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乳链菌肿瘤特异性标记载体的构建及初步验证
1
作者 陈雅莹 陈科全 陈学清 《现代消化及介入诊疗》 2014年第4期214-217,共4页
目的利用乳链菌穿梭载体构建肿瘤特异标记表达系统,为肿瘤特异性口服疫苗的研究开辟一个新领域。方法采用体外基因拼装的方法得到PEG-3启动子,经酶切鉴定并测序验证。然后利用基因克隆技术,将PEG-3启动子、EGFP、Poly A亚克隆到乳链菌载... 目的利用乳链菌穿梭载体构建肿瘤特异标记表达系统,为肿瘤特异性口服疫苗的研究开辟一个新领域。方法采用体外基因拼装的方法得到PEG-3启动子,经酶切鉴定并测序验证。然后利用基因克隆技术,将PEG-3启动子、EGFP、Poly A亚克隆到乳链菌载体pTRKH2中,成功得到肿瘤特异标记质粒pTR-peg3-egfp。最后,转染肿瘤及非肿瘤细胞初步验证其肿瘤特异性标记能力。结果通过PCR基因拼装得到460bp左右目的片段,测序结果与设计完全一致。获得了肿瘤特异标记的乳链菌穿梭质粒pTR-peg3-egfp,并在细胞水平得到初步验证。结论 PEG-3启动子介导的乳链菌穿梭质粒具有肿瘤特异性,这一实用新颖的系统将为研究乳链菌疫苗应用于肿瘤标记及靶向治疗奠定基础。 展开更多
关键词 peg-3启动子 乳链菌 基因治疗 肿瘤
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重组腺病毒Ad－HP对肝癌细胞及肝癌肺转移模型的抑制效应
2
作者 齐延新 王浩然 +5 位作者 李霄 王卓越 胡宁宁 郭欢欢 吴娜 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期823-827,832,共6页
为探讨重组腺病毒Ad-HP对人肝癌细胞BEL-7402的影响及其对鼠肝癌肺转移模型的抑制作用,本研究利用MTT染色法进行了Ad-HP的体外抑瘤研究,并应用Annexin V检测、Caspase活性检测、AO/EB染色和DAPI染色等方法分析了Ad-HP的抑瘤方式。另外,... 为探讨重组腺病毒Ad-HP对人肝癌细胞BEL-7402的影响及其对鼠肝癌肺转移模型的抑制作用,本研究利用MTT染色法进行了Ad-HP的体外抑瘤研究,并应用Annexin V检测、Caspase活性检测、AO/EB染色和DAPI染色等方法分析了Ad-HP的抑瘤方式。另外,本研究利用鼠肝癌细胞H22,建立了肝癌肺转移动物模型,并检测了Ad-HP对肝癌肺转移的抑制作用及其对模型动物免疫的影响。结果表明,Ad-HP能够有效抑制BEL-7402细胞的生长,且其作用具有一定时效和剂效关系趋势;Ad-HP感染导致BEL-7402细胞呈现磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加和Caspase酶活性增强等典型凋亡特征;应用Ad-HP治疗肿瘤模型能够有效延长模型动物平均生存期,控制转移灶形成,增强NK和CTL活性,上调Th1类细胞因子水平。总之,Ad-HT能够通过诱导细胞凋亡抑制BEL-7402肿瘤细胞增殖,并且能够有效控制肝癌肺转移灶形成,延长模型动物平均生存期。 展开更多
关键词 NDV HN基因 peg-3启动子 重组腺病毒 肝癌 抗肿瘤
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PEG3启动子启动铁蛋白报告基因在干细胞瘤变时特异表达及体外磁共振成像 被引量：2
3
作者 孙君 蔡金华 +2 位作者 秦勇 李晓朦 仇嘉文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1117-1124,共8页
目的探讨利用肿瘤特异性启动子PEG3驱动MRI报告基因铁蛋白重链(ferritin heavy chain 1, FTH1)在干细胞瘤变时特异性表达并进行MRI检测的可行性。方法构建PEG3启动子控制FTH1表达的病毒载体PEG3-FTH1-LV,感染大鼠骨髓间充质干细胞(mesen... 目的探讨利用肿瘤特异性启动子PEG3驱动MRI报告基因铁蛋白重链(ferritin heavy chain 1, FTH1)在干细胞瘤变时特异性表达并进行MRI检测的可行性。方法构建PEG3启动子控制FTH1表达的病毒载体PEG3-FTH1-LV,感染大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs),获得MSCs-PEG3-FTH1细胞,MSCs和MSCs-CMV-FTH1作为对照,通过与大鼠胶质瘤细胞C6间接共培养2周诱导其瘤变为TMSCs、TMSCs-PEG3-FTH1、TMSCs-CMV-FTH1。观察细胞形态,检测细胞迁移能力、细胞增殖速度及细胞表面抗体CD29、CD34、CD45、CD90的表达,裸鼠皮下成瘤实验验证细胞瘤变,Western blot、普鲁士蓝染色、细胞透射电镜和磁共振成像(MRI)检测细胞诱导前后FTH1基因的表达。结果 TMSCs细胞较MSCs细胞变小,多呈纺锤状,增殖速度加快,迁移能力增强,CD34、CD45表达增加,CD90表达减少(P<0.05),裸鼠皮下成瘤阳性;Western blot结果显示:MSCs、MSCs-PEG3-FTH1、TMSCs细胞不表达或少量表达FTH1蛋白,而MSCs-CMV-FTH1、TMSCs-PEG3-FTH1、TMSCs-CMV-FTH1细胞均大量表达FTH1蛋白(P<0.05);普鲁士蓝染色和细胞透射电镜观察到MSCs-CMV-FTH1、TMSCs-PEG3-FTH1、TMSCs-CMV-FTH1细胞内铁颗粒,而在MSCs、MSCs-PEG3-FTH1、TMSCs细胞内无明显铁颗粒,MRI显示TMSCs-PEG3-FTH1细胞信号较MSCs-PEG3-FTH1细胞信号明显降低。结论 PEG3启动子可驱动报告基因FTH1在干细胞瘤变时特异性表达并能被MRI检测。 展开更多
关键词 peg3启动子 FTH1报告基因 磁共振成像 骨髓间充质干细胞 细胞转化 肿瘤
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