基于内质网应激PERK信号通路探讨芍药汤对UC大鼠的作用机制 被引量：14

1

作者 罗敏 杜英杰 +3 位作者 姜燕诗 肖金银 林仁敬 李帅军 《湖南中医药大学学报》 CAS 2021年第11期1663-1668,共6页

目的通过检测内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)信号通路相关基因及蛋白的表达,探讨芍药汤治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法100只SD大鼠建立胃肠湿热证模型后,随机抽取25只作为空白组,其余大鼠用三硝基苯磺酸法在其基础上建... 目的通过检测内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)信号通路相关基因及蛋白的表达,探讨芍药汤治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法100只SD大鼠建立胃肠湿热证模型后,随机抽取25只作为空白组,其余大鼠用三硝基苯磺酸法在其基础上建立UC大鼠模型后分为模型组、柳氮磺吡啶组、芍药汤组,每组25只。空白组、模型组利用生理盐水灌胃,柳氮磺吡啶组利用柳氮磺吡啶灌胃,芍药汤组利用芍药汤灌胃。在灌胃第7、14天,各组大鼠分别进行大鼠疾病活动指数(DAI)评分;同时各组随机处死数量相同的大鼠进行大鼠的结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;用Western blot法及RT-PCR法检测结肠组织PERK蛋白和mRNA的表达。结果造模4 d后,各模型大鼠结肠组织可见溃疡面,并经病检证实,提示造模成功。与空白组比较,各组各时间点DAI评分、CMDI评分均增高(P<0.05)。(1)DAI评分:灌胃7、14 d时,柳氮磺吡啶组与芍药汤均低于模型组(P<0.05);灌胃14 d时,芍药汤组较柳氮磺吡啶组低(P<0.05)。(2)CMDI评分:灌胃7、14 d时,模型组、柳氮磺吡啶组均高于芍药汤组(P<0.05)。(3)p-PERK蛋白和mRNA的表达:灌胃7 d时,与空白组相比,模型组及柳氮磺吡啶组p-PERK蛋白和mRNA表达均升高(P<0.05);芍药汤组p-PERK蛋白和mRNA表达较模型组低(P<0.05);灌胃14 d时,与空白组相比,模型组及柳氮磺吡啶组p-PERK蛋白和mRNA表达均升高(P<0.05);芍药汤组p-PERK蛋白和mRNA表达较模型组及柳氮磺吡啶组低(P<0.05)。结论芍药汤通过抑制胃肠湿热型UC大鼠结肠ESR过程中PERK信号通路的激活,从而改善UC大鼠的症状及体征,这可能是其治疗UC的作用机制。 展开更多

关键词 芍药汤 溃疡性结肠炎 胃肠湿热型 内质网应激 perk信号通路 DAI评分 CMDI评分

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异绿原酸A通过PERK信号通路缓解小反刍兽疫病毒诱导的内质网应激

2

作者 穆芸 孙甜甜 +5 位作者 邝永胜 袁书艺 刘艳芬 陈绍红 刘铀 郭富城 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1408-1417,共10页

病毒感染可诱导宿主细胞产生内质网应激(ERS)与未折叠蛋白反应(UPR),导致内质网稳态失衡。为了探讨异绿原酸A(IAA)在调节小反刍兽疫病毒(PPRV)诱导的ERS和UPR中的作用机制,采用MTT试验、间接免疫荧光试验和Western blot评估IAA的抗PPRV... 病毒感染可诱导宿主细胞产生内质网应激(ERS)与未折叠蛋白反应(UPR),导致内质网稳态失衡。为了探讨异绿原酸A(IAA)在调节小反刍兽疫病毒(PPRV)诱导的ERS和UPR中的作用机制,采用MTT试验、间接免疫荧光试验和Western blot评估IAA的抗PPRV活性;采用Western blot和实时荧光定量PCR观察IAA对PPRV诱导的ERS及PERK信号通路的影响。结果表明,IAA能显著抑制PPRV在LDG-2细胞中的复制及病毒诱导的细胞病变,显著提高病毒感染细胞的存活率;与病毒对照组相比,IAA处理的PPRV感染细胞中GRP78和PPRV表达水平、p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比值均显著降低;GADD153表达水平则在病毒感染24、36h显著降低,在48、60h显著升高。用4-PBA阻断PPRV诱导的ERS,IAA和4-PBA+IAA处理PPRV感染细胞中GRP78、PPRV-N蛋白、GADD153的表达水平及p-eIF2α/eIF2α、p-PERK/PERK比值均显著降低。由此可见,IAA可通过抑制PERKeIF2α-GADD153信号通路的激活缓解PPRV感染诱导的ERS,从而抑制病毒在宿主细胞的复制。 展开更多

关键词 异绿原酸A 小反刍兽疫病毒(PPRV) 内质网应激(ERS) perk信号通路

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平喘颗粒通过PERK信号通路介导的内质网应激抑制细胞自噬改善哮喘小鼠气道重塑的机制研究 被引量：4

3

作者 张潇予 田春燕 +3 位作者 孙丽丽 刘琪 张伟 李竹英 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期5104-5108,共5页

目的:观察平喘颗粒对PERK信号通路介导的内质网应激的影响,明确其抑制细胞自噬改善气道重塑的机制。方法:通过卵清蛋白致敏-激发构建哮喘小鼠模型并给予平喘颗粒、PERK抑制剂进行干预,分别以空白组及模型组小鼠作为对照。采用无束缚全... 目的:观察平喘颗粒对PERK信号通路介导的内质网应激的影响,明确其抑制细胞自噬改善气道重塑的机制。方法:通过卵清蛋白致敏-激发构建哮喘小鼠模型并给予平喘颗粒、PERK抑制剂进行干预,分别以空白组及模型组小鼠作为对照。采用无束缚全身体积描记系统检测小鼠气道高反应性,ELISA法检测肺泡灌洗液中炎症因子及总IgE的含量,HE、PAS和Masson染色观察各组小鼠肺组织病理形态,透射电镜观察肺组织自噬体数量,Western blot检测自噬及内质网应激相关蛋白的表达水平。结果:与模型组比较,平喘颗粒组与抑制剂组治疗后气道阻力明显改善,肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13及总IgE的含量显著降低(P<0.01),气道炎症评分、PAS评分及胶原染色面积显著降低(P<0.01),Beclin-1、PERK、ATF4、CHOP蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-eIF2α/totaleIF2α的比值显著降低(P<0.01),p62蛋白的表达显著增加(P<0.01)。结论:平喘颗粒通过抑制PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路的激活介导的内质网应激抑制细胞自噬水平,从而改善哮喘的气道重塑。 展开更多

关键词 平喘颗粒 perk信号通路 内质网应激 自噬 哮喘

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香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠内质网应激PERK信号通路的影响 被引量：1

4

作者 杜莹 贾连群 +2 位作者 冷雪 王杰 杨关林 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2023年第9期75-78,I0023,共5页

目的探讨香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为4组,即正常对照组、脾虚高脂组、香砂六君子汤组和辛伐他汀组,后3组采用饮食不节... 目的探讨香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为4组,即正常对照组、脾虚高脂组、香砂六君子汤组和辛伐他汀组,后3组采用饮食不节加力竭游泳的复合方法造模15 d后,正常组喂饲基础饲料,其余3组喂饲高脂饲料。12周后,分别给予相对剂量药物和生理盐水。4周后,检测各组大鼠血脂含量、D-木糖排泄率,油红O染色观察肝脏脂质沉积情况,实时荧光定量PCR及Western blot法检测大鼠肝脏葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kD,GRP78)、PERK和活化转录因子4(the activating transcription factor 6,ATF4)基因及蛋白表达。结果与正常对照组比较,脾虚高脂组大鼠血清脂质异常,表现为总胆固醇(cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇酯(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)明显升高,高密度脂蛋白胆固醇酯(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)明显降低,尿D-木糖排泄率明显降低;肝脏脂质沉积显著,可见明显脂滴;肝脏GRP78、PERK和ATF4 mRNA水平及蛋白表达水平显著升高。与脾虚高脂组比较,香砂六君子汤组和辛伐他汀组大鼠血清TC、TG、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高,尿D-木糖排泄率明显升高;其肝脏脂质沉积情况有明显改善,脂滴不同程度减轻;肝脏GRP78、PERK和ATF4 mRNA水平及蛋白表达水平明显降低。结论香砂六君子汤可能通过调控内网应激PERK信号通路来纠正脾虚脂质紊乱的状态。 展开更多

关键词 香砂六君子汤 脾虚 高脂血症 内质网应激 perk信号通路

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基于PERK信号通路介导的细胞凋亡及杯状细胞破坏探讨芍药汤对溃疡性结肠炎大鼠的作用机制 被引量：3

5

作者 吴志强 肖玉娇 +5 位作者 谷丽瑶 李旭 张佩雯 王梨力 肖金银 罗敏 《陕西中医》 CAS 2022年第11期1511-1515,共5页

目的:通过检测溃疡性结肠炎(UC)大鼠p-PERK通路蛋白、C/EBP同源蛋白的表达及结肠杯状细胞数量,探讨芍药汤对UC大鼠的作用机制。方法:84只SD大鼠中随机抽取14只作为空白组,余下70只大鼠通过三硝基苯磺酸建立UC大鼠模型,除去死亡大鼠,随... 目的:通过检测溃疡性结肠炎(UC)大鼠p-PERK通路蛋白、C/EBP同源蛋白的表达及结肠杯状细胞数量,探讨芍药汤对UC大鼠的作用机制。方法:84只SD大鼠中随机抽取14只作为空白组,余下70只大鼠通过三硝基苯磺酸建立UC大鼠模型,除去死亡大鼠,随机分为模型组12只、柳氮磺吡啶组13只、芍药汤低剂量组12只、芍药汤中剂量组13只、芍药汤高剂量组13只。空白组、模型组用等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃,柳氮磺吡啶组采用柳氮磺吡啶灌胃,芍药汤高、中、低剂量组按照芍药汤不同剂量灌胃。第14天进行疾病活动指数(DAI)评分。随后将大鼠处死并解剖,进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分,并检测大鼠结肠p-PERK通路蛋白、C/EBP同源蛋白的表达及结肠杯状细胞数量。结果:与空白组比较,柳氮磺吡啶组及芍药汤不同剂量组大鼠DAI、CMDI评分均增高(P<0.05),与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组DAI、CMDA评分均降低(P<0.05),柳氮磺吡啶组与芍药汤高、中、低剂量组DAI、CMDA评分比较无统计学差异(P>0.05);与空白组比较,模型组、柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均上升(P<0.05);与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均下降(P<0.05);与芍药汤低剂量组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均下降(P<0.05);柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达无统计学差异(P>0.05);与空白组比较,其他各组杯状细胞数量均下降(P<0.05);与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组杯状细胞数量均明显增加(P<0.05);与芍药汤低剂量组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组杯状细胞数量均增加(P<0.05);柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组杯状细胞数量比较无统计学差异(P>0.05)。结论:芍药汤能抑� 展开更多

关键词 溃疡性结肠炎 芍药汤 perk信号通路 细胞凋亡 杯状细胞

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内质网应激PERK信号通路蛋白在盆腔器官脱垂患者阴道壁组织中的表达及意义

6

作者 陈飞 金玉茜 +3 位作者 柳鹏 李洁 王鲁文 李蕾 《中国妇产科临床杂志》 CSCD 2023年第6期614-618,共5页

目的探究女性盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,POP)患者阴道壁组织中的内质网应激反应情况,以及内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)信号通路蛋白在患者阴道壁组织中的表... 目的探究女性盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,POP)患者阴道壁组织中的内质网应激反应情况,以及内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)信号通路蛋白在患者阴道壁组织中的表达和意义。方法对符合入组排除标准的患者在术中收集60例POP患者和24例非盆底功能障碍性疾病患者的阴道前壁组织,采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫组织化学染色检测组织中葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein 78,GRP78)、PERK、真核起始因子2α(eukaryotic translation-initiation factor 2α,eIF2α)、转录激活因子4(activating transcription factor 4,ATF4)的mRNA和蛋白表达情况。结果qRT-PCR结果显示,与对照组比较,POP-QⅠ~Ⅱ期患者阴道前壁组织中GRP78、PERK、eIF2α以及ATF4的mRNA相对表达水平为1.553±0.074、1.280±0.068、1.473±0.112和1.172±0.109,POP-QⅢ~Ⅳ期患者阴道前壁组织中四者的mRNA相对表达水平为1.977±0.098、1.901±0.080、2.084±0.118和1.836±0.080,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,POP患者阴道前壁组织中GRP78、PERK、eIF2α以及ATF4的蛋白表达水平较对照组明显升高,且GRP78、PERK、eIF2α以及ATF4在POP-QⅢ~Ⅳ期患者阴道前壁组织中的表达高于POP-QⅢ~Ⅳ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论女性POP患者的阴道壁组织中存在内质网应激反应,其内质网应激关键蛋白GRP78及PERK信号通路蛋白在组织中表达增加,可能与POP的发生、发展相关。 展开更多

关键词 盆腔器官脱垂 内质网应激 perk信号通路 阴道壁组织

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丹参酮ⅡA减轻棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡及内质网应激 被引量：1

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作者 王亚丹 艾景雪 +2 位作者 高瑞 李运丽 张海波 《广州中医药大学学报》 CAS 2021年第8期1685-1692,共8页

【目的】探讨丹参酮ⅡA对棕榈酸诱导心肌细胞脂毒性损伤模型内质网应激凋亡的影响。【方法】将对数期H9c2细胞分6组,即对照组,棕榈酸(400μmol/L)组,丹参酮ⅡA 20μmol/L组和棕榈酸+丹参酮ⅡA(5、10、20μmol/L)组,另外引入棕榈酸+CCT02... 【目的】探讨丹参酮ⅡA对棕榈酸诱导心肌细胞脂毒性损伤模型内质网应激凋亡的影响。【方法】将对数期H9c2细胞分6组,即对照组,棕榈酸(400μmol/L)组,丹参酮ⅡA 20μmol/L组和棕榈酸+丹参酮ⅡA(5、10、20μmol/L)组,另外引入棕榈酸+CCT020312组与棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA 20μmol/L组考察通路激活状态。细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定H9c2细胞活力;流式细胞术测定细胞凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测细胞内质网应激相关分子葡萄糖调控蛋白78(GRP78)、转录激活因子4(ATF4)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、蛋白激酶RNA样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)的蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,棕榈酸组细胞存活率显著降低(P <0.01),GRP78、ATF4、CHOP m RNA和蛋白表达水平均显著升高(P <0.01),H9c2细胞的凋亡率升高,p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也显著增大(P <0.01),凋亡相关分子Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平均显著升高(P <0.01)。不同浓度丹参酮ⅡA作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+丹参酮ⅡA(5、10、20μmol/L)组细胞存活率显著升高(P <0.01),GRP78、ATF4、CHOP mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P <0.01),H9c2细胞的凋亡率降低,p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也显著减小(P <0.01),Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平显著降低(P <0.01),均具有剂量依赖性,且棕榈酸+丹参酮ⅡA 10μmol/L组(P <0.05)和棕榈酸+丹参酮ⅡA 20μmol/L组(P <0.05)变化显著。加入PERK通路激活剂CCT020312作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+CCT020312组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P <0.05);再经过丹参酮ⅡA处理,与棕榈� 展开更多

关键词 丹参酮ⅡA 脂毒性损伤 凋亡 内质网应激 perk信号通路 棕榈酸 心肌细胞

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PERK通路在吗啡保护心肌H9c2细胞过程中的作用 被引量：1

8

作者 赵苗 韩雅茹 +4 位作者 贺翼飞 付宇 刘宇琳 习瑾昆 贺永贵 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期9-16,共8页

目的:探讨吗啡(morphine)是否通过PERK通路降低内质网应激,阻止线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放,从而保护氧化应激损伤的心肌细胞。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,用H2O2建立氧化应激模型,随机分为对照组、H2O2组、H2O2+morphine组、H2... 目的:探讨吗啡(morphine)是否通过PERK通路降低内质网应激,阻止线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放,从而保护氧化应激损伤的心肌细胞。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,用H2O2建立氧化应激模型,随机分为对照组、H2O2组、H2O2+morphine组、H2O2+morphine+PERK通路抑制剂GSK2656157组、morphine组和GSK2656157组。免疫组化法检测吗啡对氧化应激引起葡萄糖调节蛋白(GRP)78和GRP94表达的影响;Western blot法检测PERK信号通路相关蛋白的水平;利用共聚焦显微镜观察吗啡对氧化应激所致mPTP开放及内质网的影响;乳酸脱氢酶(LDH)和MTT试剂盒分别检测细胞毒性和细胞活力。结果:与对照组相比,H2O2组GRP78和GRP94蛋白为强阳性表达,棕黄色颗粒明显增加,吗啡明显抑制此过程。与对照组相比,不同浓度GSK2656157使PERK的磷酸化明显减少,其中2μmol/L的作用效果最为显著(P<0.05)。氧化应激使GRP78、GRP94、p-PERK和CHOP的蛋白水平明显增加,使糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化明显减少;线粒体TMRE和内质网ER-Tracker Red红色荧光强度均明显减少;细胞毒性明显增强,细胞活力明显减弱。吗啡明显抑制H2O2引起的改变,而GSK2656157可进一步加强吗啡的作用(P<0.05)。结论:吗啡通过抑制PERK通路降低内质网应激,使GSK-3β失活,进而阻止mPTP开放,保护受氧化应激损伤的心肌H9c2细胞。 展开更多

关键词 吗啡 心肌保护 氧化应激 内质网应激 perk信号通路

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4-苯基丁酸抑制蛋白激酶R样内质网激酶信号通路对大鼠肺动脉高压的作用 被引量：1

9

作者 武云 王捷 +5 位作者 李倩 李康 阿里旦.艾尔肯 古丽那扎尔 吴雷琪 米娜瓦尔.胡加艾合买提 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第23期2161-2165,共5页

目的通过4-苯基丁酸(4-PBA)对内质网应激关键信号通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)的干预,探讨其对大鼠肺动脉高压的作用。方法选择Wistar雄性大鼠,按照体重随机分为正常组、模型组、实验1组及实验2组。用一次性腹腔注射野百合碱(60 mg&... 目的通过4-苯基丁酸(4-PBA)对内质网应激关键信号通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)的干预,探讨其对大鼠肺动脉高压的作用。方法选择Wistar雄性大鼠,按照体重随机分为正常组、模型组、实验1组及实验2组。用一次性腹腔注射野百合碱(60 mg·kg^(-1))的方法建立肺动脉高压模型。实验1组于建模2周后,按500 mg·kg^(-1)·d-1剂量给大鼠灌服4-PBA 2周;实验2组于建模第1天开始,每日按同等剂量给大鼠灌服4-PBA 4周。分别用BL-420F生物信息采集系统、HE染色及分子生物学手段检测各组大鼠血流动力学、病理形态学及PERK信号通路中关键因子的mRNA水平及蛋白表达。结果经4-PBA干预后,与模型组的平均肺动脉压力为(57.10±4.77)mm Hg相比,实验1组及实验2组的平均肺动脉压力分别为(23.06±1.54),(37.31±4.57)mm Hg,显著降低,差异有统计学意义(P<0.001)。与模型组的肺细小动脉中膜厚度比率为(50.84±6.12)%相比,实验1组及实验2组的肺细小动脉中膜厚度比率分别为(22.05±4.86)%,(18.36±1.51)%,明显降低,差异有统计学意义(P<0.001)。PERK信号通路中关键因子Perk的mRNA水平:模型组为21.93±5.71,实验1组及实验2组分别为1.02±0.05,4.01±0.27,明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);同时,模型组的蛋白表达水平为0.48±0.04,实验1组及实验2组分别为0.32±0.04,0.24±0.03,明显降低,差异有统计学意义(均P<0.01);其余因子的mRNA及蛋白表达水平较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 4-PBA通过抑制内质网应激关键信号通路PERK,可以达到防治肺动脉高压的作用。 展开更多

关键词 肺动脉高压 内质网应激 4-苯基丁酸 perk信号通路

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硫酸镍对人正常肝细胞存活率及相关凋亡蛋白影响

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作者 刘必勇 赵盼 +1 位作者 王雷 陈葆春 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2020年第5期548-552,共5页

目的探讨硫酸镍对人正常肝细胞系L02细胞的存活率和凋亡的影响。方法 (1)将对数生长期的L02细胞随机分为9个组,每组6个复孔,分别以浓度为0、100、200、300、400、500、600、700和800μmol/L的硫酸镍染毒0、6、12、24、48、72 h,采用CCK-... 目的探讨硫酸镍对人正常肝细胞系L02细胞的存活率和凋亡的影响。方法 (1)将对数生长期的L02细胞随机分为9个组,每组6个复孔,分别以浓度为0、100、200、300、400、500、600、700和800μmol/L的硫酸镍染毒0、6、12、24、48、72 h,采用CCK-8法检测L02细胞的存活率,选择后续实验的硫酸镍染毒剂量与染毒时间。(2)将对数生长期的L02细胞随机分为对照组和100、300μmol/L剂量组,分别以浓度为0、100、300μmol/L的硫酸镍染毒12 h,蛋白免疫印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶(caspase)-3蛋白、BCL-2相关X蛋白(BAX)、磷酸化RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α(p-eIF2α)、CCAAT增强子结合蛋白的同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的蛋白相对表达水平。结果 (1)硫酸镍染毒后,L02细胞的细胞存活率呈现随着染毒时间的延长、染毒剂量的增加而下降的趋势(P值均<0.01);根据硫酸镍对L02细胞的半数抑制浓度,选择后续实验中硫酸镍染毒时间为12 h,染毒剂量为100、300μmol/L。(2)与对照组比较,100、300μmol/L组L02细胞中BCL-2蛋白相对表达水平均降低(P值均<0.05),BAX和caspase-3蛋白相对表达水平、BAX/BCL-2比值均升高(P值均<0.05);与100μmol/L组比较,300μmol/L组L02细胞中BCL-2蛋白相对表达水平降低(P<0.05),BAX和caspase-3蛋白相对表达水平、BAX/BCL-2比值均升高(P值均<0.05)。与对照组比较,100、300μmol/L组L02细胞中p-PERK、p-eIF2α、CHOP和GRP78蛋白的相对表达水平均升高(P值均<0.05);与100μmol/L组比较,300μmol/L组L02细胞中p-eIF2α、CHOP和GRP78蛋白相对表达水平均升高(P值均<0.05)。结论硫酸镍可调控L02细胞凋亡蛋白和PERK信号通路相关蛋白的表达,加剧L02细胞的凋亡,降低L02细胞的细胞存活率。 展开更多

关键词 硫酸镍 人正常肝细胞 细胞凋亡 perk信号通路

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运动联合抗抑郁药物对大鼠海马细胞和BDNF/pERK信号通路的影响 被引量：11

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作者 包玲 胡晓华 +2 位作者 王宗琴 高作慧 冯映映 《中国现代医学杂志》 CAS 2018年第20期14-19,共6页

目的研究运动联合帕罗西汀的抗抑郁效果及其作用机制。方法采用慢性不可预知性温和应激复制大鼠抑郁模型,分为对照组、模型组、运动组、给药组、联合组,每组12只。通过规律性运动和帕罗西汀进行干预,用糖水和Morris水迷宫实验检测大鼠... 目的研究运动联合帕罗西汀的抗抑郁效果及其作用机制。方法采用慢性不可预知性温和应激复制大鼠抑郁模型,分为对照组、模型组、运动组、给药组、联合组,每组12只。通过规律性运动和帕罗西汀进行干预,用糖水和Morris水迷宫实验检测大鼠行为学,作为缺乏快感的客观指标,判定模型是否复制成功。采用DCFH-DA法检测海马细胞的凋亡率和活性氧(ROS)水平,Western blot检测海马细胞中脑源性神经营养因子(BDNF)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p ERK)、神经肽(VGF)蛋白表达水平。结果与对照组相比,联合组糖水消耗量降低,逃避潜伏期延长(P<0.05);与运动组相比,联合组大鼠21 d后糖水消耗量增加,逃避潜伏期降低(P<0.05)。与运动组相比,联合组细胞ROS、凋亡率降低(P<0.05)。模型组大鼠海马细胞中BDNF、p ERK、VGF蛋白表达低于对照组(P<0.05);与运动组相比,联合组海马细胞中BDNF、p ERK、VGF蛋白表达升高。结论运动联合帕罗西汀的抗抑郁效果优于单一运动疗法或药物治疗,可更好地缓解快感缺乏,降低海马细胞凋亡率和氧化应激损伤,其可能是通过BDNF/p ERK信号通路调控下游靶基因VGF的表达而发挥作用。 展开更多

关键词 运动 抑郁症 海马细胞 凋亡 BDNF/perk信号通路

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独活寄生汤干预膝骨关节炎模型大鼠软骨PERK/Bip信号通路的表达 被引量：19

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作者 陈俊 吴广文 +5 位作者 许惠凤 郑春松 李西海 邱建清 刘淑如 刘献祥 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第28期4493-4500,共8页

背景:前期研究表明独活寄生汤可有效抑制软骨细胞凋亡,但其具体机制尚不明确。目的:观察独活寄生汤对膝骨关节炎大鼠软骨PERK/Bip信号通路关键调节因子PERK、Bip、eI F-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3的影响,探讨独活寄生... 背景:前期研究表明独活寄生汤可有效抑制软骨细胞凋亡,但其具体机制尚不明确。目的:观察独活寄生汤对膝骨关节炎大鼠软骨PERK/Bip信号通路关键调节因子PERK、Bip、eI F-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3的影响,探讨独活寄生汤防治骨关节炎的作用机制。方法:80只SD大鼠适应性喂养1周后,随机分为正常组(20只)和造模组(60只)。造模组应用膝关节注射木瓜蛋白酶法制备膝骨关节炎模型。造模成功后随机分为3组,即模型组(n=20)、治疗组(n=20)和阳性对照组(n=20)。正常组和模型组给予生理盐水;治疗组给予独活寄生汤,按照9.3 g/(kg·d)的药量进行灌胃;阳性对照组给予盐酸氨基葡萄糖胶囊0.15 g/(kg·d)。2周为1个疗程,共4个疗程。分别于2,4个疗程后切取右侧胫骨平台,免疫组化法和RT-PCR法检测PERK、Bip、e IF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白和mRNA表达情况。结果与结论:(1)RT-PCR结果显示,独活寄生汤和盐酸氨基葡萄糖均能抑制PERK、Bip、e IF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达(P<0.05或0.01),干预时间越长,效果越明显,但2组间无显著差异(P>0.05);(2)免疫组化结果与RT-PCR结果趋势一致,即独活寄生汤和盐酸氨基葡萄糖均能抑制PERK、Bip、e IF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达(P<0.05或0.01),干预时间越长,效果越明显,但2组间无显著性差异(P>0.05);(3)结果提示,独活寄生汤可能是通过调控PERK/Bip信号通路,进而抑制因内质网应激反应引起的软骨细胞凋亡。 展开更多

关键词 独活 骨关节炎 细胞凋亡 组织工程 独活寄生汤 软骨 perk/Bip信号通路 eIF-2α ATF-4 GADD153 Caspase-9 Caspase-3 免疫组化 内质网应激 国家自然科学基金

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4-苯基丁酸抑制PERK/Bip信号通路缓解骨关节炎大鼠内质网应激 被引量：5

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作者 李炳亮 王建 杨娅 《解剖科学进展》 2020年第6期673-676,共4页

目的观察内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-Phenylbutyricacid,4-PBA)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠内质网应激的影响,探讨PERK/Bip信号通路的调控机制。方法SD大鼠30只,随机分为假手术组(Sham),骨关节炎模型组(OA)和4-PBA治疗组(OA+4... 目的观察内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-Phenylbutyricacid,4-PBA)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠内质网应激的影响,探讨PERK/Bip信号通路的调控机制。方法SD大鼠30只,随机分为假手术组(Sham),骨关节炎模型组(OA)和4-PBA治疗组(OA+4-PBA),每天灌胃0.35g/kg的4-PBA,连续4周;HE染色观察病理组织学变化,TUNEL观察细胞凋亡;ELISA检测炎症因子和氧化应激因子含量;Western blot法检测内质网应激相关蛋白及PERK/Bip信号通路的表达变化。结果4-PBA减轻骨关节炎大鼠损伤,降低膝关节滑膜组织细胞凋亡率,抑制氧化应激损伤和炎症反应,抑制内质网应激GRP78和caspase12的表达,同时下调PERK/Bip信号通路的表达水平。结论4-PBA抑制内质网应激引起的OA大鼠关节损伤,与抑制PERK/Bip信号通路相关。 展开更多

关键词 4-苯基丁酸 关节炎 内质网应激 perk/Bip信号通路 大鼠

原文传递

独活寄生汤含药血清对退变软骨细胞PERK/Bip通路关键调控蛋白的影响 被引量：3

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作者 陈俊 许惠凤 +6 位作者 郑春松 叶锦霞 陈振沅 邱建清 刘淑如 刘献祥 吴广文 《福建中医药》 2018年第5期28-31,共4页

目的观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞PERK/Bip信号通路关键调控蛋白的影响。方法采用IL-1β诱导建立体外退变软骨细胞模型,分别采用空白血清和独活寄生汤含药血清干预24 h、48 h、72h后,收集软骨细胞,采用Western Blot法检测... 目的观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞PERK/Bip信号通路关键调控蛋白的影响。方法采用IL-1β诱导建立体外退变软骨细胞模型,分别采用空白血清和独活寄生汤含药血清干预24 h、48 h、72h后,收集软骨细胞,采用Western Blot法检测退变软骨细胞中PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达变化。结果随着干预时间的延长,空白血清组和含药血清组PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达均逐渐降低,含药血清组降低更明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论独活寄生汤可能是通过调控PERK/Bip信号通路,抑制软骨细胞凋亡,从而起到治疗膝骨关节炎的作用。 展开更多

关键词 骨关节炎 退变软骨细胞 perk/Bip信号通路 独活寄生汤 含药血清 大鼠

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胆碱对肠系膜上动脉缺血再灌注大鼠血管损伤的影响及其分子机制 被引量：2

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作者 逯星竹 赵阳 +1 位作者 李楠 毕学苑 《山东医药》 CAS 2021年第23期24-27,共4页

目的观察胆碱对肠系膜上动脉缺血再灌注(IR)大鼠血管损伤的影响,并探讨其可能的分子机制。方法选择健康雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组、IR组和胆碱治疗组各12只。IR组建立大鼠肠系膜上动脉IR模型,胆碱治疗组根据体质量舌下静脉注射胆... 目的观察胆碱对肠系膜上动脉缺血再灌注(IR)大鼠血管损伤的影响,并探讨其可能的分子机制。方法选择健康雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组、IR组和胆碱治疗组各12只。IR组建立大鼠肠系膜上动脉IR模型,胆碱治疗组根据体质量舌下静脉注射胆碱10 mg/kg后建立IR模型,假手术组仅开腹。各组分离肠系膜上动脉,HE染色后观察血管组织病理改变。收集各组腹主动脉血,采用比色法检测血清乳酸脱氢酶(LDH)水平。采用Western blotting法检测肠系膜上动脉组织PKR样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、免疫球结合蛋白(Bip)、磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)表达。结果假手术组大鼠肠系膜上动脉血管形态完整,血管内皮细胞未见异常;与假手术组比较,IR组大鼠血管内皮细胞存在空泡变性、炎性浸润,血管内皮细胞脱落;与IR组比较,胆碱治疗组大鼠肠系膜上动脉血管形态较完整,内皮细胞恢复正常,其病理改变介于假手术组和IR组之间。假手术组、IR组和胆碱治疗组血清LDH水平分别为(430.96±36.45)、(713.47±87.98)、(449.38±50.39)U/L,IR组血清LDH水平明显高于假手术组和胆碱治疗组(P均<0.05),假手术组和胆碱治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。IR组大鼠肠系膜上动脉p-PERK/PERK、Bip表达均高于胆碱治疗组、假手术组,p-AMPK/AMPK低于胆碱治疗组、假手术组(P均<0.05),胆碱治疗组、假手术组上述指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。三组PERK、AMPK表达比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论胆碱能减轻大鼠肠系膜上动脉IR导致的血管损伤,其机制可能与抑制PERK/Bip信号通路、活化AMPK有关。 展开更多

关键词 缺血再灌注 肠系膜上动脉 胆碱 血管损伤 perk/Bip信号通路 AMPK 大鼠

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miR-142-3p靶向PERK/Bip信号通路对骨关节炎模型大鼠的干预作用

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作者 魏萌 张英民 +3 位作者 康少英 李建伟 王振兴 陈伟 《局解手术学杂志》 2022年第5期379-384,共6页

目的探究微小RNA-142-3p(miR-142-3p)靶向蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/免疫球蛋白结合蛋白(Bip)信号通路对骨关节炎模型大鼠的干预作用。方法选取60只SPF级雄性大鼠,随机挑选15只作为空白组,其余45只建立骨关节炎模型,最终39只建模成功... 目的探究微小RNA-142-3p(miR-142-3p)靶向蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/免疫球蛋白结合蛋白(Bip)信号通路对骨关节炎模型大鼠的干预作用。方法选取60只SPF级雄性大鼠,随机挑选15只作为空白组,其余45只建立骨关节炎模型,最终39只建模成功,随机分为模型组、下调组、上调组,每组13只;建模成功后,空白组和模型组于膝部注射生理盐水,上调组和下调组分别于右膝关节腔内注射miR-142-3p mimic和miR-142-3p inhibitor。HE染色观察各组大鼠膝关节软骨组织病理学变化;观察并比较各组大鼠膝关节活动度、压痛阈值、热痛阈值;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;实时荧光定量PCR检测转化生长因子-β(TGF-β)、Ⅰ型胶原α1(COL1α1)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)mRNA水平;Western blot检测PERK/Bip信号通路蛋白表达量。结果与模型组相比,下调组miR-142-3p表达量降低,上调组miR-142-3p表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05),提示miR-142-3p转染成功。通过组织病理学观察发现,空白组和上调组大鼠膝关节软骨组织完整,模型组和下调组大鼠膝关节软骨退变,正常软骨结构丧失。与空白组比较,其他各组大鼠膝关节活动度较小,压痛阈值、热痛阈值较低,IL-1β、TNF-α、TGF-β、COL1α1、TIMP1 mRNA水平较高,PERK、Bip、Caspase-9蛋白表达较高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,下调组大鼠膝关节活动度较小,压痛阈值、热痛阈值较低,IL-1β、TNF-α、TGF-β、COL1α1、TIMP1 mRNA水平较高,PERK、Bip、Caspase-9蛋白表达较高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组和下调组比较,上调组大鼠膝关节活动度较大,压痛阈值、热痛阈值较高,IL-1β、TNF-α、TGF-β、COL1α1、TIMP1 mRNA水平较低,PERK、Bip、Caspase-9蛋白表达较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论上调骨关节炎大鼠miR-142-3p的表达可� 展开更多

关键词 perk/Bip信号通路 微小RNA-142-3p 骨关节炎 炎症反应 滑膜纤维化

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基于GRP78/PERK/CHOP通路探讨车叶草苷对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响 被引量：1

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作者 曹龄之 付国旭 +2 位作者 杨凡慧 文丹 李素平 《现代消化及介入诊疗》 2022年第10期1282-1287,共6页

目的探究车叶草苷(Asperuloside,Asp)通过调节葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)/蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer binding protein ho... 目的探究车叶草苷(Asperuloside,Asp)通过调节葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)/蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP)信号通路对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法收集42例胰腺癌组织及其癌旁的正常组织,并将胰腺癌组织分为24例转移组织和18例未转移组织。将sw1990细胞分为sw1990组(未作任何处理的sw1990细胞)、L-Asp组(1 mmol/L Asp)、M-Asp组(2 mmol/L Asp)、H-Asp组(3 mmol/L Asp)、4-PBA组(3 mmol/L Asp+1 mmol/L 4-PBA处理sw1990细胞)。CCK-8和Edu检测sw1990细胞增殖;流式细胞术检测sw1990细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移率;Transwell法检测sw1990细胞侵袭;Western blot检测上皮间质转化(EMT)蛋白、自噬、凋亡蛋白以及通路相关蛋白水平。结果正常组织、无转移的胰腺癌组织、有转移的胰腺癌组织GRP78、PERK、p-CHOP/CHOP蛋白水平依次显著降低(P<0.05)。与sw1990组相比,L-Asp组、M-Asp组、H-Asp组的sw1990细胞生长率、阳性率、迁移率以及侵袭细胞数量、vimentin、Twist1、Bcl-2蛋白水平依次显著下降(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin、Bax、cleaved-Caspase-12、GRP78、PERK、p-CHOP/CHOP、Beclin1、LC3-II/I蛋白水平依次显著升高(P<0.05);与H-Asp组相比,4-PBA组sw1990细胞生长率、阳性率、迁移率以及侵袭细胞数量、vimentin、Twist1、Bcl-2蛋白水平显著上升(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin、Bax、cleaved-Caspase-12、GRP78、PERK、p-CHOP/CHOP、Beclin1、LC3-II/I蛋白水平依次显著下降(P<0.05)。结论Asp可能通过上调GRP78/PERK/CHOP信号通路来抑制胰腺癌细胞的增殖,促进其凋亡。 展开更多

关键词 车叶草苷 GRP78/perk/CHOP信号通路 胰腺癌 增殖 凋亡

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乔松素对内质网应激所致内皮细胞凋亡的抑制作用及机制 被引量：2

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作者 于飞 田华 +6 位作者 卢珊 郭亚新 王晓旭 焦鹏 宗传龙 姚树桐 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1006-1013,共8页

目的:探讨乔松素对内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素(TM)所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的抑制作用及其机制。方法:体外培养HUVECs,分别给予6. 25、12. 5和25 mg/L乔松素预处理1 h,再加入TM(10mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin... 目的:探讨乔松素对内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素(TM)所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的抑制作用及其机制。方法:体外培养HUVECs,分别给予6. 25、12. 5和25 mg/L乔松素预处理1 h,再加入TM(10mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞活力和细胞凋亡情况;采用试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,并采用Hoechst 33342/PI双染法检测细胞膜损伤情况;采用Western blot法检测ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和ERS凋亡途径关键蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况,以及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和真核翻译起始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平;免疫荧光细胞化学法检测活化转录因子6(ATF6)的核转位情况。结果:乔松素(12. 5和25 mg/L)预处理显著抑制TM所诱导的细胞活力降低、LDH漏出、PI阳性细胞率和凋亡率增加(P<0. 05或P<0. 01)。TM显著上调GRP78和CHOP的蛋白表达水平,且促进其上游调控蛋白PERK和e IF2α磷酸化及ATF6核转位,而乔松素显著拮抗TM所致的上述变化,并呈剂量依赖性(P<0. 05或P<0. 01)。结论:乔松素可减轻ERS诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制ATF6/PERK-CHOP信号通路的活化有关。 展开更多

关键词 乔松素 内质网应激 内皮细胞 细胞凋亡 ATF6/perk-CHOP信号通路

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