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PCR-金磁微粒层析法检测MTHFR C677T基因多态性方法的建立及评价
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作者 陈锦亮 蓝槐敏 +1 位作者 黄慧莹 陈伟忠 《分子诊断与治疗杂志》 2023年第12期2237-2241,共5页
目的建立一种用于检测亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C667T基因型的方法,并对该方法进行评价。方法以MTHFR基因C667T位点为标靶设计引物,采用PCR-金磁微粒层析法结合扩增受阻突变体系PCR技术(ARMS-PCR)进行基因分型,将所建立的方法应用于... 目的建立一种用于检测亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C667T基因型的方法,并对该方法进行评价。方法以MTHFR基因C667T位点为标靶设计引物,采用PCR-金磁微粒层析法结合扩增受阻突变体系PCR技术(ARMS-PCR)进行基因分型,将所建立的方法应用于临床样本检测。结果ARMS-PCR与金磁微粒层析法联合检测MTHFR C677T基因分型,全程耗时约60 min。检测最低限度为10^(3)copies/μL。PCR-金磁微粒层析法能特异性检测MTHFR基因分型,应用于50份人全血样本MTHFR基因分型检测,其结果与测序结果完全符合,符合率为100%(50/50)。结论PCR-金磁微粒层析法检测MTHFR C677T基因多态性方法具有特异性强、敏感性高、准确率高的特点,无需特殊大型设备,具有快速、便捷、准确、经济等优势,适合在各级医疗机构开展。 展开更多
关键词 亚甲基四氢叶酸还原酶 pcr-金微粒层析 单核苷酸多态
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PCR-金磁微粒层析法在叶酸代谢相关基因检测中的应用研究 被引量:3
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作者 毛华芬 杨舒婷 +5 位作者 刘双 孙玉华 赵亚丽 汤欣欣 顾莹 王雷雷 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2019年第5期890-895,共6页
目的:对PCR-金磁微粒层析法检测人叶酸代谢相关基因进行方法学评价,并初步应用于临床检测。方法:同时应用PCR-金磁微粒层析法和Sanger测序法两种方法分别检测221例临床样本的5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C位点及甲硫... 目的:对PCR-金磁微粒层析法检测人叶酸代谢相关基因进行方法学评价,并初步应用于临床检测。方法:同时应用PCR-金磁微粒层析法和Sanger测序法两种方法分别检测221例临床样本的5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C位点及甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66G位点的基因型,并对两种方法检测的结果进行比较,以评估PCR-金磁微粒层析法的准确性、灵敏度及特异性。结果:两种方法检测同一批样本的结果完全一致,准确性达100%。PCR-金磁微粒层析法的灵敏度高,对MTHFR C677T、A1298C位点的最低检测限分别为2.5、1.25 ng·μl^-1,MTRR A66G位点的最低检测限为1.25 ng·μl^-1;特异性强,扩增试剂的扩增反应呈高度专一性。结论:PCR-金磁微粒层析法检测人叶酸代谢相关基因快速、简便,结果准确,适合应用于各级具有PCR实验室资质的医疗机构。 展开更多
关键词 pcr-金微粒层析 5 10-亚甲基四氢叶酸还原酶 甲硫氨酸合成酶还原酶
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PCR-金磁微粒层析法检测MTHFR基因C677T多态性评价 被引量:1
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作者 何学虎 郭雅琪 +4 位作者 梁小燕 张玉英 赵倩颖 董洁 贾伟 《中国妇幼保健》 CAS 2019年第1期130-134,共5页
目的探讨PCR-金磁微粒层析法检测MTHFR基因C677T多态性进行方法学评价和性能确认,为个性化叶酸补充剂量提供参考依据。方法从检测下限、准确性、抗干扰能力、稳定性方面进行评价和确认。检测下限:分别选取MTHFR基因C677T野生型(677CC)... 目的探讨PCR-金磁微粒层析法检测MTHFR基因C677T多态性进行方法学评价和性能确认,为个性化叶酸补充剂量提供参考依据。方法从检测下限、准确性、抗干扰能力、稳定性方面进行评价和确认。检测下限:分别选取MTHFR基因C677T野生型(677CC)、杂合突变型(677CT)和纯合突变型(677TT)外周血样本,提取基因组DNA,A260/A280在1. 65~1. 95之间,定量并稀释至2. 5 ng/μl、5 ng/μl、10 ng/μl三个浓度,每种基因型各浓度一式三份,然后进行PCR-金磁微粒层析法检测,统计三种基因型各浓度样本的检出率。准确性:将992例PCR-金磁微粒层析法检测的样本,提取基因组DNA,送第三方检测机构进行Sanger测序验证,比较二者的一致性。抗干扰能力:取三种基因型的外周血样本,分别加入终浓度为10 mg/ml的血红蛋白(Hb)、0. 2 mg/ml的胆红素(BIL)和5 mg/ml三酰甘油(TG),然后与不加任何干扰物质的样本同时进行检测,比较干扰组与正常组的检出情况。稳定性:取三种基因型的样本各1例,每种基因型各一式十份做平行检测,比较各基因型的检出情况。结果 (1)三种基因型在2. 5 ng/μl浓度水平均没有被检出,而在5 ng/μl和10 ng/μl浓度水平一式三份全部被检出,灵敏度为5 ng/μl。(2)992例样本的测序结果与PCR-金磁微粒层析法的检出结果完全一致,准确性100%。(3)三种基因型加干扰物的检出结果与不加干扰物的检出结果完全一致,抗干扰能力强。(4)三种基因型样本各1例平行检测10次的结果高度一致,稳定性高。结论 PCR-金磁微粒层析法可有效用于MTHFR基因C677T多态性检测,该法具有灵敏度高、准确性高、抗干扰能力强、稳定性高等特点,且无需特殊大型设备,具有快速、便捷、准确、经济等优势,适合在各级医疗机构开展。 展开更多
关键词 pcr-金微粒层析 MTHFR基因 多态性 评价
原文传递
MTHFR C677T基因多态性方法学比较
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作者 刘紫薇 王玉飞 +4 位作者 刘淑静 姜文灿 李斯文 王利娟 陈柯霖 《标记免疫分析与临床》 CAS 2024年第6期1162-1166,共5页
目的评价比较实时荧光定量PCR法与PCR-金磁微粒层析法两种方法检测5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性的一致性、检测限、特异性。方法随机选取首都医科大学附属北京天坛医院采集的50例静脉抗凝全血,均通过磁珠法提取基因... 目的评价比较实时荧光定量PCR法与PCR-金磁微粒层析法两种方法检测5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性的一致性、检测限、特异性。方法随机选取首都医科大学附属北京天坛医院采集的50例静脉抗凝全血,均通过磁珠法提取基因组DNA,依照最新版分子诊断检验程序性能验证指南(CNAS-GL039)要求对两种方法学的一致性、检测限、特异性进行性能评价。结果实时荧光定量PCR与PCR-金磁微粒层析具有高度的一致性,采用两种方法检测50例样本的一致性为100%;两种方法检测交叉反应中检测结果未受影响,基因型之间无交叉污染情况;检测限验证中前者的灵敏度更高,最低检测限可达0.078125ng/μL,后者的最低检测限为0.625ng/μL。结论实时荧光定量PCR法与PCR-金磁微粒层析法均具有操作简便、灵敏度高,特异性强的特点,可用于人类MTHFR基因多态性检测,同时能够对叶酸代谢作出有效的诊断,需根据临床实验室的需求,选择合理有效的检测方法。 展开更多
关键词 5 10-亚甲基四氢叶酸还原酶 实时荧光定量pcr pcr-金微粒层析 学比较
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