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秦川牛PLIN2基因参与脂滴形成调节机制的研究 被引量:1
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作者 李佩韦 昝林森 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第4期1-7,共7页
【目的】研究PLIN2基因对秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴形成的功能。【方法】以秦川牛原代脂肪细胞为试验材料,采用高干扰效率的si-PLIN2及对照组si-NC,超表达PLIN2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-PLIN2及对照pcDNA3.1(+)-empty vector(pc... 【目的】研究PLIN2基因对秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴形成的功能。【方法】以秦川牛原代脂肪细胞为试验材料,采用高干扰效率的si-PLIN2及对照组si-NC,超表达PLIN2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-PLIN2及对照pcDNA3.1(+)-empty vector(pcDNA3.1(+)-EV),转染秦川牛脂肪细胞并进行相关基因mRNA及蛋白水平表达量验证,并对转录因子C/EBPα是否能结合在PLIN2基因启动子区域进行验证。【结果】si-PLIN2处理组中CREB基因表达量无明显变化,C/EBPβ和C/EBPα基因mRNA水平表达量与si-NC对照组相比分别出现显著或极显著下调。与对照组pcDNA3.1(+)-EV相比,过表达组pcDNA3.1(+)-PLIN2 CREB相对表达量极显著上调,C/EBPα和C/EBPβ基因相对表达量上调,但差异不显著。Western blot蛋白表达水平检测发现,si-PLIN2中磷酸化水平CREB(phospho-CREB,p-CREB)、C/EBPβ、C/EBPα的表达量显著低于对照组si-NC,过表达组上述转录因子表达量未出现明显上调。ChIP试验结果表明,转录因子C/EBPα可以结合在PLIN2基因启动子区域,并调控秦川牛PLIN2基因的表达。【结论】下调秦川牛PLIN2基因可反馈抑制上游cAMP-PKA信号通路p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα 3个转录因子的表达,从而抑制秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴生成。 展开更多
关键词 秦川牛 plin2基因 脂滴形成 调控机制
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PLIN2基因在秦川肉牛皮下脂肪组织中的表达规律及基因多态性与肉质性状的关联分析 被引量:5
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作者 李佩韦 吴森 +2 位作者 王亚宁 王洪宝 昝林森 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第6期1580-1589,共10页
试验旨在研究围脂滴蛋白2(PLIN2)基因在秦川肉牛皮下脂肪组织中的表达情况及基因多态性与肉质性状的关联分析。采用实时荧光定量PCR检测PLIN2基因mRNA在不同月龄(6~60月龄)秦川肉牛皮下脂肪组织中的表达情况;选取18~24月龄的健康秦川肉... 试验旨在研究围脂滴蛋白2(PLIN2)基因在秦川肉牛皮下脂肪组织中的表达情况及基因多态性与肉质性状的关联分析。采用实时荧光定量PCR检测PLIN2基因mRNA在不同月龄(6~60月龄)秦川肉牛皮下脂肪组织中的表达情况;选取18~24月龄的健康秦川肉牛536头,采集血样并测定肉质性状指标,研究PLIN2基因单核苷酸多态性(SNP)和氨基酸突变,并与秦川肉牛肉质性状进行关联分析。结果发现,PLIN2基因在秦川肉牛皮下脂肪组织中的表达量呈先上升后下降趋势,18月龄时表达量最高。测序共发现9个SNPs位点,其中g.C7919>T位点不同基因型肌内脂肪含量差异显著(P<0.05),CT基因型显著高于TT和CC基因型;g.C7933>T位点不同基因型背膘厚及肌内脂肪含量均呈显著差异(P<0.05),CC和CT基因型个体背膘厚显著高于TT基因型,CT基因型个体肌内脂肪含量显著高于TT和CC基因型;g.G8015>C位点CC基因型个体肌内脂肪含量显著高于GG和GC基因型(P<0.05);3′UTR区域g.T8496>C位点TC基因型个体肌内脂肪含量显著高于CC和TT基因型(P<0.05);g.C8578>T位点TT基因型个体背膘厚显著高于CT和CC基因型(P<0.05)。综上,PLIN2基因对秦川肉牛肉质性状发育有一定影响,可作为秦川肉牛现代分子选育的候选参考基因。 展开更多
关键词 秦川肉牛 plin2基因 表达谱 多态性 关联分析
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猪PLIN2基因变异筛选及其与猪肌内脂肪含量性状的关联分析 被引量:5
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作者 吴俊静 阮航 +3 位作者 乔木 周佳伟 彭先文 梅书棋 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2021年第S01期158-163,共6页
肌内脂肪含量(IMF)性状是影响猪肉质的重要指标。PLIN2是猪肉质性状的候选基因。本研究在硒都黑猪群体中筛选鉴定了猪PLIN2基因的SNP变异位点。利用混合DNA样本池,采用6对引物PCR扩增了猪PLIN2基因6段不同序列片段,经Sanger测序比对分... 肌内脂肪含量(IMF)性状是影响猪肉质的重要指标。PLIN2是猪肉质性状的候选基因。本研究在硒都黑猪群体中筛选鉴定了猪PLIN2基因的SNP变异位点。利用混合DNA样本池,采用6对引物PCR扩增了猪PLIN2基因6段不同序列片段,经Sanger测序比对分析后共发现了14个SNP位点。与IMF性状进行关联分析后发现:g1816T>C、g6709G>C、g6808G>A、g6969G>C、g6980C>T、g7032T>C、g7045C>T、g7063G>A、g10027C>T、g10335A>G、g10349C>T等11个SNP位点极显著影响IMF性状。这11个SNP位点可构成4种单倍型,且各单倍型也与IMF性状显著相关。本研究为猪肉质性状的遗传改良提供了新的分子育种标记。 展开更多
关键词 肌内脂肪含量 plin2基因 突变 关联分析
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延边牛PLIN2基因CDS区克隆、生物信息学分析及其表达规律研究 被引量:3
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作者 孙建富 崔岩 +6 位作者 张军芳 王英 孙斌 李强 Seong H.Choi Jong S.Shin 李香子 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第3期829-838,共10页
本研究旨在克隆延边牛脂肪分化相关蛋白PLIN2基因完整CDS区,通过生物信息学分析PLIN2基因CDS区序列和蛋白质基本特性,探讨其在延边牛不同组织及前体脂肪细胞成脂过程中的表达规律。选取18月龄去势的延边牛为研究对象,利用RT-PCR和基因... 本研究旨在克隆延边牛脂肪分化相关蛋白PLIN2基因完整CDS区,通过生物信息学分析PLIN2基因CDS区序列和蛋白质基本特性,探讨其在延边牛不同组织及前体脂肪细胞成脂过程中的表达规律。选取18月龄去势的延边牛为研究对象,利用RT-PCR和基因克隆获得延边牛PLIN2基因,与其他物种进行同源性比对及系统进化树构建,利用生物信息学方法预测PLIN2编码蛋白质的理化性质、潜在磷酸化位点及糖基化位点、二硫键分析、信号肽、亚细胞定位、蛋白高级结构,利用实时荧光定量PCR检测PLIN2基因在延边牛不同组织中的表达水平。结果显示,延边牛PLIN2基因CDS长1353 bp,编码450个氨基酸;同源性比对发现延边牛PLIN2基因与黄牛、水牛、绵羊、山羊、野猪、人、小鼠和野鸡的同源性分别为100%、98.7%、96.7%、97.1%、85.5%、86.3%、47.3%和49.1%;系统进化树表明,延边牛与黄牛、水牛的亲缘关系最近,与野鸡的亲缘关系最远。PLIN2蛋白为不稳定蛋白,具有一定亲水性,存在61个潜在的磷酸化位点、16个O-糖基化潜在位点、12个N-糖基化潜在位点,存在2个二硫键,不存在信号肽,主要分布于细胞核中,细胞质和线粒体中有少量分布。PLIN2蛋白高级结构预测该蛋白是由α-螺旋、延伸链、无规则卷曲和β-转角组成,为混合型蛋白,通过无规则卷曲连接,以α-螺旋为主。实时荧光定量PCR结果显示,PLIN2基因在延边牛小肠组织中表达量最高,其次为背最长肌和肾脏组织。本研究结果可为进一步研究PLIN2基因的功能提供借鉴。 展开更多
关键词 延边牛 plin2基因 克隆 生物信息学分析 表达
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牦牛PLIN2基因的克隆及其在卵巢不同发情阶段的表达 被引量:3
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作者 蔡雯祎 陈通 +5 位作者 石仙 陈伟明 胡嘉嘉 熊显荣 兰道亮 李键 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第3期782-789,共8页
试验旨在研究牦牛PLIN2基因的序列特征和表达特性,并分析其表达与不同发情时期的卵巢的相关性。根据GenBank中已知的普通牛序列,设计克隆引物,经RT-PCR扩增得到牦牛PLIN2基因序列。RT-PCR检测PLIN2基因在各个组织中的表达量,实时荧光定... 试验旨在研究牦牛PLIN2基因的序列特征和表达特性,并分析其表达与不同发情时期的卵巢的相关性。根据GenBank中已知的普通牛序列,设计克隆引物,经RT-PCR扩增得到牦牛PLIN2基因序列。RT-PCR检测PLIN2基因在各个组织中的表达量,实时荧光定量PCR分析卵巢不同发情时期的表达量。结果表明,牦牛PLIN2基因的编码区长为1 353bp,共编码450个氨基酸,为无跨膜结构的非分泌蛋白。与GenBank中已知的普通牛序列同源性达到99.4%,表明PLIN2基因在进化过程中相当保守。在牦牛的各个组织中PLIN2分布广泛,但不同组织中的表达有差异,卵巢、乳腺、胃和肾脏中相对较多,而肺脏中几乎没有表达。实时荧光定量PCR结果显示,在卵巢的不同发情时期PLIN2都有表达,且在黄体期的表达量最高,表明PLIN2基因在牦牛发情周期中起着不可忽视的作用。 展开更多
关键词 牦牛 plin2基因 克隆 组织表达 实时荧光定量PCR
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宣和猪PLIN2基因5′-UTR和3′-UTR多态性及其与生长性状的关联分析 被引量:2
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作者 李俄然 曾韦植 +5 位作者 王孝义 鲁绍雄 胡伟 何家书 严达伟 李明丽 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2020年第1期68-74,共7页
【目的】揭示PLIN2基因对宣和猪生长性状的影响。【方法】以357头宣和猪为试验材料,采用PCR产物直接测序法检测了PLIN2基因的5′-UTR和3′-UTR多态性,分析了各SNP位点不同基因型的生长性状差异。【结果】在5′-UTR检测到2个SNP位点(G158... 【目的】揭示PLIN2基因对宣和猪生长性状的影响。【方法】以357头宣和猪为试验材料,采用PCR产物直接测序法检测了PLIN2基因的5′-UTR和3′-UTR多态性,分析了各SNP位点不同基因型的生长性状差异。【结果】在5′-UTR检测到2个SNP位点(G158A、T491G)、3′-UTR检出1个SNP位点(G5689A),上述3个SNP位点分别以GG、TT和GG基因型频率最高,G、T和G为优势等位基因;除G158A位点未达到Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.01)外,其余2个突变位点均处于平衡状态(P>0.05),且杂合度较高、遗传多样性较为丰富。在6月龄体重、4—6月龄日增重和70日龄—6月龄日增重上,G158A位点的GG型、T491G位点的TT型和G5689A位点的GG型均显著高于同位点其他基因型(P<0.01或P<0.05);且3个SNP位点不同单倍型组合对生长性状的影响呈现了明显的协同作用,即GTG/GTG组合的6月龄体重、4—6月龄日增重和70日龄—6月龄日增重最高(P<0.01或P<0.05)。【结论】研究结果从PLIN2基因多态性角度印证了宣和猪新品种选育工作的有效性,初步证实PLIN2基因与宣和猪生长性状间存在显著关联。 展开更多
关键词 宣和猪 plin2基因 非翻译区 单核苷酸多态性 生长性状
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真核表达载体pIRES2-AcGFP1-PLIN2的构建及其在3T3-L1前脂肪细胞中的表达 被引量:1
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作者 赵小琪 黄英 +2 位作者 杨明华 潘洪彬 赵素梅 《天津农学院学报》 CAS 2018年第2期55-59,共5页
构建pIRES2-AcGFP1-PLIN2真核表达载体,并观察其在3T3-L1前脂肪细胞中的转染状况。采用分子克隆技术,将PLIN2基因连接到p MD18-T载体中做Eco RⅠ/Sal I双酶切,将酶切产物回收并将双酶切后的目的片段与pIRES2-AcGFP1载体连接,转入DH5α... 构建pIRES2-AcGFP1-PLIN2真核表达载体,并观察其在3T3-L1前脂肪细胞中的转染状况。采用分子克隆技术,将PLIN2基因连接到p MD18-T载体中做Eco RⅠ/Sal I双酶切,将酶切产物回收并将双酶切后的目的片段与pIRES2-AcGFP1载体连接,转入DH5α感受态细胞,并提取pIRES2-AcGFP1-PLIN2阳性重组质粒,转染到3T3-L1前脂肪细胞,显微镜观察转染情况。本研究成功克隆出了PLIN2基因,同时成功构建了pIRES2-AcGFP1-PLIN2真核表达载体,并在3T3-L1前脂肪细胞中成功表达,于显微镜下观察到绿色荧光,试验为进一步研究PLIN2基因对脂肪细胞的调控机理奠定了基础。 展开更多
关键词 乌金猪 plin2基因 真核表达载体
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