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重组PLZF蛋白锌指结构域的表达、提纯和活性分析
1
作者
李伟
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期1-5,共5页
PLZF(promyelocytic leukaemia zinc finger protein)是一种重要的转录抑制因子,它由位于N端的BTB结构域和C端的锌指结构域构成。鉴于目前对于锌指结构域的立体结构还不是十分清楚,对其进行了高效表达和提纯。为了表达PLZF蛋白的锌指结...
PLZF(promyelocytic leukaemia zinc finger protein)是一种重要的转录抑制因子,它由位于N端的BTB结构域和C端的锌指结构域构成。鉴于目前对于锌指结构域的立体结构还不是十分清楚,对其进行了高效表达和提纯。为了表达PLZF蛋白的锌指结构域,在其编码序列的5'端加上起始密码ATG后插入到表达载体PET-11a的多克隆位点。构建好的表达质粒转化到BL21(DE3)大肠杆菌内并用IPTG诱导表达,发现重组蛋白主要以不溶性的包涵体形式在胞内表达。用含有SDS变性剂的缓冲液溶解包涵体后,采用凝胶过滤方法将重组蛋白纯化到纯度达96%以上。对纯化后的蛋白质用反透析的方法进行复性,然后用DNA结合实验进行活性分析,发现复性后的蛋白质具有特异的DNA结合活性,这为进一步研究PLZF蛋白锌指结构域的立体结构打下了重要基础。
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关键词
plzf
蛋白
锌指结构域
包涵体
凝胶迁移分析
原文传递
题名
重组PLZF蛋白锌指结构域的表达、提纯和活性分析
1
作者
李伟
机构
上海交通大学系统生物医学研究院教育部系统生物医学重点实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期1-5,共5页
基金
上海市自然科学基金资助项目(11ZR1416800)
文摘
PLZF(promyelocytic leukaemia zinc finger protein)是一种重要的转录抑制因子,它由位于N端的BTB结构域和C端的锌指结构域构成。鉴于目前对于锌指结构域的立体结构还不是十分清楚,对其进行了高效表达和提纯。为了表达PLZF蛋白的锌指结构域,在其编码序列的5'端加上起始密码ATG后插入到表达载体PET-11a的多克隆位点。构建好的表达质粒转化到BL21(DE3)大肠杆菌内并用IPTG诱导表达,发现重组蛋白主要以不溶性的包涵体形式在胞内表达。用含有SDS变性剂的缓冲液溶解包涵体后,采用凝胶过滤方法将重组蛋白纯化到纯度达96%以上。对纯化后的蛋白质用反透析的方法进行复性,然后用DNA结合实验进行活性分析,发现复性后的蛋白质具有特异的DNA结合活性,这为进一步研究PLZF蛋白锌指结构域的立体结构打下了重要基础。
关键词
plzf
蛋白
锌指结构域
包涵体
凝胶迁移分析
Keywords
plzf
protein Zinc finger domain Inclusion body EMSA
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组PLZF蛋白锌指结构域的表达、提纯和活性分析
李伟
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
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