恶性疟原虫PfMAg-1蛋白为裂殖子表面相关蛋白,为了探究PfMAg-1的功能,本研究采用规律成簇间隔短回文重复及相关失活蛋白(Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/dead CRISPRassociated protein 9,CRISPR/d Cas9)...恶性疟原虫PfMAg-1蛋白为裂殖子表面相关蛋白,为了探究PfMAg-1的功能,本研究采用规律成簇间隔短回文重复及相关失活蛋白(Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/dead CRISPRassociated protein 9,CRISPR/d Cas9)技术,构建恶性疟原虫PfMAg-1低表达质粒,电穿孔方法转染后通过抗稻瘟菌素(Blasticidin S Deaminase,BSD)筛选出恶性疟原虫MAg1^(KD)(Knock Down,KD)虫株。通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)、实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)检测PfMAg-1表达水平。在体外培养条件下观察MAg1^(KD)虫株生长趋势及裂殖子入侵效率来评价PfMAg-1的表达对恶性疟原虫红内期增殖的影响。结果表明,恶性疟原虫MAg1^(KD)虫株较对照虫株的体外生长率显著降低,进一步实验提示影响疟原虫增殖速度的原因是MAg1^(KD)虫株裂殖子入侵效率下降。本研究证实PfMAg-1在恶性疟原虫裂殖子入侵红细胞时发挥重要作用,为进一步评价PfMAg-1蛋白作为疟疾疫苗候选抗原的前景提供了实验依据。展开更多
文摘恶性疟原虫PfMAg-1蛋白为裂殖子表面相关蛋白,为了探究PfMAg-1的功能,本研究采用规律成簇间隔短回文重复及相关失活蛋白(Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/dead CRISPRassociated protein 9,CRISPR/d Cas9)技术,构建恶性疟原虫PfMAg-1低表达质粒,电穿孔方法转染后通过抗稻瘟菌素(Blasticidin S Deaminase,BSD)筛选出恶性疟原虫MAg1^(KD)(Knock Down,KD)虫株。通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)、实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)检测PfMAg-1表达水平。在体外培养条件下观察MAg1^(KD)虫株生长趋势及裂殖子入侵效率来评价PfMAg-1的表达对恶性疟原虫红内期增殖的影响。结果表明,恶性疟原虫MAg1^(KD)虫株较对照虫株的体外生长率显著降低,进一步实验提示影响疟原虫增殖速度的原因是MAg1^(KD)虫株裂殖子入侵效率下降。本研究证实PfMAg-1在恶性疟原虫裂殖子入侵红细胞时发挥重要作用,为进一步评价PfMAg-1蛋白作为疟疾疫苗候选抗原的前景提供了实验依据。
