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Efficient and Soluble Expression of N Protein of Peste Des Petits Ruminants Virus and Development of Indirect ELISA
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作者 Sun Yu Zhao Bolin +7 位作者 Wang Xiaoying Dong Hao Zhai Xinyan Qu Ping Hu Dongmei Yang Tianyi Shi Hui Song Xiaohui 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2017年第1期15-18,共4页
[ Objective] The paper was to get effective soluble N protein to establish indirect ELISA method for Peste des petits ruminants (PPR). [ Method] Soluble N protein with high expression was obtained from Escherichia c... [ Objective] The paper was to get effective soluble N protein to establish indirect ELISA method for Peste des petits ruminants (PPR). [ Method] Soluble N protein with high expression was obtained from Escherichia coli expression system through codon optimization and optimization of expression conditions, and indirect ELISA detection method based on N protein was further established. [ Result] The assay had no cross reaction with other sheep pathogens. The intra- and inter-batch variation coefficients were less than 9%, indicating the method had good repeatability. Furthermore, totally 480 clinical serum samples were detec- ted by the assay, and the agreement rate with commercial ELISA kit (IDVET) was 98.33%. [ Conclusion] The study laid a foundation for further development of mature PPRV antibody detection kits. 展开更多
关键词 pestedes petits ruminants N active protein Soluble expression and purification Indirect ELISA
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小反刍兽疫病毒双抗原夹心时间分辨荧光免疫测定方法的建立 被引量:10
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作者 孙雨 宋晓晖 +7 位作者 董浩 赵柏林 曲萍 蒋菲 杨天意 张晨 杨林 王传彬 《动物医学进展》 北大核心 2019年第4期1-8,共8页
通过优化大肠埃希菌密码子、优化表达条件等方法,在大肠埃希菌表达系统中成功获得了可溶性的N蛋白与NH融合蛋白。进一步基于纯化的可溶性N蛋白与NH融合蛋白建立了小反刍兽疫病毒双抗原夹心时间分辨荧光免疫测定方法。该方法敏感性高,特... 通过优化大肠埃希菌密码子、优化表达条件等方法,在大肠埃希菌表达系统中成功获得了可溶性的N蛋白与NH融合蛋白。进一步基于纯化的可溶性N蛋白与NH融合蛋白建立了小反刍兽疫病毒双抗原夹心时间分辨荧光免疫测定方法。该方法敏感性高,特异性强,能够特异性的检测羊血清中的小反刍兽疫病毒抗体,与其他相关疫病病原无交叉反应;重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。对292份临床血清样品进行检测,与法国IDVET竞争ELISA试剂盒比较,阳性样品符合率为92.47%,阴性样品符合率为97.26%,总的符合率为94.86%。该方法与传统的ELISA方法相比,具有敏感性、特异性相当,操作简单、快速,具有较高的推广应用价值。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 N活性蛋白 NH融合蛋白 可溶性表达与纯化 时间分辨荧光免疫测定方法
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小反刍兽疫病毒抗体高敏快速荧光定量检测方法的建立 被引量:9
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作者 孙雨 章建 +6 位作者 王传彬 曲萍 杨天意 吴冠英 吴俊清 杨林 宋晓晖 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1207-1213,共7页
为建立快速定量检测羊血清中小反刍兽疫病毒抗体的方法,本研究通过优化大肠杆菌密码子、优化表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中获得了可溶性的N蛋白与NH融合蛋白,基于纯化的可溶性N蛋白与NH融合蛋白建立了小反刍兽疫病毒抗体高... 为建立快速定量检测羊血清中小反刍兽疫病毒抗体的方法,本研究通过优化大肠杆菌密码子、优化表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中获得了可溶性的N蛋白与NH融合蛋白,基于纯化的可溶性N蛋白与NH融合蛋白建立了小反刍兽疫病毒抗体高敏荧光免疫定量检测试剂盒。该方法能够快速定量检测绵羊血清中的小反刍兽疫病毒抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的羊类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对292份临床血清样品进行检测,同时用法国IDVET竞争ELISA试剂盒进行比较,两种方法符合率达到93.84%。与血清中和试验进行比较,高敏荧光快速定量检测方法检测效价值基本与标准阳性血清(OIE参考实验室提供)的中和试验效价值相符合。本试验建立的方法可对小反刍兽疫病毒抗体进行现场快速定量检测,具有较高的实用价值和推广价值。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 N蛋白 NH融合蛋白 可溶性表达与纯化 快速定量检测
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2018—2020年河南省长垣市奶山羊小反刍兽疫免疫效果评估与防控措施 被引量:1
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作者 王晓康 《中国乳业》 2021年第7期48-50,共3页
为了解河南省长垣市奶山羊小反刍兽疫疫情流行情况和免疫抗体水平,2018—2020年,采用阻断酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法和实时荧光聚合酶链式反应(PCR)法,对长垣市32家奶山羊散养户采集羊血清和鼻拭子样品,进行羊小反刍兽疫免疫抗体及病... 为了解河南省长垣市奶山羊小反刍兽疫疫情流行情况和免疫抗体水平,2018—2020年,采用阻断酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法和实时荧光聚合酶链式反应(PCR)法,对长垣市32家奶山羊散养户采集羊血清和鼻拭子样品,进行羊小反刍兽疫免疫抗体及病原学检测。结果表明,2018年、2019年和2020年的血清抗体合格率分别为83.13%、85.64%和86.67%,平均85.17%,高于国家规定的70.00%。病原学监测全部样品为阴性。提示长垣市总体疫苗免疫效果良好,羊群具有抵抗小反刍兽疫侵袭的基本能力。为长垣市制定科学合理的防控措施、逐步消灭小反刍兽疫和退出小反刍兽疫免疫计划提供参考依据。 展开更多
关键词 长垣市 奶山羊 小反刍兽疫 抗体检测 防控
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人车交互的行人过街方位概率动态预测模型
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作者 伍文广 张斌 +1 位作者 胡林 张志勇 《机械工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第10期40-50,共11页
行人的安全是道路交通的最重要指标之一,由于行人行走轨迹多变,增加了自动驾驶汽车主动避障和轨迹规划的难度,精准高效的行人轨迹预测方法将有助于提高驾驶辅助系统效率和避障成功率,从而提高行人和车辆的安全性。为此,提出一种人车交... 行人的安全是道路交通的最重要指标之一,由于行人行走轨迹多变,增加了自动驾驶汽车主动避障和轨迹规划的难度,精准高效的行人轨迹预测方法将有助于提高驾驶辅助系统效率和避障成功率,从而提高行人和车辆的安全性。为此,提出一种人车交互的行人过街方位概率动态预测模型,实现考虑人与车之间相互作用下的行人过街方位动态高效精准预测。首先,基于车辆对过街行人的影响,建立人车交互风险场模型,确定车辆尺寸、速度以及与行人的距离等参数对风险场的影响;其次,构建行人与车辆距离、行人与目标点距离以及行人过街步数的行人过街效益函数,并提出基于巢式概率模型的行人动态过街方位概率模型方法;然后,分析不同车辆类型、速度等特征对行人过街参数的影响规律;最后,通过试验采集分析某路段行人过街与车辆行驶轨迹数据,分析行人过街的规律。经试验与仿真结果对比,表明提出的方法能准确高效对行人过街方位进行预测,相较于长短期记忆网络(Long short-term memory,LSTM)的预测方法,计算效率提高了93.4%,精度提高了31.8%。 展开更多
关键词 人车交互风险场 行人过街方位概率 巢式模型 效益函数
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