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HPV16 E6蛋白与hDaxx在HeLa细胞的定位及对凋亡的影响 被引量:5
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作者 陈苏芳 朱翠明 +4 位作者 唐双阳 余敏君 粟盛梅 阳帆 万艳平 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期400-403,共4页
目的探讨外源人乳头瘤病毒16型E6蛋白(HPV16E6)与人Daxx蛋白(hDaxx)在HeLa细胞内的亚细胞定位及诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法Western印迹法检测融合蛋白DsRed—HPV16E6和EGFP—hDaxx的表达。激光共聚焦显微镜观察HPV16E6和hDaxx的... 目的探讨外源人乳头瘤病毒16型E6蛋白(HPV16E6)与人Daxx蛋白(hDaxx)在HeLa细胞内的亚细胞定位及诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法Western印迹法检测融合蛋白DsRed—HPV16E6和EGFP—hDaxx的表达。激光共聚焦显微镜观察HPV16E6和hDaxx的亚细胞定位。将HeLa细胞分为对照组、TNF—α处理组、转染空载体组、转染HPV16E6组、共转染HPV16E6和hDaxx组。后4组均经TNFTNF-α诱导。用流式细胞仪测定细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-8与Caspase-3的相对活性。结果融合蛋白DsRed—HPV16E6和EGFP—hDaxx在细胞内表达并分布于胞质与胞核,出现共定位现象,且部分hDaxx从胞核转移至胞质。转染E6组凋亡率(21.4%±1.1%)低于转染空载体组(27.0%±0.9%,P〈0.01);与转染E6组相比较,共转染组凋亡率(32.5%±2.1%)显著升高(P〈0.01)。转染E6组Caspase-8和Caspase-3相对活性分别为0.057±0.003、0.054±0.006,均低于空载体组(0.092±0.012、0.093±0.005,均P〈0.01);与转染E6组相比较,共转染组Caspase-8和Caspase-3相对活性(0.109±0.013、0.110±0.004)均显著升高(P值均〈0.01)。结论HPV16E6使部分hDaxx从胞核转位至胞质,二者发生共定位。HPV16E6蛋白可抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡,hDaxx高表达可下调HPV16E6蛋白这种作用。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16 乳状瘤病毒e6蛋白质类 细胞凋亡 HeLA细胞
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血清miRNA-9-5p、miRNA-21-5p和miRNA-3923对子宫颈癌的诊断价值 被引量:2
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作者 王沛 王福花 +2 位作者 王晓娟 王晓燕 王春艳 《肿瘤研究与临床》 CAS 2021年第10期725-730,共6页
目的探讨血清miRNA-9-5p(miR-9-5p)、miRNA-21-5p(miR-21-5p)和miRNA-3923(miR-3923)对子宫颈癌的诊断价值。方法收集2016年7月至2018年6月山西省肿瘤医院收治的100例子宫颈癌患者(子宫颈癌组)和同期100名健康体检者(健康对照组)资料。... 目的探讨血清miRNA-9-5p(miR-9-5p)、miRNA-21-5p(miR-21-5p)和miRNA-3923(miR-3923)对子宫颈癌的诊断价值。方法收集2016年7月至2018年6月山西省肿瘤医院收治的100例子宫颈癌患者(子宫颈癌组)和同期100名健康体检者(健康对照组)资料。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)结合探针杂交检测子宫颈癌患者石蜡包埋组织和健康对照者子宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA的表达水平, 以Ct值≤40个循环为HPV E6/E7阳性。取3例子宫颈癌患者与3名健康对照者血清样本, 采用微RNA(miRNA)Array检测384个miRNA基因表达量, 并进行差异miRNA表达筛选及聚类分析, 采用qRT-PCR对筛选的miRNA进行验证。绘制最终筛选的各miRNA及HPV E6/E7单独或联合诊断子宫颈癌的受试者工作特征(ROC)曲线, 比较诊断子宫颈癌效能。结果 100例子宫颈癌患者石蜡包埋组织中, HPV E6/E7阳性65例(65%);100名健康对照者子宫颈脱落细胞HPV E6/E7均为阴性。3例子宫颈癌患者与3名健康对照者血清样本中发现248个差异表达的miRNA, 经聚类分析鉴定出前16个调控异常miRNA。经qRT-PCR验证, 确认在健康对照组和子宫颈癌组中miR-9-5p、miR-21-5p和miR-3923表达水平差异均有统计学意义(均P<0.01), 选取三者用于后续子宫颈癌的诊断。与健康对照组比较, HPV E6/E7阳性子宫颈癌组miR-9-5p、miR-21-5p和miR-3923表达水平均增高(均P<0.05), HPV E6/E7阴性子宫颈癌组miR-21-5p和miR-3923表达水平均增高(P=0.008和P=0.038);HPV E6/E7阳性组3个miRNA表达水平均高于HPV E6/E7阴性组(均P<0.05)。经ROC曲线分析, miR-9-5p、miR-21-5p和miR-3923单独诊断子宫颈癌时, miR-3923的曲线下面积(AUC)最大(0.843), 特异度也最高(82%, 截断值为2.88);miR-21-5p的灵敏度最高(85%, 截断值为4.08);3个miRNA联合诊断子宫颈癌的AUC(0.924)和灵敏度、特异度(85%、94%, 截断值为4.04)均高于单一指标。HPV E6/E7单独诊断的AUC为0.766, miR-9- 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 微RNAS 乳头瘤病毒e6蛋白质类 乳头瘤病毒e7蛋白质类 诊断
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HPV52 E6和E7基因多态性与宫颈上皮内瘤变相关性 被引量:1
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作者 王巧祎 赵希芹 +3 位作者 郭雨辰 张璐 李晓欣 王云 《青岛大学学报(医学版)》 CAS 2022年第5期667-671,共5页
目的探讨人乳头瘤病毒52型(HPV52)E6和E7基因多态性与宫颈上皮内瘤变(CIN)的相关性。方法收集来自青岛地区的177例HPV52阳性且进行宫颈活检病人的宫颈脱落细胞样本,采用PCR直接测序法检测E6和E7基因序列,在GenBank中剪切HPV52标准株和... 目的探讨人乳头瘤病毒52型(HPV52)E6和E7基因多态性与宫颈上皮内瘤变(CIN)的相关性。方法收集来自青岛地区的177例HPV52阳性且进行宫颈活检病人的宫颈脱落细胞样本,采用PCR直接测序法检测E6和E7基因序列,在GenBank中剪切HPV52标准株和变异株序列,应用Lasergene和MEGA软件对序列进行比对和系统进化树分析。比较正常、低级别上皮内瘤变(CIN1)和高级别上皮内瘤变(CIN2/3)样本中E6和E7基因变异型的分布。结果138例样本成功获得E6和E7基因序列。与标准株比较,132例(95.7%)样本在E6区同时出现1处错义突变(K93R)和1处同义突变(g350t),经系统进化树分析,确定为B变异型;其余样本有5例(3.6%)属于A变异型,1例(0.7%)属于C变异型。135例(97.8%)样本在E7区同时出现2处同义突变(c751t和a801g),为B变异型;其余样本有2例(1.5%)属于A变异型,1例(0.7%)属于C变异型。正常、CIN1和CIN2/3样本之间E6和E7变异型的分布差异均无显著性(P>0.05)。结论来自青岛地区正常及CIN样本中HPV52 E6和E7基因均以亚洲株B变异型为主,E6和E7基因多态性可能与CIN发生发展无明显相关性。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒52 乳头瘤病毒e6蛋白质类 乳头瘤病毒e7蛋白质类 宫颈上皮内瘤样病变 多态性 单核苷酸
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HPV16 E6蛋白与hDaxx的相互作用及其对HeLa细胞凋亡的影响
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作者 王鑫 朱翠明 +4 位作者 刘安元 尹卫国 李金丽 蔡恒玲 万艳平 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期293-296,共4页
目的:研究HPV16 E6(human papillomavirus type16 E6)蛋白与hDaxx(human death domain associated protein)的相互作用及其对HeLa细胞凋亡的影响,为探索HPV16 E6蛋白的致癌机制提供实验依据。方法:构建pGADT7-E6和pGBKT7-hDaxx重组载体... 目的:研究HPV16 E6(human papillomavirus type16 E6)蛋白与hDaxx(human death domain associated protein)的相互作用及其对HeLa细胞凋亡的影响,为探索HPV16 E6蛋白的致癌机制提供实验依据。方法:构建pGADT7-E6和pGBKT7-hDaxx重组载体,利用酵母双杂交系统检测HPV16 E6蛋白与hDaxx的相互作用,并用Western印迹法检测二者在酵母菌中的表达。将E6与hDaxx的真核表达载体共转染HeLa细胞,用5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导凋亡,FCM法检测凋亡率。结果:E6蛋白与hDaxx在细胞内存在相互作用。共转染pcDNA3.1(-)/E6和pcDNA3.1(-)/hDaxx的HeLa细胞,随pcDNA3.1(-)/hDaxx转染量的增加凋亡率上升,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HPV16 E6蛋白与hDaxx在细胞内相互作用,hDaxx过表达可提高表达E6蛋白的HeLa细胞对5-FU的敏感性,且这种关系存在剂量依赖性。E6蛋白可能通过和hDaxx的相互作用抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 乳头瘤病毒e6蛋白质类 HeLA细胞 双杂交系统技术 细胞凋亡 蛋白hDaxx
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HPV16型E6蛋白单克隆抗体制备及检测 被引量:1
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作者 杨潇 程艳香 《中华实用诊断与治疗杂志》 2016年第6期552-555,共4页
目的制备人乳头瘤状病毒(human papillomavirus,HPV)16型E6蛋白单克隆抗体并对其进行检测。方法 15只Balb-c小鼠分为3组,各5只。设计3条HPV16E6抗原多肽分别对3组小鼠进行免疫,筛选得到对B细胞表位有较高活性的线性多肽HPE601,并用该组... 目的制备人乳头瘤状病毒(human papillomavirus,HPV)16型E6蛋白单克隆抗体并对其进行检测。方法 15只Balb-c小鼠分为3组,各5只。设计3条HPV16E6抗原多肽分别对3组小鼠进行免疫,筛选得到对B细胞表位有较高活性的线性多肽HPE601,并用该组的小鼠脾脏制备杂交瘤细胞。采用间接ELISA法对小鼠血清进行阳性克隆筛选和检测抗体效价,采用考马斯亮蓝染色鉴定抗体纯度,采用标准曲线计算抗体浓度,采用Western blot法检测并采用间接免疫荧光法验证纯化E6抗体对Caski、Hela和正常宫颈上皮细胞核蛋白特异性结合情况。行宫颈组织活检患者20例,其中HPV16型宫颈组织7例,HPV18型宫颈组织6例和正常宫颈组织7例,采用免疫荧光法检测单克隆抗体对3种组织的检出率。结果制备得到单克隆抗体Whu001,经鉴定抗体纯度较好,该克隆能特异性识别HPV16型E6蛋白;Whu001对HPV16型组织的检出率(80%)明显高于HPV18型宫颈组织(15%)和正常宫颈组织(0),差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功筛选出了针对HPV16E6抗原的单克隆抗体,其对HPV16的诊断具有特异性,为在蛋白水平上检测HPV E6蛋白提供了新途径。 展开更多
关键词 单克隆抗体 HPV16e6蛋白 Balb-c小鼠
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HPV16-E6、ID-1及Pin1在宫颈癌组织中的表达及相关性分析
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作者 叶薇 《包头医学院学报》 CAS 2024年第12期82-86,共5页
目的:分析人乳头瘤病毒16型E6蛋白(Human papillomavirus type 16 E6 protein,HPV16-E6)、细胞分化抑制因子-1(Inhibitor of intracellular differentiation-1,ID-1)及脯氨酰顺反异构酶1(Prolylcis-trans isomerase1,Pin1)在宫颈癌组织... 目的:分析人乳头瘤病毒16型E6蛋白(Human papillomavirus type 16 E6 protein,HPV16-E6)、细胞分化抑制因子-1(Inhibitor of intracellular differentiation-1,ID-1)及脯氨酰顺反异构酶1(Prolylcis-trans isomerase1,Pin1)在宫颈癌组织中的表达及相关性。方法:选择2017年3月至2022年3月莆田学院附属医院收治的宫颈癌65例,所有患者均在我院进行手术切除癌组织,并留取宫颈癌组织和距离癌组织边缘2 cm以上癌旁组织。通过免疫组化法对癌组织、癌旁组织标本HPV16-E6、ID-1、Pin1阳性表达率进行检测。分析HPV16-E6、ID-1、Pin1与临床特征的关系。结果:与癌旁组织相比,癌组织中HPV16-E6、ID-1、Pin1阳性率较高(P<0.05)。HPV16-E6、ID-1、Pin1与肌层浸润深度、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、肿瘤直径呈正相关(P<0.05)。将年龄、病理类型等因素控制后,HPV16-E6、ID-1、Pin1与肌层浸润深度、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、肿瘤直径相关(P<0.05)。结论:HPV16-E6、ID-1、Pin1在宫颈癌患者中均呈高表达,且HPV16-E6、ID-1、Pin1与宫颈癌患者肌层浸润深度、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、肿瘤直径相关。 展开更多
关键词 宫颈癌 人乳头瘤病毒16e6蛋白 内细胞分化抑制因子-1 脯氨酰顺反异构酶1
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HPV1618型E6蛋白和PKRp-PKR在宫颈病变的表达及意义
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作者 王喜凤 《当代医学》 2021年第15期90-92,共3页
目的探究HPV1618型E6蛋白和PKRp-PKR在宫颈病变的表达及意义。方法选取2018年2月至2019年10月在本院就诊的62例宫颈癌患者(甲组)、105例宫颈上皮内瘤样病变患者(CINⅠ33例、CINⅡ37例、CINⅢ35例,乙组)以及20例宫颈健康者(丙组)作为研... 目的探究HPV1618型E6蛋白和PKRp-PKR在宫颈病变的表达及意义。方法选取2018年2月至2019年10月在本院就诊的62例宫颈癌患者(甲组)、105例宫颈上皮内瘤样病变患者(CINⅠ33例、CINⅡ37例、CINⅢ35例,乙组)以及20例宫颈健康者(丙组)作为研究对象,采用免疫组化法检测HPV1618型E6蛋白、蛋白激酶R、磷酸化型蛋白激酶R,比较3组表达情况。结果3组E6蛋白、蛋白激酶R阳性表达率呈正相关(P<0.05)。甲组蛋白激酶R阳性表达率明显高于磷酸化型蛋白激酶R(P<0.05)。E6蛋白、蛋白激酶R的阳性表达率与宫颈病变级别呈正相关(P<0.05)。宫颈癌病情进展与E6蛋白、磷酸化型蛋白激酶R阳性表达率相关(P<0.05)。结论HPV1618感染可抑制蛋白激酶R激活,突破防御机制,不利于疾病预后,磷酸化型蛋白激酶R可抑制疾病进展,改善预后。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒1618型e6蛋白 蛋白激酶R 磷酸化型蛋白激酶R 宫颈病变 表达
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