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N-糖酰胺酶F在大肠杆菌中的高效表达及其脱糖基化作用研究 被引量：3
1
作者 苏移山 王圣钧 +1 位作者 王鹏 祁庆生 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期911-915,共5页
从脑膜炎脓杆菌(Flavobacterium meningosepticum)基因组中通过PCR扩增了N糖酰胺酶F(PNGaseF)基因,经酶切后与表达载体pET28a连接,获得的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)。重组大肠杆菌经诱导表达和纯化提取后,获取大量高纯度N糖酰胺酶F... 从脑膜炎脓杆菌(Flavobacterium meningosepticum)基因组中通过PCR扩增了N糖酰胺酶F(PNGaseF)基因,经酶切后与表达载体pET28a连接,获得的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)。重组大肠杆菌经诱导表达和纯化提取后,获取大量高纯度N糖酰胺酶F,其纯度达90%以上。试验证明,经纯化的重组N糖酰胺酶F可以切除核糖核酸酶B、转铁蛋白和人IgG等糖蛋白上的N糖链,具有脱糖基化作用。 展开更多
关键词 N-糖酰胺酶f PET28a RNASE B 脱糖基化
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聚乙二醇对PEG化重组人促红细胞生成素热稳定性和生物学活性的影响 被引量：4
2
作者 葛永红 刘兰军 +5 位作者 沈富兵 陈智勇 郭洪金 赵青 邓杰 张雪艳 《微生物学免疫学进展》 2005年第2期24-28,共5页
为了研究聚乙二醇对PEG化rhEPO热稳定性和生物学活性的影响,用酶学方法切除rhEPO和PEGrhEPO分子中的N连接糖基,研究酶切产物在37℃时287nm和350nm吸光度随时间的变化;用MTT比色法,网织红细胞法和HCT法比较体内和体外生物学活性的改变。... 为了研究聚乙二醇对PEG化rhEPO热稳定性和生物学活性的影响,用酶学方法切除rhEPO和PEGrhEPO分子中的N连接糖基,研究酶切产物在37℃时287nm和350nm吸光度随时间的变化;用MTT比色法,网织红细胞法和HCT法比较体内和体外生物学活性的改变。结果显示聚乙二醇修饰能显著减少无N连接糖基的rhEPO分子间的聚集,降低rhEPO体外生物学活性,但增高体内生物学活性;无N连接糖基的PEG化rhEPO具有与rhEPO相当的体内生物学活性。因此聚乙二醇能提高rhEPO热稳定性;聚乙二醇可替代糖基,维持rhEPO的体内生物学活性。用PEG修饰原核细胞表达的rhEPO是开发rhEPO制品的新思路。 展开更多
关键词 重组人促红细胞生成素 PEG化学修饰 pngasef
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银杏种子糖蛋白的SDS-PAGE分离及N-糖链的质谱分析 被引量：2
3
作者 李成 王承健 +5 位作者 晋万军 韩健利 杨梅芳 郜茜 黄琳娟 王仲孚 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2019年第1期69-75,共7页
利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离了银杏种子中的糖蛋白组分,进一步用氨水催化释放N-糖链,并采用电喷雾离子质谱(ESI-MS)及在线液相色谱-质谱联用(LC-UV-MS/MS^2)等技术对胶条上释放的N-糖链进行了定性定量分析.结... 利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离了银杏种子中的糖蛋白组分,进一步用氨水催化释放N-糖链,并采用电喷雾离子质谱(ESI-MS)及在线液相色谱-质谱联用(LC-UV-MS/MS^2)等技术对胶条上释放的N-糖链进行了定性定量分析.结果表明,从银杏种子中分离得到11种糖蛋白,共检测到11条N-糖链,包括高甘露糖型(4. 88%)和复杂型(95. 12%) 2种类型,其中分子量为21000,36000和50000的糖蛋白所释放的核心α-1,3-岩藻糖和β-1,2-木糖修饰的N-糖链所占比率较高,分别为68. 23%,64. 37%和75. 09%.本研究对进一步研究银杏糖蛋白功能具有重要意义. 展开更多
关键词 银杏糖蛋白 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 N-糖苷酶f 氨水催化 电喷雾离子质谱
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一种用于流感病毒亚单位疫苗纯度分析的改进方法
4
作者 田文莉 邵铭 +5 位作者 祁骥 刘淑珍 谷堃 李长贵 杨旭 李小强 《生物技术通讯》 CAS 2013年第1期98-100,共3页
目的:在SDS-PAGE方法的基础上建立一种改进方法,用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析。方法:用糖苷酶F对不同亚型的疫苗中间体去糖基化处理后进行SDS-PAGE,与未经去糖基化处理的还原型SDS-PAGE结果进行比较。结果:去糖基化处理消除... 目的:在SDS-PAGE方法的基础上建立一种改进方法,用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析。方法:用糖苷酶F对不同亚型的疫苗中间体去糖基化处理后进行SDS-PAGE,与未经去糖基化处理的还原型SDS-PAGE结果进行比较。结果:去糖基化处理消除了血凝素的糖基化对电泳迁移率的影响,从而实现了血凝素亚基和杂质的电泳分离。结论:此方法应用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析,较之常规的还原型SDS-PAGE方法具有更高的分辨力。 展开更多
关键词 流感病毒亚单位疫苗 SDS-PAGE 血凝素 糖苷酶f 去糖基化
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利用N糖苷酶F对单克隆抗体N糖酶解条件的优化 被引量：1
5
作者 张博慧 贾戴辉 +3 位作者 程倩 许俊彦 邵喆 黄应峰 《生物技术进展》 2021年第2期214-222,共9页
为了优化利用N糖苷酶F(PNGase F)酶解单克隆抗体中N糖的方法,应用本公司生产的单抗对PNGase F酶的酶解条件进行优化,包括缓冲液pH、酶种类、仪器、酶解程度、变性缓冲液及酶加入量等,总结酶解条件对N糖谱结果的影响。结果显示,置换缓冲... 为了优化利用N糖苷酶F(PNGase F)酶解单克隆抗体中N糖的方法,应用本公司生产的单抗对PNGase F酶的酶解条件进行优化,包括缓冲液pH、酶种类、仪器、酶解程度、变性缓冲液及酶加入量等,总结酶解条件对N糖谱结果的影响。结果显示,置换缓冲液至1×PBS中可以避免某些单抗在低pH酶解时G0F转化为G0F-GN并可改善峰型;快速PNGase F和加入变性缓冲液能有效提高酶解效率;UPLC和1.7μm粒径色谱柱能提高分离度;不完全酶解影响N糖含量结果。研究结果表明,采用优化的酶解条件可快速、有效的酶解单抗上的N糖,使N糖谱结果准确可靠,为细胞株筛选和单抗药物质量控制提供有效手段。 展开更多
关键词 单克隆抗体 N糖 pngasef酶
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