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题名白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的结构确证分析
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作者
马伟
曹方
郭阳漾
王丹雅
杨欢
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机构
艾美卫信生物药业(浙江)有限公司
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出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2020年第6期634-639,共6页
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基金
宁波市重大科技专项“b型流感嗜血杆菌(Hib)疫苗新药研究”(2015B11048)。
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文摘
目的对本公司制备的白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白进行结构确证分析。方法通过发酵、提纯制备3批CRM197蛋白,经N-末端序列、C-末端序列、质量肽图和肽段覆盖率分析进行一级氨基酸序列结构确证分析,经圆二色谱法进行二级蛋白结构确证分析。结果3批CRM197蛋白N-末端均为GADDVVDSSK,C-末端均为FEIKS,质量肽图的紫外图谱高度一致,肽段覆盖率为100%,一级结构与标准CRM197蛋白氨基酸序列完全一致。3批CRM197蛋白二级结构测算值比例差异不大,批间稳定。结论本公司自制的3批CRM197蛋白与标准CRM197蛋白结构基本一致,为研制以CRM197为载体蛋白的多糖-蛋白结合疫苗及其产业化生产奠定了基础。
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关键词
白喉毒素
无毒突变体
CRM197蛋白
结构确证
肽段覆盖率
圆二色谱法
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Keywords
Diphtheria toxin
Avirulent mutant
CRM197 protein
Structure confirmation
peptide coverage
Circular dichroism
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分类号
R373.21
[医药卫生—病原生物学]
R392-33
[医药卫生—基础医学]
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题名两种用于液质联用分析的蛋白质酶解处理效果比较
被引量：1
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作者
潘丽梅
韦树根
付强
谭芸
朱佳杰
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机构
广西药用植物园
广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室
广西水产科学研究院
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出处
《广西科学》
CAS
2015年第6期612-615,619,共5页
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基金
广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室开放课题(GXKLAQUA-2014-01)
广西壮族自治区水产科学研究院基本科研业务基金项目(GXIF-2014-12)资助
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文摘
【目的】分析和评估两种蛋白质溶液酶解方法,为蛋白质组学研究中的大规模质谱鉴定分析建立一种稳定的样品制备技术。【方法】分别使用TEAB法(实验组A)和TFE法(实验组B)对牛血清白蛋白(BSA)进行还原、烷基化和溶液酶解,再用LTQ-Orbitrap高分辨率质谱仪采集BSA酶切肽段信息,比较两种方法得到的数据信息,分析肽段数目、可变修饰位点和蛋白质覆盖率。【结果】实验组A(TEAB法)获得36个肽段、39个修饰位点,蛋白质平均覆盖率为59.31%;实验组B(TFE法)获得27个肽段、27个修饰位点,蛋白质平均覆盖率为47.83%,实验组A的数据指标与实验组B差异显著。【结论】采用TEAB法酶切体系能实现蛋白质高效率酶切,达到获得较高肽段覆盖率的目的,可为蛋白质组学后期的质谱分析鉴定奠定实验基础。
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关键词
溶液酶解
蛋白质
液质联用
覆盖率
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Keywords
in-solution enzymatic digestion
proteins
LC-MS
peptides coverage
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分类号
Q51
[生物学—生物化学]
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题名用于质谱鉴定蛋白质胶内酶解方法的优化
被引量：6
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作者
胡炜
付强
朱平川
杨丽
刘振方
张明
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机构
亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室
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出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
2011年第7期802-805,共4页
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基金
国家自然科学基金项目(30860192)
广西自然科学基金项目(桂科自0991047)
广西科技基础条件平台建设项目(09-007-01)
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文摘
【目的】提高蛋白质胶内酶解效率,减少萃取过程中肽段的损失,增加质谱鉴定的成功率。【方法】在常规胶内酶解方法的基础上,优化脱色、酶解、萃取等步骤,包括:用铁氰化钾和硫代硫酸钠对银染胶块脱色,酶解温度提高至55℃,以40mmol/L碳酸氢铵作为酶切缓冲液,使用50%乙腈(ACN)水溶液3步萃取;并使用一步法胶内酶解探索快速胶内酶解方法。【结果】使用铁氰化钾和硫代硫酸钠可在短时间内将银染胶块完全脱色,55℃温浴可使酶切时间由20h减少为2h,以40mmol/L碳酸氢铵作为酶切缓冲液,可省去ZipTip脱盐步骤。优化后,质谱鉴定率提高30.0%(绝对值),且能明显高酶切效率,使目标肽段更高丰度地呈现出来。【结论】优化后的胶内酶解法可显著提高蛋白质胶内酶解的质谱鉴定成功率和肽段覆盖率,其中一步法胶内酶解法有效减少了胶内酶解时间和步骤,可用于高丰度蛋白质的快速质谱检测。
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关键词
胶内酶解
质谱鉴定
成功率
肽段覆盖率
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Keywords
in-gel digestion
mass spectrometry identification
ratio of peptides coverage
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分类号
Q503
[生物学—生物化学]
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