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苯乙基间苯二酚对UVB诱导的人皮肤黑素细胞氧化模型损伤的保护作用及其机制 被引量：5
1
作者 刘园园 李欣 +5 位作者 靳佳慧 王昊 鲍炎 李宁 郭毅群 王艳 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1107-1112,共6页
目的探讨苯乙基间苯二酚(PR)对紫外(UVB)诱导的人皮肤黑素细胞(PIG1)氧化模型损伤的保护作用及其机制。方法体外培养PIG1细胞,用UVB处理,建立PIG1UVB氧化损伤模型。用含有不同浓度PR的完全培养基溶液处理PIG1细胞24h;将正常培养的PIG1... 目的探讨苯乙基间苯二酚(PR)对紫外(UVB)诱导的人皮肤黑素细胞(PIG1)氧化模型损伤的保护作用及其机制。方法体外培养PIG1细胞,用UVB处理,建立PIG1UVB氧化损伤模型。用含有不同浓度PR的完全培养基溶液处理PIG1细胞24h;将正常培养的PIG1细胞随机分为正常组、模型组和PR低、中、高剂量组(20、60、100μmol/L),模型组给予UVB照射,给药组紫外照射后给药处理48h。用MTT法检测细胞存活率;用氢氧化钠裂解法检测黑素的变化;用ELISA法检测人优黑素(eumelanin)的变化;用RT-PCR和Western-blot检测与黑素生成相关的基因及蛋白,与酪氨酸酶相关的酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)、酪氨酸酶相关蛋白(TRP2)、小眼畸形相关转录因子(MITF),以及氧化相关的蛋白核因子E2相关转录因子2(Nrf2)、NADP(H)醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素氧合酶-1(HO-1)的mRNA和蛋白表达情况。结果当PR浓度≤100μmol/L时,细胞存活率不受影响。正常组与模型组比较,模型组黑素与优黑素显著升高;给药组与模型组比较,给药组能够显著抑制黑素和优黑素的生成。RT-PCR和Western blot结果表明,PR能够显著下调Nrf2、TRP1、MITF和NQO1的表达(P <0. 05),对TYR、TRP2和HO-1表达有影响,但与模型组比较差异无统计学意义,相关基因的表达与蛋白表达相一致。结论 PR能保护PIG1细胞对抗UVB诱导的氧化损伤,具有一定的剂量关系,其作用机制可能与抗氧化和抑制酪氨酸酶,降低黑素生成有关。 展开更多
关键词 苯乙基间苯二酚 pig1细胞 黑素 优黑素
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地龙蛋白两种提取方法的活性比较 被引量：5
2
作者 彭洪兵 袁仕君 +3 位作者 尹聪 余军 黄必胜 李娟 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1860-1862,共3页
目的比较两种不同提取方法对地龙可溶性蛋白提取率及活性的影响。方法分别采用BCA法测定蛋白含量,羟胺法测定T-SOD活性,APTT、PT试剂盒测定抗凝血活性,琼脂糖-纤维蛋白平板法测定纤溶酶活性,MTT法检测PIG1细胞的存活率。结果水提醇沉法... 目的比较两种不同提取方法对地龙可溶性蛋白提取率及活性的影响。方法分别采用BCA法测定蛋白含量,羟胺法测定T-SOD活性,APTT、PT试剂盒测定抗凝血活性,琼脂糖-纤维蛋白平板法测定纤溶酶活性,MTT法检测PIG1细胞的存活率。结果水提醇沉法和盐析法的提取率分别为(11.12±0.16)%、(4.96±0.19)%,纯度分别为(24.37±1.68)%、(42.49±1.9)%。水提醇沉法提取的地龙蛋白T-SOD和纤溶活性都明显高于盐析法,抗凝血活性略低于盐析法。两种蛋白均能显著提高PIG1细胞的存活率,并对H_(2)O_(2)诱导的PIG1细胞具有保护作用,但蛋白浓度不同时保护作用有所差异,0.1~0.2 mg·mL^(-1)的水提醇沉蛋白保护作用更强,0.4~0.8 mg·mL^(-1)的盐析蛋白的作用更显著。结论水提醇沉法提取的地龙蛋白的提取率、抗氧化和纤溶活性明显强于盐析法,其抗凝血活性和对皮肤细胞的保护作用与盐析法相似。 展开更多
关键词 地龙蛋白 T-SOD 抗凝血 pig1细胞 氧化损伤
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UVB照射对PIG1细胞增殖活性的影响 被引量：2
3
作者 朱东宁 简强 +3 位作者 薛柯 刘博强 王玲 李承新 《中国美容医学》 CAS 2011年第6期944-946,共3页
目的:探讨UVB照射对正常人黑素细胞PIG1细胞形态及增殖活性的影响。方法:取对数生长期的PIG1细胞,分别以50、100、200、300、400、500、600和700mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0h、24h和48h,在倒置显微镜下观察其形态学变化,用MTT法检测... 目的:探讨UVB照射对正常人黑素细胞PIG1细胞形态及增殖活性的影响。方法:取对数生长期的PIG1细胞,分别以50、100、200、300、400、500、600和700mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0h、24h和48h,在倒置显微镜下观察其形态学变化,用MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响。结果:在50～200 mJ/cm2的UVB辐射下,随辐射剂量的增大,PIG1细胞的增殖活性逐渐增加,倒置相差显微镜从形态学上证实了一定剂量的UVB照射可以促进细胞增殖。结论:一定剂量的UVB照射有刺激PIG1细胞增殖及树突生长的作用。 展开更多
关键词 pig1细胞 UVB照射 增殖 树突
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卵巢滤泡激素在干扰素γ介导的黑素细胞凋亡以及趋化因子分泌中的作用研究 被引量：1
4
作者 周妙妮 林福全 +4 位作者 祝逸平 金嵘 盛安琪 许文 许爱娥 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期878-883,共6页
目的研究卵巢滤泡激素(FLCN)在干扰素γ(IFN-γ)介导的黑素细胞凋亡及趋化因子分泌中发挥的作用。方法从正常人包皮环切组织及白癜风移植患者正常部位的吸疱表皮分离正常原代黑素细胞及白癜风原代黑素细胞。采用Western印迹检测正常原... 目的研究卵巢滤泡激素(FLCN)在干扰素γ(IFN-γ)介导的黑素细胞凋亡及趋化因子分泌中发挥的作用。方法从正常人包皮环切组织及白癜风移植患者正常部位的吸疱表皮分离正常原代黑素细胞及白癜风原代黑素细胞。采用Western印迹检测正常原代黑素细胞、白癜风原代黑素细胞及人原代黑素细胞系PIG1细胞中FLCN蛋白的表达。以10 ng/ml IFN-γ刺激48 h的PIG1细胞为诱导组,未经处理的PIG1细胞为对照组,采用qRT-PCR检测两组细胞FLCN及自噬相关微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、Beclin基因mRNA表达,Western印迹检测FLCN、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ水平及腺昔酸激活蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平。进一步对采用10 ng/ml IFN-γ刺激的黑素细胞感染FLCN抑制病毒进行不同的处理,分为阴性对照组、FLCN抑制组、抑制FLCN及添加mTOR抑制剂的自噬增强组和抑制FLCN及添加AMPK抑制剂的自噬抑制组。采用流式细胞仪检测各组PIG1细胞凋亡,酶联免疫吸附实验检测各组细胞上清液中趋化因子CXCL10和CCL20的浓度。多组间计量资料比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD-t检验。结果正常原代黑素细胞(0.850±0.120)、白癡风原代黑素细胞(1.507±0.170)和PIG1细胞(0.697±0.130)FLCN蛋白的相对表达差异有统计学意义(F=50.09,P<0.001),白癜风原代黑素细胞高于正常原代黑素细胞和PIG1细胞(t=4.06、5.89,均P<0.01)。诱导组FLCN mRNA及蛋白相对表达均高于对照组(均P<0.01),LC3Ⅱ、Beclin mRNA及蛋白相对表达均低于对照组(均P<0.01);诱导组PIG1细胞LC3Ⅱ/Ⅰ水平(0.72±0.02),AMPK磷酸化水平(0.714±0.023)低于对照组(1.13±0.02、1.176±0.002,t=7.34,6.67,均P<0.01),mTOR磷酸化水平(1.051±0.023)高于对照组(0.451土0.016,t=3.81,P=0.009)。对照组、诱导组及各处理组PIG1细胞凋亡率及CXCL10、CCL20浓度差异均有统计学意义(均P<0.001),诱导组高于对照组,FLCN抑制组� 展开更多
关键词 黑素细胞 白癜风 干扰素Γ 细胞凋亡 自噬 pig1细胞 卵巢滤泡激素
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人表皮黑素PIG1细胞株前列腺素E_2受体和前列腺素F_2α受体表达 被引量：3
5
作者 王思涵 张贝 +2 位作者 毛子慧 于建斌 曹靖 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第3期221-223,共3页
目的探讨前列腺素(prostaglandin, PG)E_2受体、PGF_2α受体FP在人表皮黑素PIG1细胞株表达变化。方法取对数生长期人表皮黑素PIG1细胞株,采用免疫荧光染色法检测PGE_2受体包括EP1、EP2、EP3、EP4以及PGF_2α受体FP表达。结果 PIG1细胞... 目的探讨前列腺素(prostaglandin, PG)E_2受体、PGF_2α受体FP在人表皮黑素PIG1细胞株表达变化。方法取对数生长期人表皮黑素PIG1细胞株,采用免疫荧光染色法检测PGE_2受体包括EP1、EP2、EP3、EP4以及PGF_2α受体FP表达。结果 PIG1细胞株细胞膜和细胞质中均有EP1、EP2、EP3、EP4、FP阳性荧光染色。结论 PG通过EP1、EP2、EP3、EP4及FP调控人表皮黑素PIG1细胞功能。 展开更多
关键词 人表皮黑素pig1细胞 前列腺素E2受体 前列腺素F2α受体
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槲皮素对H_2O_2诱导的正常人黑素细胞氧化损伤的保护作用 被引量：8
6
作者 黄海艳 王芳 +5 位作者 丁晓岚 徐前喜 赵明福 王利娟 杜娟 张建中 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2014年第10期1012-1017,共6页
目的采用过氧化氢（H2O2）诱导细胞氧化应激模型,探讨天然黄酮类化合物槲皮素对正常人黑素细胞的氧化损伤是否具有保护作用。方法体外培养的PIG1正常人黑素细胞中分别加入不同浓度的H2O2（0,0.25,0.5,0.75,1,1.25,1.5mmol/L）作用24h,... 目的采用过氧化氢（H2O2）诱导细胞氧化应激模型,探讨天然黄酮类化合物槲皮素对正常人黑素细胞的氧化损伤是否具有保护作用。方法体外培养的PIG1正常人黑素细胞中分别加入不同浓度的H2O2（0,0.25,0.5,0.75,1,1.25,1.5mmol/L）作用24h,确定氧化损伤最佳浓度,建立氧化应激模型。实验分组：正常对照组、H2O2组、槲皮素（10,20,40μmol/L）预处理2h＋H2O2组,分别采用光镜、CCK-8、annexin-V/PI双染流式细胞仪、电镜、DCFH-DA检测槲皮素对H2O2所致黑素细胞氧化损伤后细胞形态学、活力及凋亡、微观结构和细胞内活性氧自由基（ROS）的影响。结果与空白对照组相比,随着H2O2浓度增加,细胞活力下降,1mmol/L H2O2作用24h后细胞活力下降至（55±9.8）%,接近IC50,确立氧化应激模型（H2O2浓度为1mmol/L,时间为24h）。与H2O2组相比,槲皮素组的细胞活力随槲皮素浓度增加而增加（P均〈0.01）;10~40μmol/L槲皮素组细胞凋亡率随槲皮素浓度增加较H2O2组明显下降（P均〈0.01）;槲皮素可减轻H2O2作用后黑素细胞形态和微观结构改变;40μmol/L槲皮素组细胞内ROS水平较H2O2组明显下降（P〈0.01）。结论槲皮素预处理可防止H2O2所致氧化损伤引起的正常人黑素细胞凋亡,降低细胞内ROS,对氧化损伤的黑素细胞有保护作用。 展开更多
关键词 pig1黑素细胞 槲皮素 细胞凋亡 氧化应激
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紫铆素通过AMPK通路促进正常人黑素细胞黑素合成的机制研究 被引量：3
7
作者 黄海艳 杜娟 +5 位作者 张杰 邹彦芬 彭曦 王芳 于波 邵勇 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》 CAS 2020年第5期406-409,422,共5页
目的探讨紫铆素对正常人黑素细胞PIG1细胞黑素合成功能的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测紫铆素对PIG1细胞活力的影响,LDH释放法检测紫铆素对PIG1细胞的毒性,NaOH裂解法、L-Dopa氧化法检测紫铆素对PIG1细胞黑素含量及酪氨酸... 目的探讨紫铆素对正常人黑素细胞PIG1细胞黑素合成功能的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测紫铆素对PIG1细胞活力的影响,LDH释放法检测紫铆素对PIG1细胞的毒性,NaOH裂解法、L-Dopa氧化法检测紫铆素对PIG1细胞黑素含量及酪氨酸酶活力的影响,Western blot法观察对PIG1细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路和黑素合成关键蛋白表达的影响,结合AMPK激动剂以深入探讨其在该过程中的作用和分子机制。结果紫铆素能促进PIG1细胞增殖且不引起细胞毒性,还能剂量依赖性的促进黑素合成和酪氨酸酶活性,上调黑素合成关键调控因子MITF及相关蛋白(TRP-1和TRP-2)的表达,阻断AMPK信号通路,AMPK激动剂能抑制紫铆素所诱导的PIG1细胞黑素合成功能增强。结论紫铆素通过抑制AMPK通路上调MITF及其调控的黑素合成相关蛋白表达与黑素细胞的增殖促进PIG1细胞的黑素生成。 展开更多
关键词 紫铆素 pig1黑素细胞 色素合成 AMPK信号通路
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黑素细胞中PINK1的表达及在氧化损伤中的作用 被引量：1
8
作者 王利娟 李真 +6 位作者 丁晓岚 王芳 李曼 徐前喜 张艳坤 张建中 杜娟 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期985-990,共6页
目的明确正常人黑素细胞PIG1中PINK1的表达,探讨PINK1在黑素细胞氧化损伤中的作用。方法 (1)采用逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)及免疫印迹法(WB),检测PIG1黑素细胞中PINK1的mRNA及蛋白的表达水平;(2)不同浓度H2_O_2处理PIG1细胞24h,CCK-8... 目的明确正常人黑素细胞PIG1中PINK1的表达,探讨PINK1在黑素细胞氧化损伤中的作用。方法 (1)采用逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)及免疫印迹法(WB),检测PIG1黑素细胞中PINK1的mRNA及蛋白的表达水平;(2)不同浓度H2_O_2处理PIG1细胞24h,CCK-8法测定细胞增殖活力,确定H_2O_2最适浓度;(3)设计并合成3对PINK1干扰片段(siRNA)转染PIG1细胞,采用RT-qPCR法筛选干扰效率最高的siRNA;(4)实验分组:对照组、Mock组、NC组、转染组。细胞转染48h后,再加入H_2O_2处理24h,观察各组细胞形态,CCK-8法测定细胞增殖活力。结果 (1)在PIG1黑素细胞中检测到PINK1 mRNA及蛋白的表达;(2)黑素细胞增殖活力呈H2O2浓度依赖性降低,0.6mmol/L H_2O_2组降低至(49.02±2.40)%,接近IC50,故以此浓度作用24h建立氧化损伤模型;(3)与Mock组相比,PINK1-siRNA3转染48h干扰效率最高(>90%);(4)与对照组相比,PINK1-siRNA3转染组树突回缩及变圆悬浮的细胞明显增多,转染组细胞增殖活力明显降低(P<0.01)。结论本研究首次明确了PINK1在正常人黑素细胞中的表达,下调PINK1可加重H_2O_2所致的黑素细胞形态学改变及活力降低,表明PINK1对黑素细胞具有一定的保护性作用。 展开更多
关键词 PINK1 pig1黑素细胞 白癜风 氧化损伤 H2O2
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