L-色氨酸效率的提升提供帮助。 展开更多
关键词 大肠杆菌 L-色氨酸 PTS系统 补料分批发酵
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Analyzing the Prebiotic Potential of Glucosamine for Targeting the Gut Microbiome Health
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作者 Pranav Pancham Divya Jindal +4 位作者 Archita Gupta Deepshikha Yadav Shriya Agarwal Saurabh Jha Manisha Singh 《Food and Nutrition Sciences》 CAS 2023年第2期119-134,共16页
Recognizing the composition and modulation of the microbiome, a viable therapeutic tool for multi-targeted therapy is a new strategy that has recently been explored. Glucosamine (GS) is being studied for its prebiotic... Recognizing the composition and modulation of the microbiome, a viable therapeutic tool for multi-targeted therapy is a new strategy that has recently been explored. Glucosamine (GS) is being studied for its prebiotic potential in addition to being the most abundant and naturally occurring amino monosaccharide. The current study focuses on glucosamine’s prebiotic potential by assessing the stability of various GS concentrations (1% - 5%) in the gastrointestinal tract (GIT) and its ability to be fermented by the gut microbiota. The results showed that GS stimulated the most growth in L. acidophilus even after a longer incubation time than B. bifidum and L. acidophilus growth was concentration-dependent, with maximum growth at 3% with a simultaneous decrease in pH (5.6 - 1.7). The decrease in GS concentration with time also represented the growth of bacterial species, demonstrating the species’ utilization of GS. Furthermore, at 3%, GS also represented the prebiotic index of 1.9. In addition, the concentration of GS in various simulated GIT fluids was estimated in both fast and fed conditions to examine GS stability at various levels in the gut. The results showed that GS remained unaffected and non-digestible in all of the simulated GIT fluids (salivary, gastric, intestinal, and colonic), but there was a slight decrease in GS concentration (2.8%) in the fasted state of gastric fluid due to low pH levels (1.6). As a result, the findings are conclusive and suggest that GS possesses prebiotic properties. 展开更多
关键词 MICROBIOME Enteric Nervous system (ENS) Prebiotic Index Hexosamine Biosynthetic Pathway (HBP) Vagal Afferents phosphotransferase system
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整合型1,2,4-丁三醇重组菌的构建及共底物发酵 被引量:3
3
作者 祖金珊 徐世文 +2 位作者 陆信曜 宗红 诸葛斌 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期966-971,共6页
1,2,4-丁三醇(BT)是重要的非天然化学品.为构建整合型BT合成菌株,实现木糖、葡萄糖共底物发酵,通过Red系统将基因kivD、xdh整合至Escherichia coli基因组的xylAB、ptsHI、ptsG、crr位点,并尝试利用廉价的乳糖替代IPTG诱导外源基因表达.... 1,2,4-丁三醇(BT)是重要的非天然化学品.为构建整合型BT合成菌株,实现木糖、葡萄糖共底物发酵,通过Red系统将基因kivD、xdh整合至Escherichia coli基因组的xylAB、ptsHI、ptsG、crr位点,并尝试利用廉价的乳糖替代IPTG诱导外源基因表达.结果表明,外源基因整合至xylAB后,生物量降低28%,重组菌Escherichia coli W021能够代谢木糖合成BT(0.7 g/L).添加葡萄糖为共底物后生物量提高36%,但碳分解代谢抑制作用限制了木糖的代谢,BT产量降低14%.进一步整合代谢基因至不同的磷酸转移酶系统(PTS)位点,其中整合至ptsHI基因后BT产量最高,达到2.8 g/L.优化葡萄糖、木糖浓度后,BT产量提高到3.6 g/L,进一步优化乳糖替代IPTG后BT产量为1.9 g/L.最后经发酵罐优化,BT产量提高到3.9 g/L,转化率为0.3 mol/mol.本研究构建整合型菌株在廉价乳糖诱导下共底物发酵合成BT,为后续放大研究提供了借鉴. 展开更多
关键词 1 2 4-丁三醇 大肠杆菌 磷酸转移酶系统 混糖发酵 整合表达
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变异链球菌磷酸转移酶系统ptxA、ptxB基因对细菌生长能力的影响 被引量:2
4
作者 吴昕彧 陈晓丹 +2 位作者 赵望泓 侯晋 陈璇 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期302-306,共5页
目的研究变异链球菌(S.mutans)磷酸转移酶系统(PTS)中抗坏血酸家族ptxA、ptxB基因对细菌生长能力的影响。方法构建ptxA、ptxB和ptxAB双重基因缺陷菌株以及ptxAB功能补偿菌株。在仅以抗坏血酸作为唯一碳源时,使用实时荧光定量聚合酶链反... 目的研究变异链球菌(S.mutans)磷酸转移酶系统(PTS)中抗坏血酸家族ptxA、ptxB基因对细菌生长能力的影响。方法构建ptxA、ptxB和ptxAB双重基因缺陷菌株以及ptxAB功能补偿菌株。在仅以抗坏血酸作为唯一碳源时,使用实时荧光定量聚合酶链反应检测野生株中ptxA、ptxB基因的表达情况。连续监测野生株、缺陷株和补偿株的菌液OD600值,比较其生长能力。结果经过聚合酶链反应和测序鉴定,结果证明缺陷株和补偿株构建成功。在以抗坏血酸作为唯一碳源的培养基中,野生株ptxA、ptxB基因的表达量均明显增高(P<0.01)。缺陷株的生长能力较野生株有所下降,但是在补偿株中可以得到补偿。结论 ptxA、ptxB基因与S.mutans对抗坏血酸的吸收利用密切相关,缺陷株和补偿株的构建为进一步研究目的基因在S.mutans抗坏血酸代谢中的作用机制提供了理论基础。 展开更多
关键词 变异链球菌 磷酸转移酶系统 ptxA基因 ptxB基因 抗坏血酸
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大肠杆菌碳分解代谢抑制及混合C源共利用的研究进展 被引量:2
5
作者 张旭 李宜奎 祁庆生 《生物加工过程》 CAS CSCD 2014年第1期109-116,共8页
总结了大肠杆菌中C源分解代谢(carbon catabolite repression,CCR)现象的原理及特点,综述并分析了如何通过对宿主菌进行基因工程改造以解除碳代谢抑制,以实现大肠杆菌利用多种C源。
关键词 磷酸转移酶系统 碳分解代谢抑制 混合C源 大肠杆菌
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解淀粉芽孢杆菌ptsGHI基因的敲除及缺陷株生长特性 被引量:2
6
作者 杨慧林 王坤 +3 位作者 廖瑜玲 王斌 林影 潘力 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第8期95-100,共6页
在解淀粉芽孢杆菌磷酸转移酶系统中,葡萄糖主要是由ptsGHI操纵子编码的酶EI、HPr、EIIGlc转运入细胞.文中运用PCR技术,扩增出ptsG和ptsHI基因上下游的DNA片段,共约1kbp,用融合PCR连接上下游片段后,再连接到温敏型质粒pKS2上,然后电转化... 在解淀粉芽孢杆菌磷酸转移酶系统中,葡萄糖主要是由ptsGHI操纵子编码的酶EI、HPr、EIIGlc转运入细胞.文中运用PCR技术,扩增出ptsG和ptsHI基因上下游的DNA片段,共约1kbp,用融合PCR连接上下游片段后,再连接到温敏型质粒pKS2上,然后电转化到解淀粉芽孢杆菌XH7中,最终构建了ptsG和ptsHI基因缺陷株.实验结果显示:在LB培养基中,ptsG及ptsHI基因缺陷株的生长状况与野生型菌株无明显差异;在含葡萄糖的LB培养基中,ptsG基因缺陷株的最高菌密度比野生型菌株提高了28%,且平稳期比野生型菌株要长,而ptsHI基因缺陷株的最高菌密度比野生型菌株降低了约32%,与其在LB中的生长状况基本一致;ptsG和ptsHI缺陷株及野生型菌株经鸟苷发酵实验后,ptsG基因缺陷株的鸟苷产量比野生型菌株提高了约24%,ptsHI基因缺陷株的鸟苷产量则比野生型菌株降低了约82%.以上结果表明:解淀粉芽孢杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力和产物合成能力. 展开更多
关键词 解淀粉芽孢杆菌 磷酸转运系统 基因敲除 代谢工程
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肺炎克雷伯菌CRP调控子对细菌毒力影响与机制研究 被引量:1
7
作者 范金明 欧琴 +2 位作者 林迪斯 徐丽 李蓓 《湖北医药学院学报》 CAS 2017年第1期10-14,共5页
目的:了解肺炎克雷伯菌调控因子CRP对细菌毒力的影响及其对毒力相关因子磷酸转移酶系统的作用及其机制。方法:构建肺炎克雷伯菌CRP调控因子的基因缺失突变株与回补株,小鼠毒力试验检测CRP对细菌LD50的影响及小鼠生存率的影响,qRT-PCR与l... 目的:了解肺炎克雷伯菌调控因子CRP对细菌毒力的影响及其对毒力相关因子磷酸转移酶系统的作用及其机制。方法:构建肺炎克雷伯菌CRP调控因子的基因缺失突变株与回补株,小鼠毒力试验检测CRP对细菌LD50的影响及小鼠生存率的影响,qRT-PCR与lac Z报告基因检测CRP对果糖磷酸转移酶系统EIIC蛋白frwC基因的影响并通过凝胶阻滞试验(EMSA试验)检测CRP调控frwC基因的机制。结果:CRP基因敲除菌株的小鼠毒力明显下降,野生株、CRP基因缺失株及回补株的LD50分别为<100,3.2×10~5和4.5×10~4CFUs。qRT-PCR与lac Z报告基因发现CRP基因敲除后,果糖磷酸转移酶系统EIIC蛋白frwC基因表达量明显下降,EMSA试验发现CRP蛋白能够结合在frwC启动子区。结论:肺炎克雷伯菌CRP调控子与细菌毒力密切相关,并且能够直接正调控frwC基因的表达。除影响细菌荚膜、菌毛、生物膜的形成而影响细菌毒力外,CRP调控子可能通过影响磷酸转移酶系统而影响细菌毒力。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 crp基因 毒力 磷酸转移酶系统
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变形链球菌gcp基因敲除菌株表达谱基因芯片 被引量:1
8
作者 谢苗苗 胡晓聪 +1 位作者 吴补领 闫文娟 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第33期5988-5994,共7页
背景:前期研究中经证实变形链球菌内部存在单磷酸鸟苷环二聚体信号通路,构建了变形链球菌 gcp 基因敲除菌株。目的:比较变形链球菌野生菌种和 gcp 基因突变菌株基因表达的差异情况,筛选与生物膜相关的基因,进入后续研究。方法:提取两种... 背景:前期研究中经证实变形链球菌内部存在单磷酸鸟苷环二聚体信号通路,构建了变形链球菌 gcp 基因敲除菌株。目的:比较变形链球菌野生菌种和 gcp 基因突变菌株基因表达的差异情况,筛选与生物膜相关的基因,进入后续研究。方法:提取两种细菌的总 RNA,反转录后分别用 cy3 和 cy5 染色。与基因芯片杂交后,扫描结果,进行数据分析,获取差异基因信息,对筛选的基因进行 Real-Time PCR 验证。结果与结论:差异基因主要与糖代谢、生物膜形成有关,选择了 2 个基因进行验证,PCR 结果与芯片结果相符合。变形链球菌 gcp 基因敲除后,突变菌株 ahpC 基因表达上调,磷酸转移酶系统基因表达下调,说明这 2个基因与 c-di-GMP 信号通路的下游途径相关。 展开更多
关键词 组织构建 组织构建细胞学实验 变形链球菌 基因芯片 C-DI-GMP 信号通路 AHPC 磷酸转移酶系统 国家自然科学基金
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细菌中糖转运相关sRNA 的生理调控功能 被引量:1
9
作者 修宝林 郭睿 葛菁萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1052-1056,共5页
当细菌面对较高浓度的葡萄糖时,随着葡萄糖摄入,常会导致菌体内部葡糖-6-磷酸的大量累积。在磷酸糖浓度达到一定阈值时,就会形成一种毒性胁迫从而抑制菌体的代谢与生长。许多细菌则会通过一种小RNA SgrS (sugar transport-related sRNA... 当细菌面对较高浓度的葡萄糖时,随着葡萄糖摄入,常会导致菌体内部葡糖-6-磷酸的大量累积。在磷酸糖浓度达到一定阈值时,就会形成一种毒性胁迫从而抑制菌体的代谢与生长。许多细菌则会通过一种小RNA SgrS (sugar transport-related sRNA)的转录后调控作用,来解除这种糖胁迫抑制作用。SgrS在分子伴侣Hfq的协助下,与相应靶mRNA通过碱基互补配对方式结合,对ptsG mRNA和manXYZ mRNA进行负调控以减少糖类摄入,并对yigL mRNA进行正调控以增大糖类排出,从而提高细胞对糖胁迫的耐受性。与一般sRNA不同,SgrS作为一种双功能sRNA,除具有转录后调控功能外,还能够翻译出蛋白质SgrT。SgrS广泛存在于肠杆菌中,但不同菌属中SgrS的差异极大。本文主要对SgrS在细菌中的功能、分布及其差异进行综述。 展开更多
关键词 小RNA 糖转运相关sRNA 磷酸转移酶系统 转录后调控
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不同生物土壤结皮微生物组跨膜转运蛋白基因多样性及差异
10
作者 张肖冲 靳新影 +5 位作者 王静 陈韵 金多 马志山 刘建利 李靖宇 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1388-1403,共16页
【背景】跨膜转运蛋白在微生物转运各种物质的过程中具有重要作用。【目的】通过比较原核微生物组磷酸转移酶(phosphotransferasesystem,PTS)系统和腺苷三磷酸结合盒(ATP-binding cassette,ABC)转运蛋白编码基因在两种不同生物土壤结皮... 【背景】跨膜转运蛋白在微生物转运各种物质的过程中具有重要作用。【目的】通过比较原核微生物组磷酸转移酶(phosphotransferasesystem,PTS)系统和腺苷三磷酸结合盒(ATP-binding cassette,ABC)转运蛋白编码基因在两种不同生物土壤结皮中(藻结皮与藓结皮)的差异,以期揭示随着生物土壤结皮的发育演替,微生物组跨膜转运物质的生物学过程中的潜在变化趋势。【方法】对腾格里沙漠东南缘的藻结皮和藓结皮12个样品进行宏基因组测序,参照KEGG数据库PTS系统,与ABC转运蛋白代谢通路进行比较并筛选相关基因,分析其差异显著性。【结果】藻结皮和藓结皮PTS系统和ABC转运蛋白编码基因的多样性一致。在生物土壤结皮中共检测到16种PTS系统的转运蛋白的编码基因,具有显著性差异的有5种;检测到106种ABC转运蛋白的编码基因,具有显著性差异的有46种,并对这46种转运蛋白结合的底物以及变化趋势进行了详细的描述。【结论】生物土壤结皮发育演替过程中,微生物组从环境中摄取能够增加渗透势物质的潜力总体呈现降低趋势,转运氨基酸、细胞膜和细胞壁组分的潜力总体呈现增加趋势,对于矿物离子、辅助因子、糖类和碳酸氢盐等的转运潜力总体无明显变化。需要注意的是这些转运蛋白编码基因多样性及差异与生物土壤结皮的关系还有待实验证明与解释。 展开更多
关键词 生物土壤结皮 宏基因组测序 PTS系统 ABC转运蛋白
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乙酸菌糖磷酸化作用的研究
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作者 姜卫红 PattersonJohnA 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期539-545,共7页
对7 种乙酸菌( Acetitomaculum ru minis, Acetobacterium woodii, Eubacteriu m limosu m 和分离株A2 、A4 、A10 、H3HH) 的葡萄糖和2脱氧葡萄糖... 对7 种乙酸菌( Acetitomaculum ru minis, Acetobacterium woodii, Eubacteriu m limosu m 和分离株A2 、A4 、A10 、H3HH) 的葡萄糖和2脱氧葡萄糖磷酸化作用进行了研究。尽管所有机体都存在磷酸化反应,但它们在依赖PEP 和ATP 的比例上有实质性区别。分离菌株A10 具有最高的依赖PEP 的葡萄糖磷酸化活力(1162nmol·L-1·mg - 1·min - 1) ,A10 、H3HH和E.limosum 都具有葡萄糖磷酸转移酶系统(phosphotransferase system ,PTS) 。相反,A.ruminis、A.woodii、A2 和A4 则不具有PTS活力。这七株菌的葡萄糖依赖ATP 的磷酸化活力都高于依赖PEP的磷酸化活力,但其程度有所不同。A10 和H3HH 的葡萄糖PTS可通过胞外葡萄糖诱导,并且其比活在对数期随培养时间延长而增加。此外,还检测到A10 展开更多
关键词 乙酸菌 糖磷酸化 磷酸转移酶系统 wood途径
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蜡样芽孢杆菌0-9菌株磷酸转移酶系统对糖利用能力分析
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作者 张颖 王少伟 +3 位作者 陈迈 熊曦 王刚 许玉彬 《河南大学学报(自然科学版)》 CAS 2015年第5期576-580,共5页
利用蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)0-9菌株及其衍生菌株,研究蜡样芽孢杆菌磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)对不同糖类的磷酸化和吸收利用情况,明确该菌株的PTS糖类型,并就该菌对糖的利用能力及产胞外酶的能力进行了初... 利用蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)0-9菌株及其衍生菌株,研究蜡样芽孢杆菌磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)对不同糖类的磷酸化和吸收利用情况,明确该菌株的PTS糖类型,并就该菌对糖的利用能力及产胞外酶的能力进行了初步分析.结果表明,葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等均是蜡样芽孢杆菌0-9菌株的PTS糖,ptsI基因在PTS系统对糖的磷酸化过程中起到至关重要的作用,该基因功能缺失会导致突变体菌株对葡萄糖的磷酸化和吸收利用能力降低1.6倍,同时也会导致其产胞外酶的能力降低.本研究结果为深入研究蜡样芽孢杆菌0-9菌株的生防机理及基于该菌的生防制剂的研发提供了新的理论依据. 展开更多
关键词 磷酸烯醇式丙酮酸 磷酸转移酶系统 蜡样芽孢杆菌
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细菌磷酸转移酶系统(PTS)的组成与功能研究进展 被引量:20
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作者 刘倩钰 吴丽雯 +1 位作者 牛建军 赵西林 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期2266-2277,共12页
细菌磷酸烯醇丙酮酸(phosphoenolpyruvate,PEP)-磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)广泛存在于细菌、真菌和一些古细菌中,但不存在于动植物中。PTS由酶I(EI)、组氨酸磷酸载体蛋白(HPr或NPr)和酶II复合物等磷酸转移酶组成,... 细菌磷酸烯醇丙酮酸(phosphoenolpyruvate,PEP)-磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)广泛存在于细菌、真菌和一些古细菌中,但不存在于动植物中。PTS由酶I(EI)、组氨酸磷酸载体蛋白(HPr或NPr)和酶II复合物等磷酸转移酶组成,既具有催化转运功能,又具有非常广泛的调节功能。PTS主要是通过磷酸级联反应将各种糖及其衍生物进行磷酸化然后运输到胞内。其不仅参与碳、氮中心代谢,调节铁、钾稳态,调控某些病原体的毒力,还能介导应激反应。在这些不同的调节过程中,信号由PTS组分的磷酸化状态提供,而该磷酸化状态根据PTS底物的可用性和细胞代谢状态的变化而变化。本文对细菌中磷酸转移酶系统的组成和调控网络进行综述,以期为PTS的整体调控机制及其对细菌整体代谢影响的研究提供参考依据。 展开更多
关键词 磷酸转移酶系统(PTS) 碳代谢 氮代谢 铁、钾调节 毒力 应激反应
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氦氖激光血管内照射对急性脑梗死患者血清神经元特异性稀醇化酶及神经功能恢复的影响 被引量:8
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作者 郑华 邢永前 +4 位作者 王义刚 赵斌 黄迪南 陈小江 梁学标 《中华理疗杂志》 2001年第3期136-137,共2页
目的 探讨低能量氦氖激光血管内照射 (ILIB)治疗对急性脑梗死患者血清神经元特异性稀醇化酶 (Neuron -specificenolase,NSE)含量及神经功能恢复的影响。 方法  42例急性脑梗死患者随机分为A、B两组 ,两组的基础治疗相同 ,A组加用ILIB... 目的 探讨低能量氦氖激光血管内照射 (ILIB)治疗对急性脑梗死患者血清神经元特异性稀醇化酶 (Neuron -specificenolase,NSE)含量及神经功能恢复的影响。 方法  42例急性脑梗死患者随机分为A、B两组 ,两组的基础治疗相同 ,A组加用ILIB治疗 10次。两组分别在病后 3d内、14d测定血清NSE水平和神经功能缺损程度。另选 2 1名年龄、性别相匹配健康体检者为对照组。结果病后 3d内 ,A、B两组血清NSE水平明显高于对照组 (P <0 .0 0 1) ;A、B组间血清NSE水平及神经功能缺损程度差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。病后 14d ,A、B两组血清NSE水平均显著降低 (P <0 .0 0 1) ,神经功能缺损程度明显减轻 (P <0 .0 0 1) ;但A组变化比B组更明显 (P <0 .0 5 )。结论 ILIB治疗能改善急性脑梗死后神经组织的修复 。 展开更多
关键词 急性脑梗死 氦氖激光血管内照射 治疗 神经元特异性稀醇化酶 神经功能恢复
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肺炎克雷伯菌果糖磷酸转移酶系统EⅡC编码基因frwC缺失株的构建及表型分析 被引量:7
15
作者 林迪斯 徐丽 +2 位作者 李飞雨 汪静杰 李蓓 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期788-792,共5页
目的利用同源重组技术构建肺炎克雷伯菌果糖磷酸转移酶系统(PTS系统)EⅡC编码基因frwC无痕缺失株,并构建回补株,探讨frwC基因对肺炎克雷伯菌生长、超黏表型及毒力的影响。方法利用自杀载体pKO3-Km质粒构建frwC基因缺失株,同时扩增包含f... 目的利用同源重组技术构建肺炎克雷伯菌果糖磷酸转移酶系统(PTS系统)EⅡC编码基因frwC无痕缺失株,并构建回补株,探讨frwC基因对肺炎克雷伯菌生长、超黏表型及毒力的影响。方法利用自杀载体pKO3-Km质粒构建frwC基因缺失株,同时扩增包含frwC基因编码区、启动区及转录终止区的基因片段,克隆至pGEM-Teasy质粒电转至缺失株构建frwC基因回补株。通过生长曲线测定、高速离心实验、小鼠毒力实验分析frwC基因对肺炎克雷伯菌生长、超黏表型及毒力的影响。结果成功构建了肺炎克雷伯菌frwC基因缺失株与回补株,发现frwC基因敲除后细菌生长速度下降、黏性增加、细菌毒力减弱。结论肺炎克雷伯菌果糖磷酸转移酶系统frwC基因编码蛋白EⅡC影响细菌的生成、超黏表型及毒力。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 frwC基因 磷酸转移酶系统 毒力
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hprK基因敲除及对其枯草芽孢杆菌核黄素发酵的影响 被引量:4
16
作者 张帆 宋辉 班睿 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期534-538,共5页
枯草芽孢杆菌在葡萄糖丰富的环境中,胞内糖分解代谢物浓度的提高将引起碳分解代谢物阻遏效应(CCR)及糖吸收的抑制,对核黄素等发酵过程产生不利影响。通过缺陷细胞的分解代谢物控制蛋白A(CcpA)可以解除CCR效应,但不能解除糖吸收的抑制。... 枯草芽孢杆菌在葡萄糖丰富的环境中,胞内糖分解代谢物浓度的提高将引起碳分解代谢物阻遏效应(CCR)及糖吸收的抑制,对核黄素等发酵过程产生不利影响。通过缺陷细胞的分解代谢物控制蛋白A(CcpA)可以解除CCR效应,但不能解除糖吸收的抑制。磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(PTS)是枯草芽孢杆菌主要的糖吸收方式,HPr蛋白和双功能的HPr激酶/HPr-Ser46-P磷酸酶(HprK/P)参与PTS系统的调控。在葡萄糖丰富的条件下,HprK/P的激酶活性受1,6-二磷酸果糖激活,催化HPr蛋白46位丝氨酸残基磷酸化,形成HPr-Ser46-P。HPr-Ser46-P抑制某些碳源透过酶基因的表达;同时HPr-Ser46-P难以被酶Ⅰ在His15磷酸化,不能在PTS系统中发挥转移磷酸基团的作用,使细胞的糖吸收受到抑制。在CcpA缺陷的背景下,敲除核黄素生产菌株B.subtilis24A1/pMX45的HprK/P编码基因hprK,构建了CcpA和HprK/P双缺陷的重组菌B.subtilisZHc/pMX45。摇瓶发酵显示,B.subtilisZHc/pMX45核黄素发酵的最适葡萄糖浓度由24A1/pMX45的8%提高到10%;核黄素产量达到4.374mg/mL,比24A1/pMX45提高了19.2%。结果表明,CcpA和HprK/P的双缺陷可有效解除高浓度葡萄糖所引起的CCR效应和糖吸收抑制,有助于提高细胞对葡萄糖的耐受力,并提高核黄素产量。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 HPr蛋白 hprK基因 磷酸糖转移酶系统(PTS) 核黄素
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顺磁核磁共振技术研究蛋白质遭遇复合物的动态结构 被引量:1
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作者 赵昶 龚洲 《波谱学杂志》 CAS 北大核心 2023年第2期148-157,共10页
蛋白质依靠短程相互作用识别配体蛋白进而行使生物学功能,其相互作用界面仅占据蛋白质总表面积的一部分.因此,蛋白质与配体蛋白需要形成一系列遭遇复合物系综结构来减少构象搜索空间以加快结合速度.由于遭遇复合物在溶液体系中存在时间... 蛋白质依靠短程相互作用识别配体蛋白进而行使生物学功能,其相互作用界面仅占据蛋白质总表面积的一部分.因此,蛋白质与配体蛋白需要形成一系列遭遇复合物系综结构来减少构象搜索空间以加快结合速度.由于遭遇复合物在溶液体系中存在时间短、丰度低,因而很难被传统结构生物学技术捕捉到.本文选用组氨酸磷酸载体蛋白(HPr)和酶II(EIIAGlc)复合物为研究体系,采用顺磁弛豫增强(Paramagnetic Relaxation Enhancement,PRE)技术对遭遇复合物的系综结构及动力学性质进行表征,并用分子动力学模拟方法对实验结果进行验证,发现HPr在溶液体系中首先与EIIAGlc在3个方向上形成遭遇复合物,进而促进特异性复合物的形成.该方法不仅能够在溶液体系中观察遭遇复合物系综结构,还有望应用于生物大分子领域,揭示蛋白质在复杂生理网络中的相互作用机制及动力学行为. 展开更多
关键词 核磁共振(NMR) 遭遇复合物 分子动力学模拟 糖磷酸转移酶系统
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系统代谢工程改造谷氨酸棒杆菌高产L-丙氨酸 被引量:1
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作者 吴晨 王泽婷 +5 位作者 赵桂红 吕庚承 王非傲 刘月香 陈宁 李燕军 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第21期9-15,I0001,I0002,共9页
L-丙氨酸是一种重要的天然氨基酸,广泛应用于医药、食品、饲料等领域。目前,L-丙氨酸主要通过大肠杆菌来生产,开发安全、工业稳定的谷氨酸棒杆菌生产菌株具有重要的意义。该研究筛选了外源丙氨酸脱氢酶,在不以其他氨基酸为氨基供体的条... L-丙氨酸是一种重要的天然氨基酸,广泛应用于医药、食品、饲料等领域。目前,L-丙氨酸主要通过大肠杆菌来生产,开发安全、工业稳定的谷氨酸棒杆菌生产菌株具有重要的意义。该研究筛选了外源丙氨酸脱氢酶,在不以其他氨基酸为氨基供体的条件下高效率合成L-丙氨酸。强化非磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)葡萄糖摄取途径,极大地促进了细胞的生长和L-丙氨酸的合成。引入异源Entner-Dondoroff途径,通过4步反应即可实现糖酵解途径10步反应供应前体物丙酮酸,进一步提高了L-丙氨酸的产量。此外,为了避免抗生素的使用和保证菌株的遗传稳定性,将关键基因整合到基因组上。最终工程菌株在5 L发酵罐发酵48 h产生104 g/L L-丙氨酸。该研究为利用谷氨酸棒杆菌工业化生产L-丙氨酸奠定了基础,同时为其他丙酮酸族产品的代谢工程研究提供了参考。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 L-丙氨酸 丙氨酸脱氢酶 非PTS系统 EMP途径 ED途径
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单增李斯特菌PTS系统转运蛋白IIB^(man)介导运动性和感染的功能研究
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作者 张佳雪 陈绵绵 +7 位作者 程丽丽 任耿佳 徐像文 鲁珂蓥 庄楠茜 孙静 宋厚辉 程昌勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1179-1187,共9页
为探究单增李斯特菌(LM)磷酸转移酶系统(PTS)转运蛋白IIB^(man)在LM生长、运动性及其生物学功能,本研究以LM EGD-e株基因组为模板,经PCR扩增iiB^(man)基因的上下游基因片段(不包含iiB^(man)基因),插入质粒pKSV7以构建缺失质粒;以LM EGD-... 为探究单增李斯特菌(LM)磷酸转移酶系统(PTS)转运蛋白IIB^(man)在LM生长、运动性及其生物学功能,本研究以LM EGD-e株基因组为模板,经PCR扩增iiB^(man)基因的上下游基因片段(不包含iiB^(man)基因),插入质粒pKSV7以构建缺失质粒;以LM EGD-e基因组为模板,采用PCR扩增iiB^(man)基因与启动子片段,插入质粒pIMK2以构建回补质粒,经PCR和测序鉴定后,将缺失质粒转化LM EGD-e感受态细胞,通过氯霉素抗性及42℃压力下使重组质粒与LM EGD-e株的同源片段发生同源重组单交换获得一代同源重组菌株,然后在无抗性培养基中30℃培养使质粒丢失,获得缺失株ΔiiB^(man)。将回补质粒转化ΔiiB^(man)感受态细胞中,通过卡那霉素抗性筛选获得回补株CΔiiB^(man),缺失株和回补株均经PCR和测序鉴定。37℃培养EGD-e、ΔiiB^(man)、CΔiiB^(man)12 h,期间每隔1 h测定OD_(600nm)并绘制生长曲线,分析各菌株生长特性,结果显示,各菌株体外生长趋势相似。将各菌株菌液接种于TSA半固体培养基,培养至24 h和48 h时检测细菌运动圈大小,结果显示ΔiiB^(man)的运动圈直径分别是EGD-e的1.5及1.6倍(P<0.05、P<0.01),CΔiiB^(man)与EGD-e运动圈直径均基本一致。在各菌株培养上清中加入绵羊血,检测各菌株溶血能力,结果显示,ΔiiB^(man)的溶血能力较EGD-e及CΔiiB^(man)增强。将各菌株以MOI 20感染RAW264.7细胞,在感染后2 h、5 h和8 h收集细胞进行点样计数,结果显示,在感染后2 h和5 h时ΔiiB^(man)的胞内增殖能力较EGD-e及CΔiiB^(man)显著增强(P<0.05)。将各菌株以2×10^(5)cfu/只经腹腔注射感染小鼠48 h后剖杀,取肝脏和脾脏研磨并点样计数,结果显示,ΔiiB^(man)在小鼠脏器载菌量较EGD-e及CΔiiB^(man)极显著增多(P<0.001)。上述结果首次表明IIB^(man)不影响LM的生长,但影响LM的运动性及提高LM的体外溶血活性;IIB^(man)参与LM的胞内增殖和宿主脏器定植。本研究为了解LM PTS系统所介导� 展开更多
关键词 单增李斯特菌 磷酸转移酶系统 IIB^(man)转运蛋白 运动性 感染
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大肠杆菌PTS^(Ntr)相关基因缺失对L-苏氨酸合成的影响
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作者 张淑嫣 胡晓清 +1 位作者 李莹 王小元 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期31-39,共9页
大肠杆菌的氮磷酸转移酶系统(nitrogen phosphotransferase system,PTSNtr)在其工作过程中会消耗L-苏氨酸合成的前体物质磷酸烯醇式丙酮酸,敲除相关基因或可影响苏氨酸合成。作者利用CRISPR-Cas9系统,分别敲除PTSNtr相关基因ptsP、ptsO... 大肠杆菌的氮磷酸转移酶系统(nitrogen phosphotransferase system,PTSNtr)在其工作过程中会消耗L-苏氨酸合成的前体物质磷酸烯醇式丙酮酸,敲除相关基因或可影响苏氨酸合成。作者利用CRISPR-Cas9系统,分别敲除PTSNtr相关基因ptsP、ptsO和ptsN,构建得到突变株MZ001、MZ002和MZ003。通过对出发菌株和突变菌株测定生长曲线,发现ptsP、ptsO和ptsN的单缺失使菌株培养前期生长迟缓,迟滞期延长,后期快速生长,稳定期生物量积累大于出发菌株。之后在出发菌株和突变菌株中引入含有苏氨酸合成的3个关键酶编码基因thrA*、thrB和thrC以及苏氨酸转运蛋白编码基因rhtC的表达质粒。对比菌株MG1655/pFW01-thrA*BC-rhtC,菌株MZ001/pFW01-thrA*BC-rhtC、MZ002/pFW01-thrA*BC-rhtC和MZ003/pFW01-thrA*BC-rhtC苏氨酸的产量有明显提高,分别为3.805、1.722、3.091 g/L,表明大肠杆菌的PTSNtr相关基因的敲除对提高其L-苏氨酸的合成能力有促进作用。 展开更多
关键词 大肠杆菌 L-苏氨酸 氮磷酸转移酶系统
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