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逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测轮状病毒 被引量：14
1
作者 倪艳秀 林继煌 +2 位作者 陆承平 江杰元 何孔旺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期437-440,共4页
为了给轮状病毒感染的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段，选取Ａ组轮状病毒ＶＰ７基因上的２段高度保守序列作为引物，在优化逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）条件的基础上，建立了检测轮状病毒的ＲＴ－ＰＣＲ方法。通... 为了给轮状病毒感染的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段，选取Ａ组轮状病毒ＶＰ７基因上的２段高度保守序列作为引物，在优化逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）条件的基础上，建立了检测轮状病毒的ＲＴ－ＰＣＲ方法。通过对比试验，确定了ＰＣＲ的最优模式：９４℃变性１ｍｉｎ→５５℃退火１ｍｉｎ→７２℃延伸２ｍｉｎ，３０个循环后再在７２℃下延伸１０ｍｉｎ。用此模式进行了ＲＴ－ＰＣＲ的特异性和敏感性试验。检测的６株轮状病毒分离株（牛ＨＮ－７、ＢＲＶ００７、ＢＲＶ０１４、ＢＲＶ６５５５、猪Ｌｉ９９、Ｎａｎ８６）及２株参考株（牛ＮＣＤＶ、猴ＳＡ１１），都能扩增出唯一的３４２ｂｐ的目的条带；对猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）及传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）感染猪的粪样、正常ＭＡ１０４细胞检测结果均呈阴性；检测的敏感度可达１ｐｇ水平。对４０份猪、牛、兔的腹泻粪样检测，３０份呈阳性，而用作平行对照的夹心ＥＬＩＳＡ法检测，有２５份呈阳性，两者符合率为８７．５％。两法检测不符的５份粪样的ＰＣＲ扩增产物，用地高辛标记探针进行了斑点杂交，结果均呈阳性，表明ＲＴ－ＰＣＲ法比ＥＬＩＳＡ法敏感性高。 展开更多
关键词 轮状病毒 夹心ELISA pt-pcr 检测
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染料木素和槲皮素体外抗肝纤维化作用 被引量：17
2
作者 齐荔红 康鲁平 +3 位作者 张俊平 史宁 张珉 吴堂明 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期648-651,共4页
目的　研究染料木素和槲皮素对体外肝维化的保护作用。方法　细胞增殖和胶原合成分别用结晶紫染色法和3H 脯氨酸参入法。原胶原mRNA水平用RT PCR法测定。结果　染料木素 (2 5 - 70 μmol·L- 1 )和槲皮素 (6 2 5- 5 0 μmol·L... 目的　研究染料木素和槲皮素对体外肝维化的保护作用。方法　细胞增殖和胶原合成分别用结晶紫染色法和3H 脯氨酸参入法。原胶原mRNA水平用RT PCR法测定。结果　染料木素 (2 5 - 70 μmol·L- 1 )和槲皮素 (6 2 5- 5 0 μmol·L- 1 )浓度依赖抑制PDGF促HSC T6细胞增殖和TGFβ1 刺激的胶原合成及I型原胶原mRNA的表达。结论　染料木素和槲皮素抑制PDGF和TGFβ1 展开更多
关键词 染料木素 槲皮素 抗纤维化作用 肝纤维化 MRNA pt-pcr
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应用RT-nested PCR检测猪传染性胃肠炎病毒 被引量：8
3
作者 王玉洁 刘金龙 +2 位作者 彭树英 杨瑞锋 张涌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第2期23-26,共4页
　根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,利用Primer5.0程序软件,设计并合成了M基因的2对引物,以mRNA为模板,通过RT-PCR,RT-nestedPCR方法,成功扩增出长度为1328bp和1037bp的TGEV目的片段,但未扩增出猪传染性腹泻病毒... 　根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,利用Primer5.0程序软件,设计并合成了M基因的2对引物,以mRNA为模板,通过RT-PCR,RT-nestedPCR方法,成功扩增出长度为1328bp和1037bp的TGEV目的片段,但未扩增出猪传染性腹泻病毒(PEDV)片段。在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了快速检测TGEV的诊断方法。结果表明,RT-nestedPCR方法可用于检测猪传染性胃肠炎病毒,而且此方法简单省时、灵敏性高,可以作为检测RNA病毒的一种分子生物学方法。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 RT-pcr RT-nested pcr M基因
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传染性法氏囊病病毒中国强毒株A节段cDNA基因的克隆和序列分析 被引量：8
4
作者 胡子信 张曼夫 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期330-338,共9页
以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 强毒株（Ｈａｒｂｉｎ 毒株，Ｈ） 的基因组ＲＮＡ为模板，用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 的方法得到了其Ａ 节段的全长ｃＤＮＡ 片段，分５＇端（１ ６５９ｂｐ） 和３＇端（１ ... 以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 强毒株（Ｈａｒｂｉｎ 毒株，Ｈ） 的基因组ＲＮＡ为模板，用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 的方法得到了其Ａ 节段的全长ｃＤＮＡ 片段，分５＇端（１ ６５９ｂｐ） 和３＇端（１ ４４４ｂｐ） 上下两段分别克隆到ｐＧＥＭＢ○Ｒ － Ｔ 载体上，测定了其核苷酸顺序，在长为３ １０１ ｂｐ 中含有两个阅读框ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ ，分别编码１ ０１２ 个氨基酸的前体蛋白（ＶＰ２ － ４ －３） 和１４５ 个氨基酸的ＶＰ５，ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ 有部分的重叠。将核苷酸序列及推测出的氨基酸序列与已报道的ＩＢＤＶ 血清Ⅰ型和Ⅱ型毒株的相应序列进行了比较，结果表明：Ｈ 毒株与其它血清Ⅰ型毒株之间，在核苷酸水平上存在２５ｂｐ － ２６７ｂｐ 的差异；在氨基酸水平上存在１７ ～４０ 个氨基酸的差异。在ＶＰ２ － ４ － ３ 内比较显示，Ｈ 毒株与Ｐ２ 、Ｃｕ－ １ 之间氨基酸的差异最小为１ ．７％ ，Ｈ 毒株与ＵＫ６６１ 之间氨基酸的差异最大为３ ．９ ％ 。变异主要发生在ＶＰ２ 的可变区（２０６ － ３５０ 位氨基酸） ，在Ｈ 毒株所特有的１２ 个氨基酸当中，该区就占５ 个，代表１ ．７６ ％ 的变异。ＶＰ４、ＶＰ３ 展开更多
关键词 pt-pcr 序列分析 IBDV 疫苗 基因克隆
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差异显示技术及其进展 被引量：6
5
作者 陈中健 王金发 《生物工程进展》 CSCD 1998年第5期21-25,共5页
差异显示技术是在转录水平上研究基因表达差异的有效方法。它通过一系列的锚定引物与随机引物组合把不同种细胞的ｍＲＮＡ进行分组反转录及ＰＣＲ扩增，在相邻泳道上显示扩增结果，通过比较电泳图谱找出差异。差异显示技术建立至今仅五... 差异显示技术是在转录水平上研究基因表达差异的有效方法。它通过一系列的锚定引物与随机引物组合把不同种细胞的ｍＲＮＡ进行分组反转录及ＰＣＲ扩增，在相邻泳道上显示扩增结果，通过比较电泳图谱找出差异。差异显示技术建立至今仅五年时间便在分析基因表达差异、绘制遗传图谱、分离特异性表达基因、临床诊断遗传疾病等方面被广泛应用，并不断得到改进和完善。 展开更多
关键词 差异显示 精简杂交 pt-pcr
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前列腺癌细胞中NSBP1基因表达上调 被引量：10
6
作者 王建伟 周利群 +4 位作者 杨学贞 艾军魁 辛殿祺 那彦群 郭应禄 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第4期393-397,共5页
明确用mRNA差异显示技术 (mRNA DD)筛选出的前列腺癌相关基因NSBP1(NucleosomalBindingProtein 1)在前列腺癌细胞系的表达情况。在GenBankNR数据库中对筛选出的 5条差异表达序列标签 (EST)进行同源性分析 ,其中 1条与已知基因NSBP1高度... 明确用mRNA差异显示技术 (mRNA DD)筛选出的前列腺癌相关基因NSBP1(NucleosomalBindingProtein 1)在前列腺癌细胞系的表达情况。在GenBankNR数据库中对筛选出的 5条差异表达序列标签 (EST)进行同源性分析 ,其中 1条与已知基因NSBP1高度同源 (97% )。半定量RT PCR结果显示在LNCaP、DU14 5及PC 3前列腺癌细胞系中NSBP1mRNA的表达水平分别高于正常前列腺组织 2 5倍、3 4倍和 3 6倍 ,与Northern杂交分析结果趋势一致。7例前列腺癌组织的RT PCR结果也体现了相同的表达趋势 ,NSBP1表达较配对正常前列腺组织增高 ,差异有统计学意义。以上结果表明NSBP1基因在前列腺癌细胞系和组织中的表达均明显高于正常前列腺组织 ,NSBP 1表达上调可能参与了前列腺癌的发生发展过程。 展开更多
关键词 前列腺癌细胞 基因表达 正常 癌组织 上调 pt-pcr PC-3 序列标签 RNA 表达水平
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非灰髓炎肠道病毒与婴幼儿急性下呼吸道感染关系的研究 被引量：10
7
作者 罗荣 董永绥 +1 位作者 方峰 李革 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2000年第8期471-473,共3页
目的　了解非灰髓炎肠道病毒 (EV)感染在婴幼儿急性下呼吸道感染 (ALRI)中的发病情况、临床特点及诊断方法。方法　①采用通用引物RT -PCR及病毒分离检测全年住院ALRI婴幼儿鼻咽分泌物 (NPS)中的EV。②并用APAAP法检测RSV、IFV、PIV和Ad... 目的　了解非灰髓炎肠道病毒 (EV)感染在婴幼儿急性下呼吸道感染 (ALRI)中的发病情况、临床特点及诊断方法。方法　①采用通用引物RT -PCR及病毒分离检测全年住院ALRI婴幼儿鼻咽分泌物 (NPS)中的EV。②并用APAAP法检测RSV、IFV、PIV和AdV ,以资比较。结果　①观察组 87例NPS中RT -PCR阳性 40例 ,EV分离阳性 2 6例。②阳性病例中同时检出其它呼吸道病毒 2 6例。结论　①近半数住院ALRI婴幼儿存在EV感染 ,且常与其它呼吸道病毒混合感染。②EV -RT -PCR较EV分离敏感、实用。 展开更多
关键词 非灰髓炎肠道病毒 婴幼儿 下呼吸道感染 pt-pcr
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中国猪瘟兔化弱毒兔脾组织毒部分基因序列分析 被引量：7
8
作者 韩雪清 李红卫 +10 位作者 刘湘涛 李小兵 马军武 涂长春 胡弘博 殷震 蒋帅 刘伯华 李健强 李忠润 谢庆阁 《中国兽医科技》 CSCD 1998年第6期12-16,共5页
利用反转录（ＲＴ）及套式ＰＣＲ（ＮＰＣＲ）方法，获得了中国猪瘟兔化弱毒（ＨＣＬＶ）兔脾组织毒５１１０个碱基（２２４０～７３５０）的扩增片段，包括其结构蛋白基因ｇｐ５５和非结构蛋白基因ｐ５４及ｐ８０，将其克隆于测序载... 利用反转录（ＲＴ）及套式ＰＣＲ（ＮＰＣＲ）方法，获得了中国猪瘟兔化弱毒（ＨＣＬＶ）兔脾组织毒５１１０个碱基（２２４０～７３５０）的扩增片段，包括其结构蛋白基因ｇｐ５５和非结构蛋白基因ｐ５４及ｐ８０，将其克隆于测序载体中，通过测序确定了这些基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 基因 序列分析 pt-pcr
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急性湿疹患者外周血环氧合酶同工酶的研究 被引量：1
9
作者 贾国泉 陈志强 刘训荃 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期487-488,共2页
探讨两种环氧合酶同工酶(COX-1和COX-2)在急性泛发性湿疹患者外周血单个核细胞中(PBMC)的表达水平及其意义。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了15例急性泛发性湿疹患者和30名健康对照PBMC中COX-1和COX-2mRNA的表达水平。结果表明... 探讨两种环氧合酶同工酶(COX-1和COX-2)在急性泛发性湿疹患者外周血单个核细胞中(PBMC)的表达水平及其意义。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了15例急性泛发性湿疹患者和30名健康对照PBMC中COX-1和COX-2mRNA的表达水平。结果表明急性泛发性湿疹患者PBMC中COX-2mRNA的平均表达水平明显高于健康对照组,有非常显著差异(P<0.01),且与湿疹面积严重度积分(EASI)有正相关性(P<0.01);而COX-1的平均表达水平与健康对照组无统计学差异(P>0.05)。提示急性泛发性湿疹患者PBMC中COX-2mRNA表达增加可能通过诱导前列腺素(PGs)及其代谢产物参与急性泛发性湿疹的发病过程。 展开更多
关键词 急性湿疹 外周血 环氧合酶同工酶 单个核细胞 前列腺素 pt-pcr
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导致氨基糖苷类药物双圈耐药型鲍曼不动杆菌的相关携带基因研究 被引量：7
10
作者 张晓文 邵海枫 +1 位作者 王卫萍 李晓军 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期19-21,共3页
目的探讨在K-B法药物敏感试验中对氨基糖苷类抗菌药物双圈耐药的鲍曼不动杆菌耐药基因携带状况及药物诱导对耐药基因mRNA表达量的影响。方法收集42株携带Ⅰ类整合子酶基因的鲍曼不动杆菌;PCR法扩增其整合子可变区;联合RFLP和DNA测序技... 目的探讨在K-B法药物敏感试验中对氨基糖苷类抗菌药物双圈耐药的鲍曼不动杆菌耐药基因携带状况及药物诱导对耐药基因mRNA表达量的影响。方法收集42株携带Ⅰ类整合子酶基因的鲍曼不动杆菌;PCR法扩增其整合子可变区;联合RFLP和DNA测序技术分析可变区耐药基因;用RT-PCR的方法分析药物诱导前后细菌耐药基因表达量。结果 90.4%(38/42)的整合子阳性菌株可变区扩增片段大小为2300bp左右。RFLP分型和DNA测序结果表明,整合子可变区携带的基因盒为aacA4-catB-aadA1。RT-PCR结果显示经阿米卡星诱导后细菌aacA4基因mRNA表达量显著上升。结论氨基糖苷类药物双圈耐药型菌株的Ⅰ类整合子中主要携带氨基糖苷类耐药基因,双圈现象可能与整合子携带的耐药基因诱导型表达有关。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 氨基糖苷类药物 双圈耐药 RT-pcr
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胃癌组织中FHIT基因的异常表达 被引量：3
11
作者 张桂英 段晓明 田芳 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期5-6,共2页
探讨FHIT基因与胃癌关系。方法 :采用PT -PCR及PCR产物直接测序法 ,对 2 6例胃癌组织及其配对正常组织的FHIT基因进行检测。结果 :7例 (2 6 .9% )胃癌组织存在异常FHIT转录本的表达 ,其中 1例无正常FHIT转录本的表达 ;另 6例同时存在正... 探讨FHIT基因与胃癌关系。方法 :采用PT -PCR及PCR产物直接测序法 ,对 2 6例胃癌组织及其配对正常组织的FHIT基因进行检测。结果 :7例 (2 6 .9% )胃癌组织存在异常FHIT转录本的表达 ,其中 1例无正常FHIT转录本的表达 ;另 6例同时存在正常FHIT转录本的表达 ;配对正常组织均无异常FHIT转录本的表达 ;测序证实异常转录本缺失 1个或 1个以上FHIT外显子。结论 :FHIT转录本的异常是胃癌中常见的和肿瘤特有的改变 ,FHIT基因的异常与我国部分胃癌的发生有关。 展开更多
关键词 胃肿瘤 FHIT基因 pt-pcr 异常转录本
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胃癌组织中EB病毒的检测及其增殖期基因的表达 被引量：6
12
作者 王云 罗兵 +1 位作者 王笑峰 阎丽平 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2004年第3期217-221,共5页
目的 :探讨EB病毒 (Epstein Barrvirus ,EBV)感染与胃癌发生的关系及其增殖期基因在EBV阳性胃癌发生中的作用。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR) Southern杂交检测 185例胃癌组织和相应癌旁组织中特异性EBVDNA片段 ,PCR阳性标本用原位杂交... 目的 :探讨EB病毒 (Epstein Barrvirus ,EBV)感染与胃癌发生的关系及其增殖期基因在EBV阳性胃癌发生中的作用。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR) Southern杂交检测 185例胃癌组织和相应癌旁组织中特异性EBVDNA片段 ,PCR阳性标本用原位杂交 (ISH)技术检测石蜡切片组织中EBV编码小RNA 1(EBER1)的表达 ,以确定EBV阳性胃癌。再应用RT PCR和Southern杂交技术检测EBV增殖期基因 (即刻早期基因BZLF1、BRLF1,早期基因BARF1、BHRF1,晚期基因BcLF1、BLLF1)的表达。结果 :13例胃癌组织EBV阳性 (7.0 3% ) ,癌旁组织未检测到EBV感染 ,胃癌和癌旁组织中EBV阳性率有显著性差异 (χ2 =11.0 76 9,P =0 .0 0 0 9)。EBV阳性和阴性胃癌在年龄、病理类型、临床分期、淋巴结转移和发生部位的差别均无显著性 (P =0 .973,0 .14 1,0 .2 5 9,0 .5 86 ,0 .0 6 2 ) ,但性别之间的差异有显著性 ,男性EBV阳性率高于女性 (χ2 =5 .2 317,P =0 .0 2 1)。增殖期基因中即刻早期基因BZLF1有 6例表达阳性 ,而BRLF1均为阴性 ;早期基因中有 6例BARF1表达阳性 ,2例BHRF1表达阳性 ;晚期基因BcLF1有 7例表达阳性 ,而BLLF1均为阴性。结论 :EBV感染与胃癌的发生有一定的相关性 ,部分EBV阳性胃癌组织中存在EBV增殖性感染 ,早期基因BARF1和BHRF1在EBV阳? 展开更多
关键词 EB病毒 胃癌 增殖期基因 RT-pcr 原位杂交
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Fas/FasL mRNA在小细胞肺癌石蜡包埋组织中的表达及其临床意义 被引量：5
13
作者 宿杰 赵志龙 +3 位作者 黄青远 宗志红 张林 陈东义 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第22期3245-3248,共4页
目的探讨Fas、FasLmRNA在小细胞肺癌石蜡包埋组织中的表达情况及其临床意义。方法应用RT-PCR方法检测Fas、FasLmRNA在46例小细胞肺癌和相应的癌旁正常肺组织中的表达情况。结果46例小细胞肺癌中FasmRNA阳性表达率为47.8%,明显低于在正... 目的探讨Fas、FasLmRNA在小细胞肺癌石蜡包埋组织中的表达情况及其临床意义。方法应用RT-PCR方法检测Fas、FasLmRNA在46例小细胞肺癌和相应的癌旁正常肺组织中的表达情况。结果46例小细胞肺癌中FasmRNA阳性表达率为47.8%,明显低于在正常肺组织中的表达率(80.0%)P<0.05,FasLmRNA阳性表达率为58.7%,明显高于在正常肺组织中的表达率(35%)P<0.05,FasLmRNA在淋巴结转移和TNM分期中的表达差异有统计学意义,FasLmRNA表达阳性组患者累计生存率明显低于阴性组患者。结论FasmRNA低表达可能对SCLC发展起促进作用;FasLmRNA高表达可能与SCLC转移和预后相关。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 pt-pcr FAS MRNA FASL MRNA
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静安口服液对小儿多发性抽动症模型大鼠脑组织儿茶酚胺及其降解酶COMT的影响 被引量：4
14
作者 隆红艳 张骠 谈瑄忠 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期64-66,共3页
目的:观察静安口服液对小儿多发性抽动症(Tourette综合征)模型大鼠脑组织多巴胺(DA)和其代谢产物高香草酸(HVA)、去甲肾上腺素(NE)含量及儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)mRNA表达的影响。方法:Tourette综合征模型用ipDOI(连续20d)的方法,... 目的:观察静安口服液对小儿多发性抽动症(Tourette综合征)模型大鼠脑组织多巴胺(DA)和其代谢产物高香草酸(HVA)、去甲肾上腺素(NE)含量及儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)mRNA表达的影响。方法:Tourette综合征模型用ipDOI(连续20d)的方法,分为空白对照组、模型组、静安口服液组、硫必利组。DA、HVA、NE用HPLC法测定,PT-PCR法检测COMTmRNA表达水平。结果:静安口服液能降低脑组织中DA、HVA和NE含量(P<0.01),作用与硫必利相似;模型组COMTmRNA平均光密度比值显著低于空白对照组(P<0.05),静安口服液三个剂量组与其余各组无显著性差异。结论:TS的发病机制与儿茶酚胺过度释放,其降解酶COMT活性降低致儿茶酚胺灭活障碍、代谢亢进有关;静安口服液可能通过调整脑内DA、HVA和NE神经递质失衡,减少其异常释放,从而降低了突触前多巴胺神经元、去甲肾上腺素神经元的过度支配而发挥治疗作用。静安口服液未能影响COMTmR-NA的表达水平。 展开更多
关键词 静安口服液 小儿多发性抽动症 儿茶酚胺 儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT) pt—pcr
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THANK基因的克隆和序列分析 被引量：5
15
作者 吴东 沈锋 +2 位作者 娄永华 焦炳华 吴孟超 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期432-435,共4页
目的克隆THANK基因全长及胞 外区片段并测序。方法采用RT-PCR技术,从人白血 病细胞系HL-60细胞总RNA中扩增人THANK cDNA,并定向克隆于pMD-18 T载体,转 染大肠杆菌、抽提质粒后,用ABI PRISM^TM 377XL DNA自动测序仪测序。结果RT-PCR扩增... 目的克隆THANK基因全长及胞 外区片段并测序。方法采用RT-PCR技术,从人白血 病细胞系HL-60细胞总RNA中扩增人THANK cDNA,并定向克隆于pMD-18 T载体,转 染大肠杆菌、抽提质粒后,用ABI PRISM^TM 377XL DNA自动测序仪测序。结果RT-PCR扩增出一个858bp的DNA片段,限制性内 切酶图谱分析和测序结果显示:该858bp片段为编码人THANK的cDNA,与公布的人THANK 基因序列一致。结论本实验成功地克隆了人THANK基 因,为进一步表达人THANK基因并研究其功能,开发与临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人THANK基因 pt-pcr CDNA 克隆 免疫治疗 肿瘤
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急性心肌梗死后大鼠炎症细胞因子表达和心室重塑的关系 被引量：2
16
作者 张金盈 程翔 +1 位作者 廖玉华 逯保军 《河南医学研究》 CAS 2005年第2期110-113,共4页
目的:探讨急性心肌梗死(AMI)后大鼠心脏炎症细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-10基因表达和心室重塑的关系。方法:大鼠分2组,①假手术组(Sham),不结扎左冠状动脉前降支(LAD);②心肌梗死组(MI):结扎LAD。动物笼养4周,作超声心动图检查心... 目的:探讨急性心肌梗死(AMI)后大鼠心脏炎症细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-10基因表达和心室重塑的关系。方法:大鼠分2组,①假手术组(Sham),不结扎左冠状动脉前降支(LAD);②心肌梗死组(MI):结扎LAD。动物笼养4周,作超声心动图检查心脏结构和功能;然后处死大鼠,取出心脏,沿乳头肌等分为二,一半用RT-PCR法测定心脏细胞因子mRNA表达,另一半用Westernblot测定细胞因子蛋白生成量。结果:超声心动图显示,同Sham组相比,MI组LVEDd显著增加、FS和EF明显降低(P均<0.01)。Sham组上述细胞因子均无明显表达,MI组TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-10mRNA表达和蛋白产生均显著高于Sham组(P<0.01)。直线相关分析显示,致炎症细胞因子蛋白表达同LVEDd呈正相关,而抗炎症细胞因子蛋白表达同LVEDd呈负相关。结论:AMI后大鼠心脏内致炎症细胞因子和炎症保护因子IL10都升高,炎症细胞因子参与了AMI后的心室重塑。 展开更多
关键词 大鼠 急性心肌梗死 细胞因子 心室重塑 RT-pcr WESTERN BLOT 超声心动图
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PTEN基因在结肠癌患者不同组织中表达的意义 被引量：3
17
作者 黄许森 王宇 +5 位作者 黄海舸 韦维 梁亮 吕震 张海永 唐乾利 《结直肠肛门外科》 2016年第2期113-115,共3页
目的检测PTEN基因在结肠癌患者的癌肿组织、转移淋巴组织和正常组织中的表达情况,探讨其与结肠癌生长及转移的关系。方法采用RT-PCR技术检测PTEN基因在15例结肠癌患者的癌肿组织、转移淋巴组织和正常组织中的表达情况。结果与正常组织相... 目的检测PTEN基因在结肠癌患者的癌肿组织、转移淋巴组织和正常组织中的表达情况,探讨其与结肠癌生长及转移的关系。方法采用RT-PCR技术检测PTEN基因在15例结肠癌患者的癌肿组织、转移淋巴组织和正常组织中的表达情况。结果与正常组织相比,癌肿组织和转移淋巴组织中的PTEN mRNA均呈低表达状态,且癌肿组织中PTEN mRNA表达水平低于转移淋巴组织(P<0.05),PTEN mRNA表达水平与结肠癌的生长及转移呈负相关。结论在结肠癌患者中,PTEN基因在mRNA水平上的低表达可能与结肠癌的生长及转移存在相关性。 展开更多
关键词 结肠癌 ptEN pt-pcr
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生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠推动及其机制研究 被引量：4
18
作者 蔡莹 刘柏炎 蔡光先 《中国中西医结合消化杂志》 CAS 2009年第1期21-24,共4页
[目的]探讨生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠推动的影响及其作用机制。[方法]选用雄性昆明种小鼠,随机分为正常(A)组、模型(B)组、生晒参传统饮片(C)组、生晒参超微饮片全剂量(D)组及生晒参超微饮片1/2剂量(E)组,采用利血平法制备脾虚动物... [目的]探讨生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠推动的影响及其作用机制。[方法]选用雄性昆明种小鼠,随机分为正常(A)组、模型(B)组、生晒参传统饮片(C)组、生晒参超微饮片全剂量(D)组及生晒参超微饮片1/2剂量(E)组,采用利血平法制备脾虚动物模型,分别给予0.85%氯化钠、生晒参传统饮片及生晒参超微饮片,观察各组体重变化及对脾虚小鼠小肠推动率的影响,运用RT-PCR方法观察用药后各组钙调蛋白(CAM)mRNA表达水平。[结果]造模小鼠均出现小肠推动率加快,各治疗组均不同程度改善脾虚小鼠小肠运动功能。其中C、D、E组与B组比较差异均有统计学意义(P<0.05);C、D、E组之间差异均无统计学意义。A组小鼠小肠有一定水平的CAM表达,造模后CAM mRNA表达增高;C、D、E组CAM mRNA表达下降,其中C、D组与B组比较以及C、D组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]生晒参超微饮片通过影响CAM mRNA表达水平,调节脾虚小鼠小肠运动,对小肠功能紊乱有调节作用;且对CAM mRNA表达水平的调节作用优于生晒参传统饮片。 展开更多
关键词 脾虚 生晒参 超微饮片 小肠推动 半定量逆转录多聚酶链反应 钙调蛋白mRNA
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胶质细胞源神经营养因子cDNA全序列的克隆及其生物学功能的研究 被引量：2
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作者 段峰海 张瑛 +4 位作者 夏另朝 邱蓉 邓巍 李金照 陈燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第3期372-377,共6页
为了研究ＧＤＮＦ在神经系统中的生物学功能，通过ＲＴ－ＰＣＲ方法从大鼠睾丸总ＲＮＡ中扩增出ＧＤＮＦｃＤＮＡ全序列，序列分析表明与ＧｅｎＢａｎｋ中的顺序完全相同．将ＧＤＮＦｃＤＮＡ以非融合方式连接在真核表达载体ｐＥＧＦＰ... 为了研究ＧＤＮＦ在神经系统中的生物学功能，通过ＲＴ－ＰＣＲ方法从大鼠睾丸总ＲＮＡ中扩增出ＧＤＮＦｃＤＮＡ全序列，序列分析表明与ＧｅｎＢａｎｋ中的顺序完全相同．将ＧＤＮＦｃＤＮＡ以非融合方式连接在真核表达载体ｐＥＧＦＰ－ＮⅠ的绿色荧光蛋白的上游，在ＣＭＶ启动子控制下表达．通过绿色荧光蛋白报告基因的表达表明ＧＤＮＦｃＤＮＡ能在真核细胞ＨｅＬａ中很好表达．采用裸ＤＮＡ转染方法研究ＧＤＮＦ对损伤的坐骨神经的修复作用，在雏鸡出生后３ｈ切断其右侧坐骨神经，将ｐＥＧＦＰ－ＧＤＮＦ与Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ的混合物注射到坐骨神经切断位点附近肌肉内，５ｄ后追补一次．２０ｄ后进行实验检测，观察到ＧＤＮＦｃＤＮＡ的转染阻止了切断神经侧的腰脊髓内［Ｌ４－Ｌ６］运动神经元的大量死亡，并显著促进了切断坐骨神经的再生． 展开更多
关键词 GDNF pt-pcr 坐骨神经 CDNA
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新型冠状病毒不同核酸检测方法在临床应用中的评价 被引量：2
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作者 代芳芳 娄金丽 +2 位作者 于艳华 张立丽 陈铭 《标记免疫分析与临床》 CAS 2020年第11期1973-1975,共3页
目的探讨和评价新型冠状病毒(SARS-CoV-2)不同核酸检测方法在临床工作中的应用。方法对2020年2月中旬送检的76例咽拭子标本及5例痰标本同时分别用一步RT-PCR法及NASBA(nuclear acid sequence-based amplification)恒温扩增芯片法进行201... 目的探讨和评价新型冠状病毒(SARS-CoV-2)不同核酸检测方法在临床工作中的应用。方法对2020年2月中旬送检的76例咽拭子标本及5例痰标本同时分别用一步RT-PCR法及NASBA(nuclear acid sequence-based amplification)恒温扩增芯片法进行2019-nCoV核酸检测。结果81例患者中确诊COVID-19的有51例,实时荧光一步RT-PCR法检测阳性21例(25.93%),NASBA恒温扩增芯片法检测阳性11例(13.58%)。实时荧光一步RT-PCR法在诊断COVID-19中灵敏度(0.412)高于NASBA恒温扩增芯片法(0.216),阴性预测值(0.500)高于恒温扩增法(0.429),诊断准确性(YI=0.412)高于恒温扩增芯片法(YI=0.216),两种方法的特异性和阳性预测值均为100%。两种方法单次检测的假阴性率分别为58.82%和78.43%。结论新型冠状病毒(SARS-CoV-2)不同核酸检测方法之间灵敏度差异较大,应用前要对检测方法和试剂盒进行性能评价,两种核酸检测法的特异性和阳性预测值均很高,但单次核酸检测结果假阴性率较高,临床诊断时应综合考虑。 展开更多
关键词 2019-nCoV COVID-19 pt-pcr 恒温扩增法
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