结直肠癌微卫星不稳定性与程序性死亡配体1表达的临床意义 被引量：1

1

作者 侯少华 齐立温 +2 位作者 纪小红 唐超峰 李海 《宁夏医科大学学报》 2022年第3期223-227,共5页

目的 研究结直肠癌微卫星不稳定性(MSI)与程序性死亡配体1(PD-L1)表达的临床病理特征及其临床意义。方法 收集在宁夏医科大学总医院接受结直肠癌切除术、术后病理确诊为结直肠癌的患者共116例,采用多重荧光PCR结合毛细管电泳方法检测6... 目的 研究结直肠癌微卫星不稳定性(MSI)与程序性死亡配体1(PD-L1)表达的临床病理特征及其临床意义。方法 收集在宁夏医科大学总医院接受结直肠癌切除术、术后病理确诊为结直肠癌的患者共116例,采用多重荧光PCR结合毛细管电泳方法检测6个单核苷酸重复位点(NR-21、NR-24、NR-27、BAT-25、BAT-26、MONO-27)以鉴定微卫星状态。采用免疫组化(IHC)方法检测PD-L1和错配修复(MMR)蛋白(MLH1、MSH2、MSH6和PMS2)。通过分析研究结直肠癌MSI与PD-L1表达的临床病理特征和相关临床意义,并分析PCR与IHC两种方法检测结果的一致性。结果 在MSI-L/MSS与MSI-H的结直肠癌患者间肿瘤部位、肿瘤直径、分化程度差异均具有统计学意义(P均<0.05),而浸润深度、pTNM分期、有无神经或脉管侵犯、有无淋巴结转移之间差异均无统计学意义(P均>0.05);免疫组化和PCR毛细管电泳法的检测结果经Kappa一致性检验,结果一致性较好(Kappa=0.674);结直肠癌组织中PD-L1表达在结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤位置、分化程度、浸润深度、pTNM分期、有无神经或脉管侵犯、有无淋巴结转移之间的差异均无统计学意义(P均>0.05);在MSI-L/MSS的结直肠癌患者中,PD-L1阳性率为28.3%,低于MSI-H的结直肠癌患者的70.0%(P<0.05)。结论 PMSI-H可以作为免疫检查点抑制剂(ICI)PD-L1的阳性预测标志物。 展开更多

关键词 微卫星不稳定 PD-L1 免疫组化 pcr-毛细管电泳

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基于四引物扩增受阻突变体系PCR的多重乳腺癌相关SNP位点检测方法的建立 被引量：6

2

作者 刘颖 张晨 +2 位作者 王淼 吴希阳 马学军 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2012年第2期143-147,共5页

为提高单核苷酸多态性检测的通量,引入多重嵌合引物PCR和毛细管电泳对四引物扩增受阻突变体系PCR进行改进.针对乳腺癌位点rs4784227(C>T),rs1219648(G>A)和rs3803662(T>C)设计特异性嵌合引物,经一次PCR扩增后,通过毛细管电泳... 为提高单核苷酸多态性检测的通量,引入多重嵌合引物PCR和毛细管电泳对四引物扩增受阻突变体系PCR进行改进.针对乳腺癌位点rs4784227(C>T),rs1219648(G>A)和rs3803662(T>C)设计特异性嵌合引物,经一次PCR扩增后,通过毛细管电泳分析产物长度,同时确定3个位点的基因型.70份全血和口腔拭子样本,电泳结果均与测序一致,实现成功分型.本方法仅需一次PCR和一次毛细管电泳即可获得3个位点的分型结果,操作简单、快速准确. 展开更多

关键词 单核苷酸多态分型 四引物扩增受阻突变体系pcr 多重pcr 毛细管电泳

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一个脊髓性肌萎缩症的家系报道

3

作者 平泽朋 姜湖铃 《中国优生与遗传杂志》 2023年第5期1013-1017,共5页

目的 对一个生育过脊髓性肌萎缩症患儿的家系进行产前诊断,同时对三种实验室检测技术进行方法学的比较。方法 应用荧光定量PCR、荧光PCR-毛细管电泳法及MLPA对家系外周血样本及绒毛组织、羊水组织进行了检测。同时进行了亲缘鉴定以排除... 目的 对一个生育过脊髓性肌萎缩症患儿的家系进行产前诊断,同时对三种实验室检测技术进行方法学的比较。方法 应用荧光定量PCR、荧光PCR-毛细管电泳法及MLPA对家系外周血样本及绒毛组织、羊水组织进行了检测。同时进行了亲缘鉴定以排除母源污染。结果 第一胎患儿为SMN1基因7、8号外显子纯合缺失合并SMN2基因的3拷贝重复,患儿父亲为SMN1基因第7、8号外显子的杂合缺失携带者合并SMN2基因的3拷贝重复,患儿母亲为SMN1基因第7、8号外显子的杂合缺失携带者,SMN2基因2拷贝。本次妊娠胎儿为SMN1基因第7、8号外显子杂合缺失及SMN2基因3拷贝重复。结论 经检测胎儿仅为SMN1基因杂合缺失的携带者,可继续正常妊娠。同时,荧光PCR-毛细管电泳法和MLPA可同时对SMN1和SMN2基因拷贝数进行检测,检测较为全面,但荧光定量PCR检测操作方便,检测周期短,适合大样本人群的普筛。 展开更多

关键词 SMA 荧光定量pcr MLPA 荧光pcr-毛细管电泳法

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利用荧光PCR⁃毛细管电泳法评价微卫星不稳定性检测国家参考品 被引量：2

4

作者 张文新 黄传峰 +5 位作者 孙楠 高飞 于婷 孙晶 曲守方 黄杰 《分子诊断与治疗杂志》 2020年第5期565-569,574,共6页

目的利用荧光PCR⁃毛细管电泳法评价微卫星不稳定性(MSI)检测国家参考品,验证国家参考品用于相关试剂盒性能评价及临床实验室质量评价的适用性。方法采用3家不同公司的微卫星不稳定性检测试剂盒(荧光PCR⁃毛细管电泳法)对国家参考品进行... 目的利用荧光PCR⁃毛细管电泳法评价微卫星不稳定性(MSI)检测国家参考品,验证国家参考品用于相关试剂盒性能评价及临床实验室质量评价的适用性。方法采用3家不同公司的微卫星不稳定性检测试剂盒(荧光PCR⁃毛细管电泳法)对国家参考品进行阳性参考品符合率、阴性参考品符合率和检测限项目的检测。结果对国家参考品中的62例样本进行检测,其中阳性参考品的结果均为微卫星高度不稳定,阴性参考品的结果均为微卫星稳定,LOD1及LOD3的20%、10%检测限参考品均检出微卫星高度不稳定,但其5%检测限参考品有1家公司未检出相应的微卫星高度不稳定状态。LOD4、LOD5、LOD6及LOD7检测限参考品检测结果均为微卫星稳定或微卫星低度不稳定。结论微卫星不稳定性检测国家参考品,适用于荧光PCR⁃毛细管电泳法试剂盒的性能评价及临床实验室的质量评价。 展开更多

关键词 微卫星不稳定性 国家参考品 荧光pcr⁃毛细管电泳法

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180例不明原因智力障碍儿童的脆性X综合征检出情况

5

作者 钟青燕 熊小波 +5 位作者 曾婷 王大永 吴勇聪 袁德健 蔡稔 严提珍 《广西医学》 CAS 2022年第19期2231-2235,共5页

目的通过检测脆性X智力低下1(FMR1)基因突变情况,分析不明原因智力障碍儿童的脆性X综合征(FXS)检出情况。方法纳入180例不明原因智力障碍儿童,采用PCR微流控毛细管电泳技术对其及部分FMR1基因突变患儿家系成员进行FMR1基因突变分析,并采... 目的通过检测脆性X智力低下1(FMR1)基因突变情况,分析不明原因智力障碍儿童的脆性X综合征(FXS)检出情况。方法纳入180例不明原因智力障碍儿童,采用PCR微流控毛细管电泳技术对其及部分FMR1基因突变患儿家系成员进行FMR1基因突变分析,并采用Southern印迹杂交法进行验证。结果在180例智力障碍儿童中,共检出FMR1基因全突变型4例、中间型1例、正常型175例,FXS的检出率为2.22%(4/180);正常型最常见的CGG重复次数是28次和29次。4例全突变型病例中,家系1先证者CGG重复数为190/248/370次,母亲为25次和134次,妹妹为39次和148/218/554次,姨妈为29次和29次;家系2先证者CGG重复次数为859次;家系3先证者CGG重复次数为529次,母亲为31次和76次,姐姐为29次和130次;家系4先证者CGG重复次数为525次。4例FMR1基因全突变型病例样本经Southern印迹杂交法验证,结果都显示有>5.8 kb条带(全突变条带),两种方法基因分型结果完全一致。结论在不明原因智力障碍儿童中存在一定比例的FXS患儿。PCR微流控毛细管电泳技术高效、快速,适合用于智力障碍人群FXS大规模筛查,有助于避免该病患儿的出生。 展开更多

关键词 脆性X综合征 脆性X智力低下1基因 智力障碍 基因检测 pcr微流控毛细管电泳技术

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基于三引物荧光PCR-毛细管电泳法的FMR1基因突变检测技术建立及其在自闭症辅助诊断中的应用 被引量：1

6

作者 孙莉 杨琳艳 +2 位作者 叶倩平 杨旭 杨学习 《分子诊断与治疗杂志》 2017年第5期319-324,共6页

目的对自闭症患者FMR1基因5′非编码区CGG重复序列及重复数进行检测,探索检测脆性X综合征的新方法。方法应用三引物荧光PCR-毛细管电泳法(Qseq100TM全自动核酸分析系统检测)对111例自闭症患者进行筛查,检测其FMR1基因5′非编码区CGG序列... 目的对自闭症患者FMR1基因5′非编码区CGG重复序列及重复数进行检测,探索检测脆性X综合征的新方法。方法应用三引物荧光PCR-毛细管电泳法(Qseq100TM全自动核酸分析系统检测)对111例自闭症患者进行筛查,检测其FMR1基因5′非编码区CGG序列,计算CGG重复数,并与ABI 3500Dx基因分析仪毛细管电泳测序法进行结果比较验证。结果 111例临床检测为自闭症的样本中,有2例为FMR1前突变携带者,一例为中间型。与3500Dx毛细管电泳测序结果一致。结论三引物荧光PCR-毛细管电泳法能够用来检测FMR1基因5′非编码区CGG重复序列,在脆性X综合征发病机制及大规模携带者筛查方面都具有一定的应用价值。 展开更多

关键词 自闭症 FMR1基因 脆性X综合征 三引物荧光pcr-毛细管电泳

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PCR-毛细电泳片段分析法检测毛细支气管炎病原的临床价值探讨

7

作者 季妙玉 吕佳美 +5 位作者 李海燕 陈小芳 温顺航 张海邻 钱燕巧 董琳 《浙江医学》 CAS 2021年第23期2538-2542,共5页

目的探讨PCR-毛细电泳片段分析法(PCR-CEFA)检测毛细支气管炎病原的临床应用价值。方法选取2018年1至12月温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院儿科收治的因毛细支气管炎住院的≤24个月且喘息次数≤2次的患儿932例,采集患儿鼻咽分泌... 目的探讨PCR-毛细电泳片段分析法(PCR-CEFA)检测毛细支气管炎病原的临床应用价值。方法选取2018年1至12月温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院儿科收治的因毛细支气管炎住院的≤24个月且喘息次数≤2次的患儿932例,采集患儿鼻咽分泌物,采用PCR-CEFA检测呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(RV)、流感病毒(Flu)、副流感病毒(HPIV)、腺病毒(ADV)等8种病毒核酸;直接免疫荧光法(DFA)检测RSV、HPIV、Flu、ADV抗原;并收集患儿性别、年龄、既往喘息史、湿疹史、哮喘家族史、家族过敏性疾病史、总IgE、血嗜酸性粒细胞计数(B-Eos)等资料。比较两种方法、不同年龄组患儿病毒检出率及RSV组与RV组患儿流行病学资料及实验室检查结果。结果PCR-CEFA病毒检出率为88.2%,高于DFA的33.6%,差异有统计学意义(P<0.01)。PCR-CEFA对RSV、HPIV、Flu、ADV的检出率均高于DFA,差异均有统计学意义(均P<0.01)。以DFA为参照,PCR-CEFA检测RSV、HPIV、Flu、ADV的特异度均达80%以上。≤12月龄患儿RSV检出率高于>12~24月龄患儿,RV、ADV、HBoV检出率均低于>12~24月龄患儿,差异均有统计学意义(均P<0.05)。RV组患儿年龄、B-Eos升高比例均明显高于RSV组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论与DFA比较,PCR-CEFA病毒检出率更高,病毒检测种类更多,具有良好的特异度,有利于早期明确毛细支气管炎病原。 展开更多

关键词 毛细支气管炎 呼吸道病毒 直接免疫荧光法 pcr-毛细电泳片段分析法

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错配修复蛋白和微卫星不稳定在结直肠癌中检测中的对比分析

8

作者 刘坤 罗瑞晨 +3 位作者 许惠娟 管瑛瑛 侯英勇 侯君 《青岛医药卫生》 2024年第3期177-180,共4页

目的 比较PCR-毛细管电泳法与IHC两种检测方法对微卫星状态判断的差异性与一致性,以期寻找到更适合临床广泛开展筛查的方法。方法 326例结直肠癌手术切除标本,IHC方法检测癌组织4种错配修复蛋白MMR蛋白的表达。选取其中68例标本用PCR毛... 目的 比较PCR-毛细管电泳法与IHC两种检测方法对微卫星状态判断的差异性与一致性,以期寻找到更适合临床广泛开展筛查的方法。方法 326例结直肠癌手术切除标本,IHC方法检测癌组织4种错配修复蛋白MMR蛋白的表达。选取其中68例标本用PCR毛细管电泳法检测6个微卫星位点。最后对比这68例患者两种检测结果的敏感性、特异性及一致性。结果 326例结直肠癌手术样本中,有29例IHC结果为dMMR,剩余297例为pMMR。将这29例dMMR标本全部进行PCR毛细管电泳法检测,另挑选297例pMMR中的39例标本进行PCR-毛细管电泳法检测,共计68例。68例标本检测结果显示高度微卫星不稳定(MSI-H)23例,低度微卫星不稳定(MSI-L)5例,微卫星稳定(MSS)40例。统计分析发现,IHC法检测的敏感度和特异性分别为96%和95%,PCR-毛细管电泳法检测的敏感度和特异性分别为93.1%和97.4%,两种方法的一致率达到95.6%。结论 IHC检测MMR蛋白和PCR-毛细管电泳法检测微卫星位点具有较高的一致性,由于IHC方法经济、便捷的特点,更适合在临床推广,因此可以作为临床初筛结直肠癌微卫星不稳定的一种方法。当存在任一MMR蛋白缺失或对有疑问的标本,可进行进一步的PCR-毛细管电泳检测。 展开更多

关键词 结直肠癌 微卫星不稳定 错配修复蛋白 免疫组化 pcr毛细管电泳

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气单胞菌aerA和hlyA两基因在溺死诊断中的应用 被引量：4

9

作者 肖成 朱晓琳 +7 位作者 徐曲毅 韩雅莉 李越 余仲昊 李欢 彭帆 刘向东 刘超 《刑事技术》 2021年第2期111-118,共8页

目的建立溺死尸体脏器气单胞菌气溶素(aerA)和溶血素(hlyA)两基因的PCR-CE检测方法,验证该方法的特异性和灵敏度,并探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法设计气单胞菌(Aeromonas)特异性引物aer-A1和hlyA-1,构建PCR-CE方法;扩增52种标准株... 目的建立溺死尸体脏器气单胞菌气溶素(aerA)和溶血素(hlyA)两基因的PCR-CE检测方法,验证该方法的特异性和灵敏度,并探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法设计气单胞菌(Aeromonas)特异性引物aer-A1和hlyA-1,构建PCR-CE方法;扩增52种标准株DNA;确定最低DNA检测浓度;检测16只实验猪和40例真实案件尸体组织样本,分别计算两对引物总阳性率。结果引物aerA-1可特异性扩增杀鲑气单胞菌和温和气单胞菌,产物片段为180bp,灵敏度分别为0.034、0.92ng;引物hlyA-1可特异性扩增杀鲑气单胞菌和嗜水气单胞菌,产物片段为150bp,灵敏度分别为0.94、0.034ng。利用aerA-1检测溺死实验猪和真实案件尸体组织样本,溺死阳性率分别为70.00%、78.38%;利用hlyA-1检测溺死实验猪和真实案件尸体组织样本,溺死阳性率分别为80.00%、83.78%。结论基于气单胞菌aerA基因和hlyA基因建立的PCR-CE检测方法进行溺死诊断,快速灵敏,特异性好,有良好的应用前景。 展开更多

关键词 法医学 溺死诊断 聚合酶链式反应-毛细管电泳 气单胞菌 aerA基因 hlyA基因

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应用多重竞争性PCR联合毛细管电泳技术进行脊髓性肌萎缩症携带者筛查 被引量：1

10

作者 李烨荣 吕娟 +3 位作者 王玉国 谭建新 邵彬彬 张菁菁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期618-628,共11页

脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是一种常染色体隐性遗传、儿童致死性神经系统疾病。SMA致病基因为运动神经元存活基因(survival motor neuron1,SMN1)。虽然检测SMN1基因拷贝数的方法众多,但目前适于大规模人群筛查的技术... 脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是一种常染色体隐性遗传、儿童致死性神经系统疾病。SMA致病基因为运动神经元存活基因(survival motor neuron1,SMN1)。虽然检测SMN1基因拷贝数的方法众多,但目前适于大规模人群筛查的技术较少。为寻求一种快速准确的实验技术可以用于人群中SMA携带者的大规模筛查,了解区域人群携带情况及常见变异的分布,本研究应用多重竞争性PCR联合毛细管电泳技术检测12例SMA患者及其父母SMN1基因拷贝数,同时对江苏地区151例健康孕妇人群SMN1基因进行拷贝数检测,并通过多重连接依赖探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术验证检测结果。多重竞争性PCR联合毛细管电泳技术结果与MLPA结果一致,显示12例SMA患者均为SMN1基因零拷贝,其父母的SMN1基因拷贝数均为单拷贝,151例健康人群中检测出SMN1基因单拷贝3例(即SMA携带者),占2.0%;SMN1基因双拷贝134例,占88.7%;SMN1基因大于双拷贝14例,占9.3%。因此,多重竞争性PCR联合毛细管电泳技术作为一种快速、简便和准确的检测技术具有着应用于人群中SMA携带者的大规模筛查的潜力。 展开更多

关键词 脊髓性肌萎缩症 多重竞争性pcr联合毛细管电泳技术 SMN1基因 携带者筛查

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成人流感样病例13种病原体检测情况及多重PCR毛细电泳片段分析法检测的临床应用 被引量：1

11

作者 涂鹏 史大伟 +5 位作者 宛瑞杰 田秀君 窦海伟 袁青 陈小华 辛德莉 《国际检验医学杂志》 CAS 2022年第9期1133-1137,共5页

目的探究成人流感样病例中13种病原体分布情况及多重聚合酶链反应(PCR)毛细电泳片段分析法在病原体检测中的应用价值。方法收集2019年12月至2020年2月北方地区189份流感样病例咽拭子标本,采用多重RT-PCR与毛细电泳片段分析法联用技术得... 目的探究成人流感样病例中13种病原体分布情况及多重聚合酶链反应(PCR)毛细电泳片段分析法在病原体检测中的应用价值。方法收集2019年12月至2020年2月北方地区189份流感样病例咽拭子标本,采用多重RT-PCR与毛细电泳片段分析法联用技术得到病原体的检测结果。检测病原体包括甲型流感病毒(InfA)、人腺病毒(HADV)、博卡病毒(Boca)、人鼻病毒(HRV)、甲型流感病毒H1N1(2009)(InfA-H1N1)、季节性流感病毒(InfA-H3N2)、副流感病毒(HPIV)、人偏肺病毒(HMPV)、乙型流感病毒(InfB)、肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)、冠状病毒(HCOV)、人呼吸道合胞病毒(RSV)13种病原体。结果189份流感样病例咽拭子标本中有180份(95.24%)检测出病原体,9份(4.76%)未检测出病原体。180份病原体阳性标本单一病原体150份(83.33%),多种病原体30份(16.67%);145份(80.56%)检测出流感病原体,35份(19.44%)检测出非流感病原体。3种最常见的单一病原体是InfA-H3N2(94份,49.74%),MP(26份,13.76%),InfA(16份,8.47%);3种最常见的多种病原体是InfA-H3N2合并MP感染(15份,7.93%),InfA合并MP感染(7份,3.70%),MP合并HRV感染(3份,1.59%)。结论2019年12月至2020年2月冬季我国北方地区的成人流感病毒主要以InfA-H3N2为主;非流感病毒也可引起流感样病例,以MP感染较多见;部分流感样病例可见混合感染。多重PCR毛细电泳片段分析法有助于全面了解成人流感样病例中病原体分布情况。 展开更多

关键词 成人 流感样病例 呼吸道感染 呼吸道病原体 多重pcr毛细电泳片段分析法

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用毛细管电泳检测伊氏锥虫微环DNAPCR扩增产物

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作者 王云飞 孟秀珍 《中国兽医寄生虫病》 1998年第1期5-7,共3页

毛细管电泳技术用于DNA电泳分析，具有快速、样品用量少、高重复率等特点。本文应用毛细管电泳对动基体微环DNAPCR扩增产物进行检测，结果表明扩增产物分子量片段为300bp到600bP之间，与实验设计相符，且比较纯净。

关键词 伊氏锥虫 pcr 毛细管电泳 检测

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