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紫杉醇-比伐卢定球囊涂层复合物调控NF-κB与Nrf2/ARE通路抗HCASMC增殖迁移的机制研究
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作者 李红梅 李海燕 《中国循证心血管医学杂志》 2023年第8期936-940,945,共6页
目的 基于人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)核因子κB(NF-κB)与重组合成蛋白2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)双通路活化模型探索紫杉醇-比伐卢定球囊涂层复合物(LFN)抑制HCASMC增殖迁移抗介入术后再狭窄的微观机理。方法 选用4~6代的HCASMC,... 目的 基于人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)核因子κB(NF-κB)与重组合成蛋白2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)双通路活化模型探索紫杉醇-比伐卢定球囊涂层复合物(LFN)抑制HCASMC增殖迁移抗介入术后再狭窄的微观机理。方法 选用4~6代的HCASMC,利用脂多糖(LPS)作为诱导剂,最大化激活NF-κB与Nrf2/ARE双通路,构建LPS诱导HCASMC炎性和氧化应激双通路活化细胞模型。在此基础上,将体外培养的HCASMC分为空白对照组、LPS造模组及LPS造模+LFN复合物干预组,用CCK-8法检测LFN对HCASMC增殖率的影响,同时用免疫荧光法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达量确证细胞增殖状态。进而用Transwell法检测LFN对HCASMC迁移、侵袭能力的影响,并用免疫荧光单染法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)、NF-κB p65和Nrf2的表达变化,探索LFN对HCASMC表型转化的影响,并探究其对HCASMC中活化的NF-κB与Nrf2/ARE通路关键蛋白的调控作用,继而结合Q-PCR和Western blotting明确LFN干预后双通路关键位点基因和蛋白表达的变化,深入挖掘LFN调控炎性和氧化应激活化的HCASMC增殖迁移的潜在机制。结果 1μmol/L的紫杉醇配比0.2 mg/ml比伐卢定对造模活化后的HCASMC增殖状态具有明显抑制作用,减弱了HCASMC迁移和侵袭能力,并将活化后分泌型的HCASMC转换为收缩型。此外,与LPS造模组相比,LFN通过激活人核因子κB抑制蛋白α(IκBα)表达、阻碍NF-κB活化入核,截断了炎症过程,同时抑制胞质接头蛋白1(Keap-1)表达、促进Nrf2核转位、激活下游醌氧化还原酶1(NQO-1)和人血红素加氧酶1(HO-1)基因和蛋白表达(P<0.05),大幅减缓了胞内氧化应激状态。结论 LFN对NF-κB与Nrf2/ARE双通路活化的HCASMC胞内炎症和氧化应激状态具有显著抑制作用,此抑制作用通过调控NF-κB与Nrf2/ARE通路中核转录因子及其配体表达、影响通路下游效应分子活化而实现,为LFN涂层球囊抗经皮冠状动脉� 展开更多
关键词 紫杉醇-比伐卢定球囊涂层复合物 人冠状动脉平滑肌细胞 炎症与氧化应激 NF-κB与Nrf2/ARE信号通路 调控机理
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