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题名基因片段Myo5a原核表达、纯化及多克隆抗体制备
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作者
游荷花
唐锐敏
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机构
山西医科大学汾阳学院免疫学与免疫学检验教研室
山西农业大学生命科学学院
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出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期2227-2231,共5页
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基金
国家自然科学基金青年基金项目(31900450)。
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文摘
目的:制备了PGEX-4T-3/Myo5a原核表达载体,并表达与纯化融合蛋白,制备其多克隆抗体。方法:通过PCR扩增Myo5a末端一个基因小片段,Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到原核载体pGEX-4T-3,制备原核表达载体PGEX-4T-3/Myo5a。鉴定后,在BL21菌中诱导表达蛋白并对重组蛋白进行纯化,重组蛋白PGEX-4T-3/Myo5a采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹进行鉴定。采用融合蛋白免疫家兔,制备其抗血清,测定抗血清效价和特异性。结果:经鉴定后原核表达载体PGEX-4T-3/Myo5a制备成功,表达的重组蛋白相对分子量约为30 kD。免疫家兔后抗血清滴度为1∶128 000,免疫印迹和间接免疫荧光证明其特异性。结论:实验成功制备了PGEX-4T-3/Myo5a原核表达载体,融合蛋白具备了较高的免疫反应性,并得到了其多克隆抗体,为进一步探讨Myo5a的生物学意义做了铺垫。
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关键词
pgex-4T-3/myo5a
原核表达
蛋白表达与纯化
多克隆抗体
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Keywords
pgex-4T-3/myo5a
Prokaryotic expression
Protein expression and purification
Polyclonal antibody
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分类号
R730.2
[医药卫生—肿瘤]
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