PCR结合变性高效液相色谱快速检测水产品中河流弧菌 被引量：9

1

作者 曹际娟 赵昕 +3 位作者 孙哲平 于珂 徐君怡 郑秋月 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第11期2187-2189,共3页

目的:应用PCR结合变性高效液相色谱技术实现水产品中河流弧菌的快速鉴定。方法:利用河流弧菌的toxR基因序列设计引物,并对该方法进行特异性、精密度和实际应用等方面的考察。结果:用该方法未检测到河流弧菌的近源种及其他细菌的阳性吸收... 目的:应用PCR结合变性高效液相色谱技术实现水产品中河流弧菌的快速鉴定。方法:利用河流弧菌的toxR基因序列设计引物,并对该方法进行特异性、精密度和实际应用等方面的考察。结果:用该方法未检测到河流弧菌的近源种及其他细菌的阳性吸收峰,表现出了很好的特异性。结论:用PCR结合变性高效液相色谱检测河流弧菌,不仅特异性好、灵敏度高,且方法简便、快速。 展开更多

关键词 pcr—dhplc 河流弧菌 toxR基因 检测

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PCR-DHPLC技术快速检测玉米细菌性枯萎病菌 被引量：3

2

作者 朱金国 莫瑾 +4 位作者 彭梓 朱水芳 赵文军 刘红霞 钟文英 《植物检疫》 北大核心 2009年第5期15-18,共4页

本研究成功建立了玉米细菌性枯萎病菌的PCR检测方法。该方法根据细菌ITS序列的特异性,设计了对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定性点突变的特异性引物及探针,并对5株玉米细菌性枯萎病菌及18种植物原性细菌的DNA进行了PCR、实时荧光PCR及PCR... 本研究成功建立了玉米细菌性枯萎病菌的PCR检测方法。该方法根据细菌ITS序列的特异性,设计了对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定性点突变的特异性引物及探针,并对5株玉米细菌性枯萎病菌及18种植物原性细菌的DNA进行了PCR、实时荧光PCR及PCR结合变性高效液相色谱技术(PCR-DH-PLC)检测。结果表明,几种方法特异性强,检测灵敏度均为菌液浓度102cfu/mL,PCR-DHPLC技术具有检测成本较低、高通量、自动化程度高、污染风险小及鉴定结果准确等特点,能够满足快速、准确诊断玉米细菌性枯萎病菌的要求。 展开更多

关键词 pcr 实时荧光pcr pcr-dhplc 玉米细菌性枯萎病菌

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中国人CYPC19和CYP2C9等位基因多态性分析 被引量：7

3

作者 丁辉 陈彪 +1 位作者 黄越 王维治 《哈尔滨医药》 2002年第4期1-3,共3页

目的 探讨细胞色素P450(CYP)2C19(CYP2C19)和CYP2C9在中国人群中的等位基因多态性分布,分析影响上述基因多态性的因素。方法 应用聚合酶链反应-变性高效液相(PCR-DHPLC)技术分析了150例癫痫患者CYP2C19外显子4(·3)、外显子5(·... 目的 探讨细胞色素P450(CYP)2C19(CYP2C19)和CYP2C9在中国人群中的等位基因多态性分布,分析影响上述基因多态性的因素。方法 应用聚合酶链反应-变性高效液相(PCR-DHPLC)技术分析了150例癫痫患者CYP2C19外显子4(·3)、外显子5(·2)和CYP2C9外显子7(·3)的等位基因变异,现察这二种基因多态性在癫痫患者中分布的特征。结果 150例 癫痫患者CYP2C19·3、CYP2C19·2和CYP2C9·3均为野生型的发生率为38.7％,CYP2C19·2、CYP2C19·3和CYP2C9·3等位基因频率分别为34.3％、5.3％和7.3％.CYP2C19·2和CYP2C19·3等位基因分布频率存在性别之间的显著差异,p值分别为p<0.05、p<0.01;而CYP2C9·3的等位基因分布频率不存在性别之间的显著差异。CYP2C19基因型存在性别之阍的差异显著,p<0.01。存在CYP2C9·3等住基因多态性的个体一定出现CYP2C19·2的等住基因多态性。结论 性别因素可能对CYP2C19酶的活性产生影响,应用同时经CYP2C9和CYP2C19代谢的药物时,需进行基因型测定。 展开更多

关键词 等位基因 细胞色素P4502C19 基因多态性 细胞色素P4502C9 药物代谢 pcr-dhplc

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PCR-DHPLC技术快速检测食品中英诺克李斯特氏菌 被引量：6

4

作者 曹际娟 王耀 +3 位作者 王顺芝 李天顺 李建民 赤列加措 《辽宁师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第2期235-238,共4页

应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,建立食品中英诺克李斯特氏菌的快速检测方法.根据英诺克李斯特氏菌的特有基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测,并以41株参考菌株做特异性试验.试验结果表明该方法具有很... 应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,建立食品中英诺克李斯特氏菌的快速检测方法.根据英诺克李斯特氏菌的特有基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测,并以41株参考菌株做特异性试验.试验结果表明该方法具有很好的特异性,经PCR-DHPLC可检测食品中英诺克李斯特氏菌.该方法可以快速、准确检测英诺克李斯特氏菌,是食品微生物快速检测的新技术. 展开更多

关键词 pcr—dhplc 食品 英诺克李斯特氏菌

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小鹅瘟病毒和鹅沙门氏菌PCR-DHPLC检测方法 被引量：2

5

作者 许尧 董航 +3 位作者 张兴菊 毛文智 邵洪泽 胡桂学 《吉林畜牧兽医》 2017年第2期8-11,共4页

小鹅瘟和沙门氏菌感染是严重危害养鹅业发展的常见病,为了快速、准确地对小鹅瘟、鹅沙门氏菌感染进行诊断,减少这两种病的危害,本试验将这两种病原体的PCR-DHPLC检测方法结合起来,建立一种可以同时检测小鹅瘟和鹅沙门氏菌的方法,并进行... 小鹅瘟和沙门氏菌感染是严重危害养鹅业发展的常见病,为了快速、准确地对小鹅瘟、鹅沙门氏菌感染进行诊断,减少这两种病的危害,本试验将这两种病原体的PCR-DHPLC检测方法结合起来,建立一种可以同时检测小鹅瘟和鹅沙门氏菌的方法,并进行了初步应用。结果表明这种新的PCR-DHPLC方法稳定、敏感、特异性强,适合专业检测使用。 展开更多

关键词 小鹅瘟 沙门氏菌 pcr—dhplc 检测

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饲料中鸡源性成分PCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：2

6

作者 王金玲 贾金生 +3 位作者 李俊环 张莹 王芳 高铁军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期493-496,共4页

以鸡组织为材料,提取鸡组织的线粒体DNA,以鸡12SrRNA基因为靶基因设计引物,PCR反应扩增片段230bp;用13种畜禽和水产动物线粒体DNA验证该PCR引物的特异性,结果只有鸡线粒体DNA为阳性;PCR-DHPLC检测灵敏度在DNA水平上达到了2.04mg/L;在随... 以鸡组织为材料,提取鸡组织的线粒体DNA,以鸡12SrRNA基因为靶基因设计引物,PCR反应扩增片段230bp;用13种畜禽和水产动物线粒体DNA验证该PCR引物的特异性,结果只有鸡线粒体DNA为阳性;PCR-DHPLC检测灵敏度在DNA水平上达到了2.04mg/L;在随机采集的22份饲料样品中,检出8份鸡源性成分样品。结果表明,本研究建立的PCR-DHPLC方法可特异、灵敏地对饲料中的鸡源性成分进行快速准确检测。 展开更多

关键词 饲料 鸡源性成分 pcr-dhplc

原文传递

鹅细小病毒PCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：1

7

作者 饶桂波 邵洪泽 +1 位作者 胡桂学 吴健敏 《家畜生态学报》 北大核心 2014年第5期64-67,共4页

为建立一种敏感、自动化,高通量的检测病料中鹅细小病毒(GPV)的PCR-DHPLC检测方法,本研究首先根据GenBank上GPV标准毒株VP3基因序列设计一对引物,建立检测GPV的PCR方法,然后将PCR检测方法与DHPLC法进行有机结合,建立了GPV PCR-DHPLC检... 为建立一种敏感、自动化,高通量的检测病料中鹅细小病毒(GPV)的PCR-DHPLC检测方法,本研究首先根据GenBank上GPV标准毒株VP3基因序列设计一对引物,建立检测GPV的PCR方法,然后将PCR检测方法与DHPLC法进行有机结合,建立了GPV PCR-DHPLC检测方法。以GPV、鹅副粘病毒、鸭瘟病毒及正常番鸭胚尿囊液进行特异性试验,结果无交叉反应,表明该检测方法具有较高的特异性。对GPV阳性样品检测结果表明该方法的敏感性较高,是常规PCR电泳法的100倍,且具有较好的重复性。对临床上采集的100份疑似病料,分别应用PCR电泳法和本试验建立的PCR-DHPLC方法进行检测,结果阳性符合率为100%。表明该方法具有特异、敏感、快速、重复性好、可高通量检测等优点,可用于临床样品的大批量检测。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 pcr-dhplc 检测

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输血传播病毒PCR-DHPLC检测技术的建立及初步应用

8

作者 杨春华 廖芸 +3 位作者 罗秋红 孙思扬 夏彪 祝建新 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期979-983,990,共6页

目的应用聚合酶链式反应(PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测输血传播病毒。方法根据输血传播病毒的核酸序列特点设计特异性引物进行PCR,将扩增产物进行DHPLC检测分析,以验证方法的灵敏度、特异性、重复性,同时进行临床检测的初... 目的应用聚合酶链式反应(PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测输血传播病毒。方法根据输血传播病毒的核酸序列特点设计特异性引物进行PCR,将扩增产物进行DHPLC检测分析,以验证方法的灵敏度、特异性、重复性,同时进行临床检测的初步应用。结果以乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒进行特异性试验,无交叉反应,具有较好的特异性;重复性良好;灵敏度可达1.0×10~1拷贝/反应。分别应用实时荧光PCR法、普通PCR法及本文所建立的PCR-DHPLC法同时检测32份血清样本,发现有17份样本实时荧光PCR阳性,17份样本PCR-DHPLC阳性,15份普通PCR阳性。结论本文建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、重复性好等优点,可用于输血传播病毒感染的分子流行病学调查。 展开更多

关键词 输血传播病毒 pcr-dhplc 实时荧光pcr

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NDM-1基因DHPLC快速检测体系的建立 被引量：1

9

作者 吴兴海 张云霞 +5 位作者 杨伟克 封立平 房保海 庞国兴 曹际娟 林黎明 《食品安全质量检测学报》 CAS 2011年第3期-,共6页

NDM-1基因是一种专属于"超级细菌"的重要特有的耐药基因,在食品潜在污染病原微生物的检测中着重要的作用。本研究以实现食品中超级细菌的快速检测为目标,初步建立了NDM-1基因的PCR-DHPLC快速检测鉴定方法,根据NDM-1基因序列,... NDM-1基因是一种专属于"超级细菌"的重要特有的耐药基因,在食品潜在污染病原微生物的检测中着重要的作用。本研究以实现食品中超级细菌的快速检测为目标,初步建立了NDM-1基因的PCR-DHPLC快速检测鉴定方法,根据NDM-1基因序列,设计、合成了PCR引物(ND-D-F和ND-D-R),并分别对NDM-1质粒DNA及其他11个标准菌株进行了PCR扩增和DHPLC检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA经过PCR-DHPLC反应扩增出特异性样品吸收峰,而其他对照菌均未出现相应吸收峰,提示本文中设计和应用的PCR引物具有NDM-1基因检测的特异性;灵敏度测定结果显示,此体系检测下限可达100fg/μL,提示PCR-DHPLC方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法。 展开更多

关键词 NDM-1 pcr-dhplc 检测

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番茄溃疡病菌的PCR-DHPLC快速检测

10

作者 吴兴海 陈鹏 +3 位作者 左一鸣 张成标 封立平 魏晓棠 《植物检疫》 北大核心 2012年第1期18-23,共6页

根据番茄溃疡病菌ITS序列,设计并合成了PCR-DHPLC检测引物,对番茄溃疡病菌及其他病菌共10个标准菌株进行了PCR-DHPLC检测。结果表明,番茄溃疡病菌的PCR-DHPLC检测图谱出现了特异性吸收峰,而其他病菌均未在相同洗脱时间出现吸收峰,说明... 根据番茄溃疡病菌ITS序列,设计并合成了PCR-DHPLC检测引物,对番茄溃疡病菌及其他病菌共10个标准菌株进行了PCR-DHPLC检测。结果表明,番茄溃疡病菌的PCR-DHPLC检测图谱出现了特异性吸收峰,而其他病菌均未在相同洗脱时间出现吸收峰,说明这种方法具有检测番茄溃疡病菌的特异性。灵敏度实验结果表明,PCR-DHPLC体系与PCR-琼脂糖凝胶电泳体系的检测灵敏度一致。研究表明,PCR-DHPLC方法是一种特异、灵敏、快速的番茄溃疡病菌检测方法。 展开更多

关键词 番茄溃疡病菌 pcr-dhplc 检测

原文传递

双重PCR-DHPLC技术快速检测水产品中金黄色葡萄球菌 被引量：3

11

作者 万婧 周向阳 +4 位作者 张晓峰 帅江冰 张静 沈飚 胡兴娟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第6期199-203,共5页

根据编码金黄色葡萄球菌肠毒素A的sea基因、编码耐热核酸酶的nuc基因为目的基因,设计两对特异性引物,利用聚合酶链式反应结合变性高效液相色谱技术,建立水产品中金黄色葡萄球菌的双重PCR-DHPLC检测方法。以30株参考菌株进行特异性实验,... 根据编码金黄色葡萄球菌肠毒素A的sea基因、编码耐热核酸酶的nuc基因为目的基因,设计两对特异性引物,利用聚合酶链式反应结合变性高效液相色谱技术,建立水产品中金黄色葡萄球菌的双重PCR-DHPLC检测方法。以30株参考菌株进行特异性实验,除所试8株金葡菌出现目的片段和阳性吸收峰外,其余菌株均未检测到目的片段与阳性吸收峰,表明该方法具有良好的特异性。灵敏性实验结果表明,检测灵敏度达到菌液浓度50CFU/mL,比普通的凝胶电泳高一个数量级。利用建立的双重PCR-DHPLC检测方法对240份水产品进行检测,共检出22株金黄色葡萄球菌,检出率为9.2%,其中含有肠毒素基因有8株,占总样本的3.3%,与国标法检出阳性率比较无显著差异,证明该方法具有良好的实用性。实验证明,本研究建立的双重PCR-DHPLC方法不仅可以特异、灵敏、简便快速且高通量的实现对水产品中金葡菌的检测,而且也可通过对肠毒素基因的分析,方便地判断出该菌株致病性的强弱。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 双重pcr-dhplc 水产品 检测

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PCR-DHPLC检测方法在病毒性出血性败血病诊断中的应用 被引量：1

12

作者 吴斌 苏立明 +2 位作者 肇慧君 蔡晓萍 关鹏 《水产养殖》 CAS 2018年第7期34-38,共5页

运用RT-PCR与变性高效液相色谱技术(DHPLC)相结合,建立了对病毒性出血性败血症病毒(VHSV)快速检测方法,根据对VHSV病毒N基因保守序列的分析,设计一对特异性引物,将RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。同时运用荧光RT-PCR方... 运用RT-PCR与变性高效液相色谱技术(DHPLC)相结合,建立了对病毒性出血性败血症病毒(VHSV)快速检测方法,根据对VHSV病毒N基因保守序列的分析,设计一对特异性引物,将RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。同时运用荧光RT-PCR方法进行平行检测。结果表明,该方法与荧光RT-PCR检测结果相同,其特异性强,灵敏度较高,检测限为3 pg的病毒核酸模板,PCR-DHPLC技术具有高通量、自动化程度高等优势,是一种快速有效的检测方法。 展开更多

关键词 病毒性出血性败血症病毒 pcr-dhplc法 实时荧光pcr 诊断

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乳粉中普通变形杆菌和奇异变形杆菌复合PCR-DHPLC检测技术的建立 被引量：1

13

作者 曹际娟 徐君怡 +4 位作者 孙哲平 于珂 郑秋月 郑慧芳 王秋艳 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期420-424,共5页

应用复合PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,建立乳粉中普通变形杆菌和奇异变形杆菌的高通量检测方法。根据普通变形杆菌的blaA和blaB基因及奇异变形杆菌的ureR基因序列分别设计特异性引物,复合PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测... 应用复合PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,建立乳粉中普通变形杆菌和奇异变形杆菌的高通量检测方法。根据普通变形杆菌的blaA和blaB基因及奇异变形杆菌的ureR基因序列分别设计特异性引物,复合PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测,并以37株参考菌株做特异性试验。试验结果表明,该方法具有很好的特异性,经复合PCR-DHPLC可同时检测乳粉中普通变形杆菌和奇异变形杆菌。该方法可以快速、准确、高通量检测普通变形杆菌和奇异变形杆菌,是乳粉中致病菌高通量检测的新技术。 展开更多

关键词 复合pcr-dhplc 乳粉 普通变形杆菌 奇异变形杆菌

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沙门菌PCR-dHPLC基因分型方法建立 被引量：1

14

作者 张东方 袁飞 +5 位作者 王娉 杨海荣 胡玥 赵勇胜 陈颖 葛毅强 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1515-1518,共4页

目的建立沙门菌聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-dHPLC)基因分型方法。方法采用16S～23S rRNA内转录间隔(ITS)作为沙门菌分型目的基因,确定特异性扩增引物,进行PCR扩增,扩增产物经dHPLC分离,根据dHPLC图谱峰型差异进行分型,并与血清... 目的建立沙门菌聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-dHPLC)基因分型方法。方法采用16S～23S rRNA内转录间隔(ITS)作为沙门菌分型目的基因,确定特异性扩增引物,进行PCR扩增,扩增产物经dHPLC分离,根据dHPLC图谱峰型差异进行分型,并与血清学和生化分型结果比较。结果 89株沙门菌共分为12个dHPLC型(D型);所有沙门菌均有1个相同色谱峰,克隆测序结果表明,其片断大小为600 bp,其他8种食源性致病菌对照株无此色谱峰,应为沙门菌16S～23S rRNA基因序列的特征性条带,分型结果与血清学差异较大,与生化分型结果有一定一致性。结论所建立的沙门菌PCR-dHPLC基因分型方法具快速、操作方便、重复性好、成本低廉、高通量和自动化的特点。 展开更多

关键词 聚合酶链反应-变性高效液相色谱(pcr-dhplc) 沙门菌 16S^23SrRNA基因区间 分子分型

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鸭瘟病毒PCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：1

15

作者 邵洪泽 毛文智 +4 位作者 孙健 石春军 李佳桐 孙强 许志林 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期122-124,共3页

为了快速、准确诊断和防制鸭瘟疫病,试将PCR技术和变性高效液相色谱技术(DHPLC)相结合建立新的诊断方法,对鸭瘟进行诊断。结果表明:PCR-DHPLC技术是一种快速、高敏感性、高特异性的检测方法。

关键词 鸭瘟 pcr-dhplc技术 检测 快速 高敏感性 高特异性

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PCR结合变性高效液相色谱快速检测发酵乳酸杆菌

16

作者 杨大伟 周裔彬 +4 位作者 刘云国 雷质文 陈俊芳 王建广 李正义 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期111-115,共5页

采用多聚酶链式反应结合变性高效液相色谱技术建立了发酵乳酸杆菌的快速检测方法。以编码发酵乳酸杆菌Lactobacillus fermentum延伸因子(EF-Tu)基因为靶基因设计引物,优化PCR体系,以加氏乳酸杆菌等26株试验菌株做特异性检测;并将标准菌... 采用多聚酶链式反应结合变性高效液相色谱技术建立了发酵乳酸杆菌的快速检测方法。以编码发酵乳酸杆菌Lactobacillus fermentum延伸因子(EF-Tu)基因为靶基因设计引物,优化PCR体系,以加氏乳酸杆菌等26株试验菌株做特异性检测;并将标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。试验结果表明,该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到100CFU/ml。 展开更多

关键词 发酵乳酸杆菌 pcr 变性高效液相色谱 检测

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