广地龙化学成分和药理作用的研究进展及其质量标志物(Q-Marker)的预测分析 被引量：38

1

作者 李思维 郝二伟 +5 位作者 杜正彩 韦玮 王星圆 陈静梅 侯小涛 邓家刚 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2560-2571,共12页

广地龙Pheretima aspergillum为我国常用传统中药材,主要分布于广西、广东,为岭南地区道地药材。广地龙中化学成分包括蛋白质及多肽类、酶类、氨基酸及二肽类、核苷类、脂肪酸类、甾体化合物、溶血磷脂、无机元素等。传统认为广地龙蚓... 广地龙Pheretima aspergillum为我国常用传统中药材,主要分布于广西、广东,为岭南地区道地药材。广地龙中化学成分包括蛋白质及多肽类、酶类、氨基酸及二肽类、核苷类、脂肪酸类、甾体化合物、溶血磷脂、无机元素等。传统认为广地龙蚓激酶、次黄嘌呤和琥珀酸为其主要药效成分。对广地龙化学成分、药理作用的研究进展进行总结,并在此基础上,分析酶类、核苷类、脂肪酸类等成分与药效的关联,基于传统功效与现代药理作用预测其质量标志物(quality marker,Q-Marker),初步确定纤溶活性蛋白、蚓激酶、蚯蚓纤溶酶、次黄嘌呤、肌苷、琥珀酸、多不饱和脂肪酸、氨基酸及二肽类成分为其可能的Q-Marker。建议聚焦其有效成分,结合成分化学物质组入血后的协同作用以及化学成分可测性,建立专属性的测定方法,为明确广地龙Q-Marker和制定科学的质量评价体系提供基础。 展开更多

关键词 广地龙 药效物质基础 质量标准 质量标志物 纤溶活性蛋白 蚓激酶 蚯蚓纤溶酶 次黄嘌呤 肌苷 琥珀酸 多不饱和脂肪酸 氨基酸及二肽类

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HPLC同时测定广地龙中5种核苷类成分含量 被引量：14

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作者 关水清 周改莲 +3 位作者 董婧婧 林青华 黄盼 王倩 《广西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第3期85-91,共7页

建立同时测定广地龙中5种核苷类成分含量的HPLC法。采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(5∶95,体积比)等度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温30℃,测定了广地龙药材中5种核苷类成分的含量。结果... 建立同时测定广地龙中5种核苷类成分含量的HPLC法。采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(5∶95,体积比)等度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温30℃,测定了广地龙药材中5种核苷类成分的含量。结果表明:尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷分别在14.84~111.30 ng(r=0.999 9)、126.00~945.00 ng(r=0.999 8)、63.60~477.00 ng(r=0.999 9)、612.00~4 590.00 ng(r=0.999 8)、41.60~312.00 ng(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率(n=9)分别为99.27%、99.14%、98.59%、98.69%、99.91%,RSD(n=9)分别为0.95%、0.86%、1.01%、0.86%、1.91%;20批广地龙中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷含量分别为0.051 0~0.111 0、0.243 1~0.943 6、0.171 9~0.508 0、1.559 6~3.861 1、0.165 5~0.250 1 mg/g,5种总核苷含量为3.309 9~4.565 9 mg/g。该方法简便、可靠、重复性好、精密度高,可用于同时测定广地龙中5种核苷类成分的含量。 展开更多

关键词 广地龙 核苷类 含量测定 HPLC

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HPLC法测定各沪产地龙和广地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶和尿苷的含量 被引量：13

3

作者 季倩 高守红 +1 位作者 张汉明 张磊 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期443-446,共4页

目的测定各种沪产地龙与广地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷的含量,建立地龙药材质量评价的方法。方法用0.9%生理盐水超声提取地龙,SORBAX SB-Aq色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm,Aglient Co.,Ltd）,流动相：5mmol/L磷酸二氢钾（pH... 目的测定各种沪产地龙与广地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷的含量,建立地龙药材质量评价的方法。方法用0.9%生理盐水超声提取地龙,SORBAX SB-Aq色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm,Aglient Co.,Ltd）,流动相：5mmol/L磷酸二氢钾（pH 2.9）,流速1mL/min,检测波长254nm,柱温30℃,进样量10μL,采用HPLC法,同时测定次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷4种核苷类成分的含量。结果次黄嘌呤的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率99.37%,RSD=1.36%（n=6）;黄嘌呤的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.993 1）,平均回收率91.57%,RSD=1.40%（n=6）;尿嘧啶的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率95.31%,RSD=1.64%（n=6）;尿苷的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率100.21%,RSD=1.98%（n=6）。结论该方法重复性、回收率好,可用于测定地龙与广地龙中次黄嘌呤等4种核苷类成分的含量。 展开更多

关键词 沪地龙 广地龙 次黄嘌呤 黄嘌呤 尿嘧啶 尿苷 高压液相色谱法

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地龙HPLC指纹图谱分析方法的研究 被引量：12

4

作者 姜文红 张清波 《中医药学报》 CAS 2006年第6期13-14,共2页

目的:建立地龙药材指纹图谱的测定方法。方法:采用HPLC法测定地龙药材0.9%生理盐水提取液的指纹图谱。结果:建立了地龙药材HPLC指纹图谱,确定了9个色谱峰为其共有峰。结论:利用地龙药材指纹图谱可以对地龙药材的质量进行全面控制。

关键词 地龙 HPLC 次黄嘌吟 黄嘌吟 尿嘧啶

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参环毛蚓中纤溶活性蛋白酶研究 被引量：8

5

作者 张东方 周美环 +1 位作者 单玉 杨松松 《药物生物技术》 CAS CSCD 2006年第1期49-50,58,共3页

分离纯化参环毛蚓中纤溶活性蛋白酶,并对其活性及氨基酸序列进行分析。采用凝胶层析等方法进行蛋白质的分离纯化,SDS-PAGE法进行分子质量的测定,纤维平板法测定纤溶活性,氨基酸自动分析仪分析氨基酸组成,并对一个具有纤溶活性的蛋白酶... 分离纯化参环毛蚓中纤溶活性蛋白酶,并对其活性及氨基酸序列进行分析。采用凝胶层析等方法进行蛋白质的分离纯化,SDS-PAGE法进行分子质量的测定,纤维平板法测定纤溶活性,氨基酸自动分析仪分析氨基酸组成,并对一个具有纤溶活性的蛋白酶进行了序列分析。分离纯化得到4种酶,其中EQY-4活性较强,其N-端序列为:Gln-Ile-Gly-Gly-Thr-Asn-Ala-Ser-Pro-Gly-Glu-Phe-Pro-Pro-Gln-Leu-Ser-Gln-Thr。与文献报道中赤子爱胜蚓及粉正蚓中分离得到的蛋白酶对比,主要序列相近,但也有不同。 展开更多

关键词 参环毛蚓 蚯蚓 地龙 纤溶酶 序列分析

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柱前衍生HPLC法测定地龙中氨基酸的含量 被引量：9

6

作者 裴福成 李长新 任桂萍 《中医药学报》 CAS 2007年第3期26-27,共2页

目的:分析地龙中氨基酸的含量及其特征性。方法:采用邻苯二甲醛(OPA)、9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)联合柱前衍生HPLC测定地龙中的17种氨基酸,峰面积外标法定量。结果:各氨基酸在26min内可得到较好分离,氨基酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,... 目的:分析地龙中氨基酸的含量及其特征性。方法:采用邻苯二甲醛(OPA)、9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)联合柱前衍生HPLC测定地龙中的17种氨基酸,峰面积外标法定量。结果:各氨基酸在26min内可得到较好分离,氨基酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,r值均在0.995以上。结论:所建立的方法分离效果好、灵敏、准确、简便,适宜地龙药材中氨基酸的测定。 展开更多

关键词 地龙 氨基酸 高效液相色谱 柱前衍生

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广地龙特异性PCR分子鉴定 被引量：8

7

作者 陈维明 马梅 +1 位作者 龚玲 李薇 《广州中医药大学学报》 CAS 2015年第3期499-503,507,共6页

【目的】筛选出对广地龙具有特异性鉴别意义的PCR引物,建立一种快速、准确鉴别广地龙基原真实性的方法。【方法】收集药典收载的4种地龙原动物以及市场常见地龙混淆品6种,从Gen Bank数据库中下载有关蚯蚓的12Sr RNA基因序列,采用通用引... 【目的】筛选出对广地龙具有特异性鉴别意义的PCR引物,建立一种快速、准确鉴别广地龙基原真实性的方法。【方法】收集药典收载的4种地龙原动物以及市场常见地龙混淆品6种,从Gen Bank数据库中下载有关蚯蚓的12Sr RNA基因序列,采用通用引物对10种样本PCR扩增后进行测序,依其序列间差异设计3对非保守区特异性引物,筛选对广地龙具有特异性扩增的引物。【结果】引物12St/12Sf对广地龙产生特异性扩增,当退火温度提升至64℃时,其反应表现出高度特异性,仅广地龙具有良好的单一扩增带,而其他样品在同样的条件下无扩增带。所得特异性引物在15种市售广地龙药材中验证结果良好,与传统形态学鉴定结果基本一致。【结论】引物12St/12Sf可作为广地龙物种鉴定的特异性标记物,可以实现广地龙近缘多个物种快速而又准确的鉴定,且不受实验材料的完整性、加工干燥等因素的影响。 展开更多

关键词 广地龙 基原鉴定 PCR技术 12SrRNA

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酒炙广地龙的炮制工艺优选及HPLC特征图谱分析 被引量：1

8

作者 关水清 周改莲 +3 位作者 钱力 文建军 王乃斌 谢雪婷 《中国民族民间医药》 2023年第9期29-35,共7页

目的:探讨酒炙广地龙的最佳炮制工艺,建立其HPLC特征图谱。方法:采用正交试验,以次黄嘌呤、肌苷、蛋白质及水溶性浸出物含量为评价指标,优选酒炙广地龙的炮制工艺;再按最优炮制工艺制备酒炙广地龙样品,建立其特征图谱。结果:酒炙广地龙... 目的:探讨酒炙广地龙的最佳炮制工艺,建立其HPLC特征图谱。方法:采用正交试验,以次黄嘌呤、肌苷、蛋白质及水溶性浸出物含量为评价指标,优选酒炙广地龙的炮制工艺;再按最优炮制工艺制备酒炙广地龙样品,建立其特征图谱。结果:酒炙广地龙饮片炮制过程中,4个因素影响程度依次为:炒制温度>闷润时间>炒制时间>加酒量,最佳炮制工艺为加酒量每100 kg广地龙,黄酒量为15 kg,闷润时间30 min,炒制温度80℃及炒制时间10 min。建立以SETSAIL II AQ-C_(18)柱,流动相甲醇(A)-5 mmol/L磷酸二氢钾溶液(B)梯度洗脱的指纹图谱检测方法,15批酒炙广地龙确定了17个共有峰,指认了次黄嘌呤、尿苷、肌苷、尿嘧啶4个共有峰,相似度为0.974~0.999。结论:次黄嘌呤、肌苷、蛋白质及水溶性浸出物含量4个指标可作为广地龙饮片酒炙炮制过程中的质量评价指标,中试验证评判所得最优炮制工艺合理可行;建立的HPLC特征图谱方法准确可靠,为酒炙广地龙的质量控制和现代研究提供了科学依据。 展开更多

关键词 广地龙 酒炙 多指标评价 正交试验 炮制工艺

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重金属镉对参环毛蚓胃肠道上皮细胞超微结构损伤的研究 被引量：5

9

作者 吴波 李薇 +3 位作者 付玉梅 喻良文 彭杰 张惠球 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1833-1837,共5页

目的:研究不同浓度重金属镉离子胁迫下对参环毛蚓胃肠道结构的影响。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒、HE组织切片染色、光学显微镜及透射电镜下观察参环毛蚓胃肠道超微结构损伤的变化。结果:随着镉离子浓度的增加,参环毛蚓的... 目的:研究不同浓度重金属镉离子胁迫下对参环毛蚓胃肠道结构的影响。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒、HE组织切片染色、光学显微镜及透射电镜下观察参环毛蚓胃肠道超微结构损伤的变化。结果:随着镉离子浓度的增加,参环毛蚓的肠道粘膜上皮细胞有大量溶酶体增生,高尔基复合体增生、扩张呈大泡状,微绒毛、纤毛排列不整齐、紊乱,当镉离子浓度达到30mg/kg时,参环毛蚓肠粘膜上皮细胞微绒毛出现萎缩,纤毛细胞出现溃疡坏死病灶,核膜解体、核质外溢,最后导致坏死。结论:参环毛蚓胃肠道粘膜上皮细胞超微结构的受损程度,是随土壤重金属的污染量而定。在较低重金属浓度条件下,参环毛蚓肠上皮细胞是以溶酶体增生、存积一定量的重金属元素的方式来应对其毒害作用,也可视为肠上皮细胞对有毒异物的一种应答反应,为可逆性损伤;而在较高重金属浓度条件下,肠上皮细胞是以微绒毛和线粒体损伤为主,核膜解体、核质外溢,最后导致坏死,为不可逆性损伤。由此推断,参环毛蚓对重金属的高耐受性或富集作用是通过其肠上皮细胞的这种特性来实现的。 展开更多

关键词 镉污染 参环毛蚓 胃肠道上皮细胞 超微结构

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参环毛蚓不同部位细胞原代培养及鉴定 被引量：2

10

作者 侯雪芹 林小桦 李薇 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2011年第4期38-40,共3页

目的：筛选出参环毛蚓体内细胞培养的最佳部位,为建立参环毛蚓细胞原代培养方法提供实验基础。方法：分别提取参环毛蚓的皮、肠道、嗉囊、前列腺细胞进行培养,观察其细胞生长。结果：参环毛蚓的表皮和肠道细胞经培养后,细胞均有生长,并... 目的：筛选出参环毛蚓体内细胞培养的最佳部位,为建立参环毛蚓细胞原代培养方法提供实验基础。方法：分别提取参环毛蚓的皮、肠道、嗉囊、前列腺细胞进行培养,观察其细胞生长。结果：参环毛蚓的表皮和肠道细胞经培养后,细胞均有生长,并发现肠道细胞生长良好,5~6天后基本达到融合,细胞呈多边鹅卵石样,透明度及折光性强。另发现参环毛蚓的嗉囊、前列腺等部位的细胞没有增长迹象。结合形态学鉴定,原代培养及传代的细胞98%以上为肠上皮细胞。结论：参环毛蚓的肠道是建立细胞系的首选材料,采用此方法分离培养的肠上皮细胞数量多,均一性生长佳,可重复性强。 展开更多

关键词 参环毛蚓 原代培养 肠上皮细胞

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参环毛蚓MT-2基因及启动子的克隆研究 被引量：1

11

作者 张秋凤 李薇 +2 位作者 龚玲 黄传奇 陈立红 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第16期2902-2908,共7页

目的揭示参环毛蚓MT-2基因的转录调控机制,为今后采用基因工程技术改良参环毛蚓重金属富集性状奠定基础。方法根据已知的MT-2c DNA序列,设计特异引物,通过PCR扩增参环毛蚓MT-2基因的编码区基因组序列,扩增产物经测序后自行比对分析。基... 目的揭示参环毛蚓MT-2基因的转录调控机制,为今后采用基因工程技术改良参环毛蚓重金属富集性状奠定基础。方法根据已知的MT-2c DNA序列,设计特异引物,通过PCR扩增参环毛蚓MT-2基因的编码区基因组序列,扩增产物经测序后自行比对分析。基于该序列设计3条特异引物,采用基因步移技术克隆其上游的启动子序列,同时运用Promoter Prediction在线软件分析预测其顺式元件。结果经PCR扩增、测序后获得2 826 bp MT-2基因编码区序列,将该序列与已知MT-2 c DNA序列(登录号为KC787373.1)进行比对,发现MT-2编码区由4个外显子和4个内含子组成。基因步移技术克隆得到1 534 bp的启动子序列,经Promoter Prediction在线软件分析,结果显示该序列不仅含有TATA-box、CAAT-box等核心启动子软件,还具有3个特异响应重金属参与调控MT-2表达的MRE元件。结论参环毛蚓的MT-2基因能被重金属诱导表达,MT-2基因转录水平的金属调控是通过MT-2基因启动子区的金属调控元件MRE来实现的。 展开更多

关键词 参环毛蚓 重金属富集 金属硫蛋白 MT-2基因 转录调控

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抗栓用参环毛蚓水提取方法的筛选

12

作者 汤兵 孙胜宇 +1 位作者 魏文扬 阎婷 《辽宁医学院学报》 CAS 2013年第1期15-16,共2页

目的优选抗栓用参环毛蚓的最佳水提工艺。方法采用L9(34)正交试验法筛选最佳水提条件。结果最佳水提条件为第1次加4倍水,浸泡30 min,第2次加3倍水,浸泡30 min。结论采用本工艺提取参环毛蚓溶栓效价为300 U/g,该工艺稳定、可行。

关键词 参环毛蚓 正交试验 提取工艺

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参环毛蚓细胞原代培养灭菌方法的研究 被引量：3

13

作者 林小桦 李薇 +3 位作者 侯雪芹 李巧容 韦健红 李维 《广州中医药大学学报》 CAS 2011年第3期264-267,337,共5页

【目的】选择最佳灭菌方法,建立参环毛蚓细胞原代培养实验体系。【方法】通过4因素和3水平的正交试验法考察不同浓度比例抗生素组合液对参环毛蚓细胞的灭菌效果,比较不同抗生素种类和浓度对参环毛蚓细胞原代培养的影响。【结果】以抗生... 【目的】选择最佳灭菌方法,建立参环毛蚓细胞原代培养实验体系。【方法】通过4因素和3水平的正交试验法考察不同浓度比例抗生素组合液对参环毛蚓细胞的灭菌效果,比较不同抗生素种类和浓度对参环毛蚓细胞原代培养的影响。【结果】以抗生素组合液200 U/mL青霉素钠+400μg/mL硫酸链霉素+300 U/mL硫酸庆大霉素+5μg/mL两性霉素B对组织块的灭菌效果最佳,10 d污染率为0%,且细胞能保持较好活性,并贴壁生长。【结论】组合式灭菌法是参环毛蚓细胞原代培养的最佳有效灭菌方法,且操作简捷易行。 展开更多

关键词 参环毛蚓 细胞培养 灭菌

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基于UPLC-Q-TOF-MS技术的广地龙化学成分分析 被引量：85

14

作者 张玉 董文婷 +1 位作者 霍金海 王伟明 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期252-262,共11页

目的建立广地龙药材中化学成分的超高液相色谱-质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)分析方法。方法采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min,柱温35℃,... 目的建立广地龙药材中化学成分的超高液相色谱-质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)分析方法。方法采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min,柱温35℃,正负离子模式扫描。结果共鉴定出广地龙药材中84个化学成分,包括11种游离氨基酸、26种有机酸类、11种核苷类、5种二肽及环二肽类、21种含氮类物质和10种其他类。结论该法准确、快速、灵敏,为进一步阐明其药效物质基础和后期质量控制指标的选择提供科学依据。 展开更多

关键词 广地龙 超高液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱 氨基酸 有机酸类 核苷类

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