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尼罗罗非鱼非特异性细胞毒性细胞(NCC)分离条件的优化
被引量：
3
1
作者
郑琦
陈一锦
+5 位作者
黄瑜
蔡佳
汤菊芬
鲁义善
吴灶和
简纪常
《广东海洋大学学报》
CAS
2017年第3期123-126,共4页
破碎尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)头肾组织,用RPMI-1640培养基制成细胞悬液,添加至两层不同浓度的Percoll分离液液面,离心,得非特异性细胞毒性细胞(Non-specific cytotoxic cell,NCC),优化下层Percoll浓度、离心力、离心时间。结...
破碎尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)头肾组织,用RPMI-1640培养基制成细胞悬液,添加至两层不同浓度的Percoll分离液液面,离心,得非特异性细胞毒性细胞(Non-specific cytotoxic cell,NCC),优化下层Percoll浓度、离心力、离心时间。结果表明,当下层Percoll体积分数为43%,上层Percoll体积分数为34%,离心力为500 g,离心时间为30 min时,尼罗罗非鱼NCC得率最高,为71.28%。
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关键词
尼罗罗非鱼
非特异性细胞毒性细胞
percoll
分离
液
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职称材料
一种高效提取普通小球藻叶绿体DNA的新方法
被引量：
2
2
作者
许夏冰
谭德冠
+2 位作者
孙雪飘
弓淑芬
张家明
《植物生理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期880-884,共5页
本文采用尿素-月桂酰肌氨酸钠(urea-sarkosyl)法,用于分离带有坚硬细胞壁小球藻的高纯度叶绿体DNA(cpDNA)。将对数生长期的小球藻收集后置于冰上研磨,percoll密度梯度离心收集叶绿体层,显微观察表明叶绿体经梯度离心后形态完整。采用尿...
本文采用尿素-月桂酰肌氨酸钠(urea-sarkosyl)法,用于分离带有坚硬细胞壁小球藻的高纯度叶绿体DNA(cpDNA)。将对数生长期的小球藻收集后置于冰上研磨,percoll密度梯度离心收集叶绿体层,显微观察表明叶绿体经梯度离心后形态完整。采用尿素-月桂酰肌氨酸钠法、蛋白酶K消化及酚/氯仿/异戊醇抽提,获得了高纯度的cpDNA。检测结果显示,cpDNA分子长度为22 kb,A260:A280值为1.87±0.01,产率达(2.52±0.01)μg·g-1(DW);cpDNA编码的16S rDNA扩增呈阳性,而由细胞核编码的18S rDNA扩增呈阴性。表明cpDNA纯度高,没有受到核基因组DNA的污染,符合小球藻cpDNA高通量测序的要求。同时,该方法也适合提取具有相似细胞壁成分的其他微藻的基因组DNA和cpDNA。
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关键词
普通小球藻
叶绿体DNA
尿素
月桂酰肌氨酸钠
percoll
分离
液
原文传递
两种分离脐血间充质干细胞的方法比较
被引量：
5
3
作者
高杨
李立
+2 位作者
冉江华
陈奕明
蒋益舟
《中国组织工程研究与临床康复》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第19期3472-3475,共4页
背景:目前分离脐血间充质干细胞的方法很多,尚没有确定一种为最有效的方法。目的:寻找一种最为可靠的脐血间充质干细胞分离方法。方法:应用Percoll分离液法和羟乙基淀粉沉降法对脐血进行分离得到单核细胞,在含体积分数15%新生牛血清的DM...
背景:目前分离脐血间充质干细胞的方法很多,尚没有确定一种为最有效的方法。目的:寻找一种最为可靠的脐血间充质干细胞分离方法。方法:应用Percoll分离液法和羟乙基淀粉沉降法对脐血进行分离得到单核细胞,在含体积分数15%新生牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养并传代。观察不同分离方法脐血单核细胞的回收率,每次传代的时间和细胞增值速度,培养过程中间充质干细胞形态的变化情况,并用流式细胞仪检测第3代细胞表面标志物CD90、CD44、CD34的表达。结果与结论:与Percoll分离液法相比羟乙基淀粉沉降法获得的单核细胞多,单核细胞回收率高(P<0.01),第1次传代时间短(P<0.01)。然而两种方法获得的细胞经培养在形态的变化和表面标志物CD90、CD44、CD34的表达上差异并无显著性意义(P>0.05)。所以羟乙基淀粉沉降法的分离效率较高,培养时间短,但是并不能获得质量较高的脐血间充质干细胞。
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关键词
脐血
间充质干细胞
分离
percoll
分离
液
法
羟乙基淀粉沉降法
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职称材料
题名
尼罗罗非鱼非特异性细胞毒性细胞(NCC)分离条件的优化
被引量：
3
1
作者
郑琦
陈一锦
黄瑜
蔡佳
汤菊芬
鲁义善
吴灶和
简纪常
机构
广东海洋大学水产学院
广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室
广东省水产经济动物病害控制重点实验室
出处
《广东海洋大学学报》
CAS
2017年第3期123-126,共4页
基金
国家自然科学基金(31572651)
广东省科技计划项目(2015A020209181)
广东海洋大学博士学位论文培育项目(201602)
文摘
破碎尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)头肾组织,用RPMI-1640培养基制成细胞悬液,添加至两层不同浓度的Percoll分离液液面,离心,得非特异性细胞毒性细胞(Non-specific cytotoxic cell,NCC),优化下层Percoll浓度、离心力、离心时间。结果表明,当下层Percoll体积分数为43%,上层Percoll体积分数为34%,离心力为500 g,离心时间为30 min时,尼罗罗非鱼NCC得率最高,为71.28%。
关键词
尼罗罗非鱼
非特异性细胞毒性细胞
percoll
分离
液
Keywords
Nile tilapia
non-specific cytotoxic cell
percoll
分类号
Q2-33 [生物学—细胞生物学]
S943.125 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
一种高效提取普通小球藻叶绿体DNA的新方法
被引量：
2
2
作者
许夏冰
谭德冠
孙雪飘
弓淑芬
张家明
机构
海南大学农学院
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
出处
《植物生理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期880-884,共5页
基金
海南省重点实验室和工程技术研究中心建设专项(gczx2013001)
海南省自然科学基金项目(310068)
文摘
本文采用尿素-月桂酰肌氨酸钠(urea-sarkosyl)法,用于分离带有坚硬细胞壁小球藻的高纯度叶绿体DNA(cpDNA)。将对数生长期的小球藻收集后置于冰上研磨,percoll密度梯度离心收集叶绿体层,显微观察表明叶绿体经梯度离心后形态完整。采用尿素-月桂酰肌氨酸钠法、蛋白酶K消化及酚/氯仿/异戊醇抽提,获得了高纯度的cpDNA。检测结果显示,cpDNA分子长度为22 kb,A260:A280值为1.87±0.01,产率达(2.52±0.01)μg·g-1(DW);cpDNA编码的16S rDNA扩增呈阳性,而由细胞核编码的18S rDNA扩增呈阴性。表明cpDNA纯度高,没有受到核基因组DNA的污染,符合小球藻cpDNA高通量测序的要求。同时,该方法也适合提取具有相似细胞壁成分的其他微藻的基因组DNA和cpDNA。
关键词
普通小球藻
叶绿体DNA
尿素
月桂酰肌氨酸钠
percoll
分离
液
Keywords
Chlorella vulgaris
cpDNA
urea
sarkosyl
percoll
separation medium
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
原文传递
题名
两种分离脐血间充质干细胞的方法比较
被引量：
5
3
作者
高杨
李立
冉江华
陈奕明
蒋益舟
机构
昆明市第一人民医院肝胆胰一科
出处
《中国组织工程研究与临床康复》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第19期3472-3475,共4页
基金
昆明市科技局重大项目(2007CA007)~~
文摘
背景:目前分离脐血间充质干细胞的方法很多,尚没有确定一种为最有效的方法。目的:寻找一种最为可靠的脐血间充质干细胞分离方法。方法:应用Percoll分离液法和羟乙基淀粉沉降法对脐血进行分离得到单核细胞,在含体积分数15%新生牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养并传代。观察不同分离方法脐血单核细胞的回收率,每次传代的时间和细胞增值速度,培养过程中间充质干细胞形态的变化情况,并用流式细胞仪检测第3代细胞表面标志物CD90、CD44、CD34的表达。结果与结论:与Percoll分离液法相比羟乙基淀粉沉降法获得的单核细胞多,单核细胞回收率高(P<0.01),第1次传代时间短(P<0.01)。然而两种方法获得的细胞经培养在形态的变化和表面标志物CD90、CD44、CD34的表达上差异并无显著性意义(P>0.05)。所以羟乙基淀粉沉降法的分离效率较高,培养时间短,但是并不能获得质量较高的脐血间充质干细胞。
关键词
脐血
间充质干细胞
分离
percoll
分离
液
法
羟乙基淀粉沉降法
分类号
R394.2 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
尼罗罗非鱼非特异性细胞毒性细胞(NCC)分离条件的优化
郑琦
陈一锦
黄瑜
蔡佳
汤菊芬
鲁义善
吴灶和
简纪常
《广东海洋大学学报》
CAS
2017
3
下载PDF
职称材料
2
一种高效提取普通小球藻叶绿体DNA的新方法
许夏冰
谭德冠
孙雪飘
弓淑芬
张家明
《植物生理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
原文传递
3
两种分离脐血间充质干细胞的方法比较
高杨
李立
冉江华
陈奕明
蒋益舟
《中国组织工程研究与临床康复》
CAS
CSCD
北大核心
2011
5
下载PDF
职称材料
已选择
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