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PCR技术及实用方法 被引量：119
1
作者 郑景生 吕蓓 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第3期381-394,共14页
本文系统介绍了PCR技术的原理 ,反应组分、反应程序及PCR产物的电泳检测方法。这些实用的PCR方法大都来源于国内外一些著名的实验室并经海南省农作物分子育种重点实验室改进而成。这些方法作为分子植物育种实验室的技术平台具有非常好... 本文系统介绍了PCR技术的原理 ,反应组分、反应程序及PCR产物的电泳检测方法。这些实用的PCR方法大都来源于国内外一些著名的实验室并经海南省农作物分子育种重点实验室改进而成。这些方法作为分子植物育种实验室的技术平台具有非常好的实用性 ,能满足常规的分子生物学及生物工程技术研究的要求。 展开更多
关键词 pcr技术 原理 反应组分 反应程序 产物检测 分子植物育种
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ITS序列分析及其在植物真菌病害分子检测中的应用 被引量：78
2
作者 赵杰 《陕西农业科学》 2004年第4期35-37,共3页
近年来 ,利用 PCR扩增病原菌核糖体 ITS( internal transcribed spacer)基因区段进行病原菌鉴定、检测及病害诊断技术得到了发展 ,利用病原菌在 r DNA的 ITS区段既具保守性又在科、属、种水平上均有特异性序列的特性 ,对 ITS区进行 PCR... 近年来 ,利用 PCR扩增病原菌核糖体 ITS( internal transcribed spacer)基因区段进行病原菌鉴定、检测及病害诊断技术得到了发展 ,利用病原菌在 r DNA的 ITS区段既具保守性又在科、属、种水平上均有特异性序列的特性 ,对 ITS区进行 PCR扩增、测序及序列分析后再设计特异性引物来诊断和检测植物病原菌 ,尤其是植物病原真菌的分子检测已越来越被广泛应用。 展开更多
关键词 ITS序列分析 植物真菌病害 分子检测 pcr技术
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rDNA-ITS在植物病原真菌分子检测中的应用 被引量：80
3
作者 刘春来 文景芝 +1 位作者 杨明秀 李永刚 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第1期101-106,共6页
文章综述了rDNA序列结构特点及ITS序列在植物病原真菌的分类鉴定、分子检测、病害诊断及土壤中病原真菌的检测方面的应用,并对其应用前景进行了评述。
关键词 RDNA-ITS pcr技术 植物病原真菌 分子检测
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应用PCR技术检测鸭疫里默氏杆菌的研究 被引量：62
4
作者 胡清海 刘晓文 +5 位作者 赵世华 张知良 丁铲 苗晋锋 刘华雷 赵东伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期471-473,共3页
根据已发表的鸭疫里默氏杆菌 15型CVL110 / 89株编码 4 2_kDa主要外膜蛋白的基因序列设计并合成一对引物 ,建立PCR方法 ,对 7个血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌及野外病死鸭病料组织进行检测。结果表明 ,7个血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培... 根据已发表的鸭疫里默氏杆菌 15型CVL110 / 89株编码 4 2_kDa主要外膜蛋白的基因序列设计并合成一对引物 ,建立PCR方法 ,对 7个血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌及野外病死鸭病料组织进行检测。结果表明 ,7个血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌DNA都可扩增出 80 9bp的DNA片段 ,而对照的 2株大肠杆菌和 1株沙门氏菌纯培养物DNA扩增结果为阴性 ;在对 2 4只不同鸭场病死鸭肝、脑的检测中 ,脑的检出率为 19/ 2 4 (高于细菌分离的 13/ 2 4 ) ,肝脏的检出率为 11/ 2 4 (高于细菌分离的 8/ 2 4 )。由此可见 ,建立的PCR技术可用于鸭疫里默氏杆菌的鉴定和快速诊断 (取脑组织 )。但此方法是否对其他血清型的鸭疫里默氏杆菌也适用 ,有待于收集这些血清型的菌株进行验证。 展开更多
关键词 pcr技术 鸭疫里默氏杆菌 检测 鸭 血清型
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用ITS和ISSR分子标记技术鉴别香菇生产用种 被引量：58
5
作者 秦莲花 宋春艳 +2 位作者 谭琦 陈明杰 潘迎捷 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期94-100,共7页
通过选用香菇生产中存在名称争议或者名称相近或者同一名称但长期在不同地区栽培的12株香菇生产菌株,以及用于种水平对比的豹皮香菇Lentinuslepideus和虎皮香菇Lentinustigrinus的4个菌株,共16个菌株作为供试材料,进行ITS和ISSR遗传分析... 通过选用香菇生产中存在名称争议或者名称相近或者同一名称但长期在不同地区栽培的12株香菇生产菌株,以及用于种水平对比的豹皮香菇Lentinuslepideus和虎皮香菇Lentinustigrinus的4个菌株,共16个菌株作为供试材料,进行ITS和ISSR遗传分析,并用RAPD技术验证试验结果。结果证明,不同种的ITS长度存在差异,再次证明ITS可以有效区别种之间的菌株;在ISSR的菌株水平分析中,香菇种内材料拥有两个共同的条带,与其他两种菌株的带型图谱有着明显差异,其中5对材料的带型图谱极为相近。RAPD验证结果与上述结果相近。由此可见,结合ITS与ISSR技术是可以用作香菇生产菌株鉴别的,这为ITS和ISSR分子标记技术推广应用于香菇生产菌株的快速准确鉴别提供了技术依据。 展开更多
关键词 食用菌 快速鉴定 pcr技术
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用聚合酶链反应检测鸭瘟病毒的研究 被引量：43
6
作者 谢芝勋 谢志勤 +2 位作者 刘加波 邓显文 庞耀珊 《中国兽药杂志》 北大核心 2000年第4期10-12,共3页
根据已发表的鸭瘟病毒基因序列 ,设计并合成了一对引物 ,其扩增跨幅为 60 2 bp。用这对引物对 6株鸭瘟病毒 DNA进行扩增 ,均获得了与设计大小相符的明亮条带 ,为阳性 ,而对其它 6株禽病病原体基因扩增不出任何条带 ,为阴性。敏感试验表... 根据已发表的鸭瘟病毒基因序列 ,设计并合成了一对引物 ,其扩增跨幅为 60 2 bp。用这对引物对 6株鸭瘟病毒 DNA进行扩增 ,均获得了与设计大小相符的明亮条带 ,为阳性 ,而对其它 6株禽病病原体基因扩增不出任何条带 ,为阴性。敏感试验表明可检测到 1 0 0 fg的鸭瘟病毒 展开更多
关键词 pcr技术 检测 鸭瘟病毒 特异性试验 敏感试验
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栉孔扇贝16S rRNA基因片段序列的多态性研究 被引量：40
7
作者 刘亚军 喻子牛 +3 位作者 姜艳艳 张留所 孔晓瑜 宋林生 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期477-483,共7页
采用PCR技术扩增了栉孔扇贝 (Chlamysfarreri)线粒体DNA的 1 6SrRNA基因片段 ,PCR产物经T载体连接之后进行了克隆、测序 ,得到 634bp的核苷酸序列 ;分析了该片段的大连、烟台、青岛、朝鲜 4个自然群体 31个个体的核苷酸序列多态性 ,共... 采用PCR技术扩增了栉孔扇贝 (Chlamysfarreri)线粒体DNA的 1 6SrRNA基因片段 ,PCR产物经T载体连接之后进行了克隆、测序 ,得到 634bp的核苷酸序列 ;分析了该片段的大连、烟台、青岛、朝鲜 4个自然群体 31个个体的核苷酸序列多态性 ,共检测到 2 6个多态性核苷酸位点、1 8种单倍型。结果表明 ,4个群体中以朝鲜群体遗传多样性最高 ,其次为烟台、青岛群体 ,大连群体最低 ; 展开更多
关键词 栉孔扇贝 线粒体DNA 16SRRNA基因 DNA序列测定 pcr技术 克隆 核苷酸序列 多态性
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丙型肝炎病毒NS2基因酵母双杂交“饵”载体构建及表达 被引量：55
8
作者 李克 王琳 +4 位作者 成军 陆荫英 洪源 刘妍 张玲霞 《世界华人消化杂志》 CAS 2002年第2期129-132,共4页
关键词 丙型肝炎 NS2基因 HCV感染 pcr技术 酵母细胞
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大熊猫和小熊猫粪便DNA提取的简易方法 被引量：41
9
作者 张保卫 魏辅文 +1 位作者 李明 吕晓平 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期452-458,共7页
采集了大熊猫和小熊猫的新鲜粪便样品 ,使用 1 0 0 %乙醇保存。通过重复离心富集研究动物的肠道脱落细胞 ,并使用乙醇和双蒸水洗涤以除去抑制物。用 1 %的SDS快速裂解细胞 ,离心除去残渣后 ,向裂解液中加入蛋白酶进行消化。消化结束后... 采集了大熊猫和小熊猫的新鲜粪便样品 ,使用 1 0 0 %乙醇保存。通过重复离心富集研究动物的肠道脱落细胞 ,并使用乙醇和双蒸水洗涤以除去抑制物。用 1 %的SDS快速裂解细胞 ,离心除去残渣后 ,向裂解液中加入蛋白酶进行消化。消化结束后使用等体积的酚 /氯仿抽提 ,乙醇沉淀DNA。用双蒸水溶解粪便DNA后 ,使用PCR产物纯化试剂盒对粪便DNA进行纯化。电泳检测结果显示 ,从乙醇保存的大、小熊猫粪便样品中抽提到高质量的粪便DNA。对线粒体控制区、细胞色素b基因、 1 2SrRNA基因的PCR扩增反应以及测序结果也证实了样品保存方法和DNA抽提方法可靠而高效。此方法使用实验室内常用的分子生物学试剂 ,不仅克服了分子粪便学研究中常见的抑制物粪便DNA微量降解严重等障碍 ,与商业化的粪便抽提试剂盒 (QIAampDNAStoolMiniKit,Qiagen)相比还是一种经济的试验方法 (抽提反应成本为试剂盒的 1 / 5 )。文中还对粪便DNA内细菌基因组等背景DNA可能对分子粪便学试验结果的影响进行了探讨。在基于PCR技术的遗传学研究中 ,对于植食性动物而言 ,粪便内的背景DNA对目标动物DNA片断的扩增和序列测定未见影响 ;但对于肉食性动物 ,则必须考虑被捕食者基因组对试验可能产生的影响 。 展开更多
关键词 大熊猫 小熊猫 粪便 DNA pcr技术 抽提方法
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PCR技术及其在食品微生物检测中的应用 被引量：37
10
作者 李平兰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 1998年第7期3-5,共3页
关键词 食品微生物 检测 pcr技术
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PCR技术在沙门氏菌快速检测中的应用 被引量：37
11
作者 刘华伟 郭蔼光 +1 位作者 马立农 邱立 《动物医学进展》 CSCD 2004年第6期55-58,共4页
PCR是一种体外核酸扩增技术 ,具有敏感性强、特异性高、快速、简便等优点 ,在医学、生物学等领域中得到了广泛应用。文章系统地阐述了PCR技术在沙门氏菌快速检测中的应用 ,并对引物基因设计、PCR扩增过程中的技术参数和常见疑难问题做... PCR是一种体外核酸扩增技术 ,具有敏感性强、特异性高、快速、简便等优点 ,在医学、生物学等领域中得到了广泛应用。文章系统地阐述了PCR技术在沙门氏菌快速检测中的应用 ,并对引物基因设计、PCR扩增过程中的技术参数和常见疑难问题做了归纳总结。同时简要介绍了PCR技术的研究进展 。 展开更多
关键词 pcr技术 沙门氏菌 检测技术 聚合酶链式反应
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马立克氏病病毒不同致病型meq基因的比较研究 被引量：37
12
作者 韦平 崔治中 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期88-92,共5页
为了研究马立克氏病病毒 (MDV)的 meq基因与不同毒株致病性的关系 ,应用PCR技术扩增了不同致病型MDV毒株的meq基因 ,测定和比较了它们的核苷酸和氨基酸序列。这些毒株包括 :国际通用I型疫苗毒CV1988/Rispens株和中国特有的疫苗毒 814株... 为了研究马立克氏病病毒 (MDV)的 meq基因与不同毒株致病性的关系 ,应用PCR技术扩增了不同致病型MDV毒株的meq基因 ,测定和比较了它们的核苷酸和氨基酸序列。这些毒株包括 :国际通用I型疫苗毒CV1988/Rispens株和中国特有的疫苗毒 814株、强毒GA株 (vMDV)、特超强毒 6 48A株 (vv +MDV)以及 6个广西分离到的野毒株。结果发现 ,MDV不同致病型的meq基因序列相对比较保守 ,它们相互间核苷酸和氨基酸序列的同源性均在 95 .6 %～ 99.7%。但是 ,与所有测试的致病性MDV毒株相比 ,二个I型疫苗毒CV1988/Rispens株和 814株均在阅读框的核苷酸序列中缺失第 5 75～ 5 77位 3个碱基(CAC) ,导致一个氨基酸 (脯氨酸 )的缺失。该缺失性突变恰恰位于 meq基因的多脯氨酸功能区的一个重复序列 (EELCAQLC STPPPPI)之中。该缺失性突变与一个疫苗毒株失去致肿瘤性是否有关 。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 MEQ基因 序列比较 缺失性突变 毒株致病 pcr技术
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食品中副溶血性弧菌PCR快速检测方法的研究 被引量：41
13
作者 钟凯 田静 +2 位作者 李业鹏 刘秀梅 计融 《中国食品卫生杂志》 2004年第4期317-320,共4页
为建立食品中副溶血性弧菌 (VP)的PCR检测方法 ,选取tl基因作为靶序列设计一对引物 ,用该引物对 14株从国内食品中分离的副溶血性弧菌 (经传统方法验证 )和 30株非副溶血性弧菌进行PCR扩增 ,并用此方法对人工污染食品进行检测。扩增片... 为建立食品中副溶血性弧菌 (VP)的PCR检测方法 ,选取tl基因作为靶序列设计一对引物 ,用该引物对 14株从国内食品中分离的副溶血性弧菌 (经传统方法验证 )和 30株非副溶血性弧菌进行PCR扩增 ,并用此方法对人工污染食品进行检测。扩增片段表现出极好的特异性 ,对人工污染的冷冻虾仁、沙丁鱼的检出限为 10CFU g ,且与传统方法结果吻合。该方法适宜于食品中副溶血性弧菌的检测。 展开更多
关键词 食品 副溶血性弧菌 pcr技术 检测方法 分子生物学
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小鹅瘟PCR诊断方法的建立和初步应用 被引量：26
14
作者 胡桂学 逄博 +3 位作者 高凤山 柏亚铎 李天松 高光 《经济动物学报》 CAS 2003年第2期50-53,共4页
根据发表的鹅细小病毒B株VP3基因序列 ,设计合成了 1对寡聚核苷酸引物。以国内分离的小鹅瘟病毒为摸板 ,筛选了 (PCR)最佳反应条件 ,并进行了敏感性、特异性和初步应用试验。结果表明 ,在 4 0 μL体积中 ,PCR最佳系统组成为 2uTaq酶、0 ... 根据发表的鹅细小病毒B株VP3基因序列 ,设计合成了 1对寡聚核苷酸引物。以国内分离的小鹅瘟病毒为摸板 ,筛选了 (PCR)最佳反应条件 ,并进行了敏感性、特异性和初步应用试验。结果表明 ,在 4 0 μL体积中 ,PCR最佳系统组成为 2uTaq酶、0 5mol/LdNTP和 2 0 pmol引物 ;最佳反应参数为 96℃变性 4 0s ,5 4℃退火 1min ,72℃延伸 1min ,30个循环。本方法可检出 2 5× 10 -1 5EID50 小鹅瘟病毒 ,并且仅能从小鹅瘟病毒的鹅胚培养物中扩增出与设计值大小相同的 375bp核苷酸片断 ,对照病毒扩增结果为阴性。通过对 6份临床病料的检查 ,2份呈阳性 ,其中 1份来自有典型小鹅瘟症状的雏鹅 ,1份来自无典型小鹅瘟症状的雏鹅。由此说明 。 展开更多
关键词 小鹅瘟 pcr技术 诊断方法 应用 鹅细小病毒
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PCR技术用于布鲁氏菌病的诊断研究 被引量：32
15
作者 王丽 马国柱 《中国地方病防治》 2004年第2期65-67,共3页
目的　尝试将PCR方法应用于布病的临床诊断。方法　使用追溯调查的方法。采集陕西布病患者全血样本 98份、血清样本 2 1份。采用 3种不同的方法提取样本中的DNA。使用了 2对引物 ,每份样本扩增 2次 ,每次 3 5个循环。结果　只有 2份样本... 目的　尝试将PCR方法应用于布病的临床诊断。方法　使用追溯调查的方法。采集陕西布病患者全血样本 98份、血清样本 2 1份。采用 3种不同的方法提取样本中的DNA。使用了 2对引物 ,每份样本扩增 2次 ,每次 3 5个循环。结果　只有 2份样本PCR阳性 ,其余全为阴性。结论　目前的PCR方法敏感性太差 ,尚不能应用于布病的临床诊断。 展开更多
关键词 诊断研究 临床诊断 布鲁氏菌病 pcr技术 血样本 阴性 阳性 布病 pcr方法 引物
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应用PCR技术检测小儿呼吸道病原体的研究 被引量：22
16
作者 陈意振 鲁莉萍 +1 位作者 邹波 陈铁峰 《中国优生与遗传杂志》 1997年第6期44-45,共2页
本文应用PCR技术检测了1370例患者的肺炎支原体（MP）阳性检出率为12．92％，EB病毒（EBV）阳性检出率为14．52％，腺病毒（AV）阳性检出率为12．35％。这些病原体在小儿呼吸道中感染十分常见，可引起上呼吸道感染、咽炎、肺炎及其他系... 本文应用PCR技术检测了1370例患者的肺炎支原体（MP）阳性检出率为12．92％，EB病毒（EBV）阳性检出率为14．52％，腺病毒（AV）阳性检出率为12．35％。这些病原体在小儿呼吸道中感染十分常见，可引起上呼吸道感染、咽炎、肺炎及其他系统炎症。因此早期诊断具有较高的临床意义和流行病学意义。 展开更多
关键词 pcr技术 肺炎支原体 呼吸道感染 小儿
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转基因植物食品的检测策略 被引量：25
17
作者 徐茂军 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期69-73,共5页
近年来 ,随着越来越多的转基因植物被批准商业化生产 ,由此衍生而来的转基因食品数量也迅速增加 ,引起了社会各界对转基因食品的广泛关注。为了消除消费者对转基因食品安全性的疑虑 ,保证转基因植物的健康发展 ,包括我国政府在内的世界... 近年来 ,随着越来越多的转基因植物被批准商业化生产 ,由此衍生而来的转基因食品数量也迅速增加 ,引起了社会各界对转基因食品的广泛关注。为了消除消费者对转基因食品安全性的疑虑 ,保证转基因植物的健康发展 ,包括我国政府在内的世界上许多国家针对转基因食品的研究开发制定了严格的管理条例 ,转基因食品的标识制度是其中重要的一条。建立准确可靠的转基因食品鉴别技术是贯彻转基因食品标识制度的基础。本文在对转基因食品与传统食品的差异进行详细分析的基础上 ,讨论了鉴别转基因食品的一般策略 。 展开更多
关键词 转基因食品 鉴别 pcr技术
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等位基因特异性引物PCR技术及其应用研究 被引量：25
18
作者 马厚勋 牛永红 +1 位作者 李章勇 谢正祥 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第1期15-18,共4页
目的 :研究建立等位基因特异性引物PCR技术体系 ,并将其应用于基因单核苷酸多态性研究工作。方法 :通过美国国家生物信息中心 (NCBI)的genBank获取基因序列及其相应位点的SNP信息。利用Primer5 .0软件设计引物 ,并经NCBI的Blast2 .0软... 目的 :研究建立等位基因特异性引物PCR技术体系 ,并将其应用于基因单核苷酸多态性研究工作。方法 :通过美国国家生物信息中心 (NCBI)的genBank获取基因序列及其相应位点的SNP信息。利用Primer5 .0软件设计引物 ,并经NCBI的Blast2 .0软件检验其特异性。结果 :建立了单一等位基因特异性引物PCR(SASP -PCR)与嵌套式等位基因特异性引物PCR(NASP—PCR)两种技术 ,并应用于 β2 肾上腺素受体及内皮源性一氧化氮合酶基因单核苷酸多态性的研究 ,证实该技术的稳定性和优越性。结论 :等位基因特异性引物PCR技术是一种更为简便、特异性较高、费用少的、便于推广的SNP检测方法 。 展开更多
关键词 等位基因 单核苷酸多态性 特异性引物 pcr技术 SNP SASP Β2肾上腺素受体 位点 推广 群体
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核酸探针和PCR技术在食品检验中的应用 被引量：27
19
作者 卿柳庭 屈小玲 《动物医学进展》 CSCD 2000年第1期22-24,共3页
核酸探针技术和多聚酶链反应( Polymerase chain reaction,PCR)技术是近年来发展起来的两种高新生物技术。本文着重介绍了核酸探针技术和 PCR技术的原理及其在食品检验中的应用。同时提出了这两种技术在食品检验中尚存在的问题以及解决... 核酸探针技术和多聚酶链反应( Polymerase chain reaction,PCR)技术是近年来发展起来的两种高新生物技术。本文着重介绍了核酸探针技术和 PCR技术的原理及其在食品检验中的应用。同时提出了这两种技术在食品检验中尚存在的问题以及解决的办法 ,并对其在食品检验中的应用前景作了展望。 展开更多
关键词 核酸探针技术 pcr技术 食品检验 肉类卫生
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柑桔黄龙病病原DNA片段的克隆及序列分析 被引量：28
20
作者 孔维文 邓晓玲 +1 位作者 梁志慧 唐伟文 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期71-75,共5页
本研究利用聚合酶链式反应技术 (PCR) ,合成了中国柑桔黄龙病病原的一段 DNA片段。将此片段插入到 p UC18的 Eco RI位点 ,并转化进大肠杆菌 (Escherichia coli)的 DH5α菌株中。通过 PCR鉴定 ,限制性内切酶 (Eco RI)酶切分析及核苷酸序... 本研究利用聚合酶链式反应技术 (PCR) ,合成了中国柑桔黄龙病病原的一段 DNA片段。将此片段插入到 p UC18的 Eco RI位点 ,并转化进大肠杆菌 (Escherichia coli)的 DH5α菌株中。通过 PCR鉴定 ,限制性内切酶 (Eco RI)酶切分析及核苷酸序列分析 ,均表明克隆成功。序列分析结果显示 ,克隆片段与已知相应序列间同源性达 98.6 %。该研究为制备柑桔黄龙病病原 DNA分子探针奠定了基础。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 克隆 序列分析 pcr技术 病原
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