期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到1,206篇文章
< 1 2 … 61 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
土壤微生物总DNA的提取和纯化 被引量：142
1
作者 张瑞福 曹慧 +2 位作者 崔中利 李顺鹏 樊奔 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期276-282,共7页
本文建立了从土壤中提取总DNA的方法 ,并通过改进使适合于对革兰氏阳性菌的提取。用 9种性质不同的土壤进行验证 ,均提取到了DNA ,每克干土的DNA提取量从 3 30 μg～1 3 41 μg,通过透析袋回收进行纯化 ,纯化回收率达到 65 34% ,纯化... 本文建立了从土壤中提取总DNA的方法 ,并通过改进使适合于对革兰氏阳性菌的提取。用 9种性质不同的土壤进行验证 ,均提取到了DNA ,每克干土的DNA提取量从 3 30 μg～1 3 41 μg,通过透析袋回收进行纯化 ,纯化回收率达到 65 34% ,纯化后的土壤DNA可以直接扩增出 1 6SrDNA。 9种土壤的提取率从 60 5 1 %～ 93 45 % ,可以从每g干土添加 展开更多
关键词 DNA提取 纯化 提取量 提取率 pcr扩增 土壤微生物
下载PDF
金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分型和分布 被引量：116
2
作者 张严峻 张俊彦 +3 位作者 梅玲玲 王志刚 朱敏 王赞信 《中国卫生检验杂志》 CAS 2005年第6期682-684,共3页
目的:建立金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测方法。初步研究生牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布状况。方法:应用PCR扩增经分离鉴定的金黄色葡萄球菌肠毒素基因SEA-SEJ,电泳检测扩增结果。结果:建立了金黄色葡萄球菌肠毒素基因PCR检... 目的:建立金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测方法。初步研究生牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布状况。方法:应用PCR扩增经分离鉴定的金黄色葡萄球菌肠毒素基因SEA-SEJ,电泳检测扩增结果。结果:建立了金黄色葡萄球菌肠毒素基因PCR检测方法。从生牛奶中分离的29株金黄色葡萄球菌检测到SEA-SED和SEG-SEJ基因,没有检测到SEE基因。毒素基因携带率为65.5%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占37.9%。有SEA基因的占51.7%,含其它传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占17.2%,携带新发现的毒素基因SEG、SEH、SEI和SEJ的菌株占41.4%。结论:建立的PCR检测金黄色葡萄球菌的肠毒素基因的方法可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型和分布的研究。研究表明,生牛奶中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,而且携带新发现的肠毒素基因的较多。 展开更多
关键词 肠毒素基因 金黄色葡萄球菌肠毒素 pcr检测方法 pcr扩增 基因携带率 SEA基因 生牛奶 分布状况 分离鉴定 电泳检测 基因类型 基因分型 E基因 步研究 菌株 SEB SEC SED SEG 带毒率 新发
下载PDF
土壤微生物分子生态学研究中总DNA的提取 被引量：72
3
作者 赵勇 周志华 +3 位作者 李武 刘彬彬 潘迎捷 赵立平 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期854-860,共7页
建立了一种土壤DNA提取方法。根据DNA产量和纯度2个评价指标,从3种手提土壤DNA方法中优选出方法B为手提DNA方法(Labmethod),它包括样品预处理,细胞裂解,粗DNA纯化,其中细胞裂解组合了玻璃珠击打,SDS裂解,溶菌酶裂解。进一步应用PCR-限... 建立了一种土壤DNA提取方法。根据DNA产量和纯度2个评价指标,从3种手提土壤DNA方法中优选出方法B为手提DNA方法(Labmethod),它包括样品预处理,细胞裂解,粗DNA纯化,其中细胞裂解组合了玻璃珠击打,SDS裂解,溶菌酶裂解。进一步应用PCR-限制性片段长度多态性(Restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)技术及PCR-温度梯度凝胶电泳(Temperaturegradientgelelectrophoresis,TGGE)技术,结合DNA产量、纯度、片段大小以及所反映的微生物群落结构特性等指标评价了手提方法(Labmethod)得到的总DNA质量,并将这些结果与2种应用较广的商业试剂盒(MoBioUltraCleanSoilDNAKit和Bio101FastDNASPINKit(ForSoil))所得DNA的各种指标进行了比较。结果表明,手提方法(Labmethod)的粗DNA产量低于Bio101Kit的,但高于MoBioKit的。这些方法所得DNA的长度都在21kb左右,Labmethod提取的DNA没有严重被剪切现象,而2种试剂盒提取的DNA都有不同程度的剪切。手提方法得到的DNA经纯化后,应用细菌及真菌特异引物进行PCR扩增,均能获得目的片段,表明该方法能从土壤中同时有效提取细菌和真菌总基因组DNA。并且,手提方法所得DNA的细菌16SrDNA和真菌18SrDNA的PCR-RFLP图谱与两种商业试剂盒的图谱基本相似,但3种方法提取的DNA在细菌16SrDNAV3区和真菌28SrDNA片段的PCR-TGGE图谱上都存在一定差异,主要表现在一些弱势条带的有无或强弱上。这说明手提方法提取的总DNA与2种商业试剂盒一样,在一定程度上能反映微生物群落的多样性和组成。总之,手提DNA方法(Labmethod)所用试剂普通,价格便宜,能在4h以内获得够质够量的土壤DNA用于微生物分子生态学研究,较适合于广大普通实验室进行土壤DNA提取工作。 展开更多
关键词 土壤DNA提取 DNA质量 pcr扩增 限制性片段长度多态性分析 温度梯度凝胶电泳分析
下载PDF
利用氯化苄提取真菌基因组DNA及其分子生物学分析 被引量：57
4
作者 张莉莉 张苓花 +1 位作者 史剑斐 王运吉 《大连轻工业学院学报》 2000年第1期36-39,共4页
研究了利用氯化苄提取丝状真菌的基因组DNA。在 pH9.0条件下 ,使氯化苄与菌体细胞充分混合后于 50℃保温 1h ,可以从中华根霉 (Rhizopuschinensis) Rc0 1和少根根霉 (Rhizopusarrhizus)Ra0 1的完整细胞及经液氮研磨的无花果曲霉 (Asperg... 研究了利用氯化苄提取丝状真菌的基因组DNA。在 pH9.0条件下 ,使氯化苄与菌体细胞充分混合后于 50℃保温 1h ,可以从中华根霉 (Rhizopuschinensis) Rc0 1和少根根霉 (Rhizopusarrhizus)Ra0 1的完整细胞及经液氮研磨的无花果曲霉 (Aspergillusficuum ) AS3.32 4和无花果丝孢酵母 (Trichosporonficuum) Tf0 1的菌粉中提取基因组DNA。所提DNA收获量大 ,蛋白质污染少 ,分子量均在 2 3kb以上 ,一级结构完整。以AS3.32 4基因组DNA为模板在特定引物下 ,可通过PCR扩增出 1 .4kb的植酸酶基因 ( phyA) 。 展开更多
关键词 基因组DNA提取 氯化苄 丝状真菌 pcr扩增
下载PDF
桦树ISSR-PCR反应体系的优化 被引量：18
5
作者 姜静 杨传平 +2 位作者 刘桂丰 武金华 范志勇 《生态学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期91-93,共3页
以桦树 (Betula)DNA为材料 ,分析了DNA浓度、TagDNA聚合酶用量及退火温度对ISSR PCR扩增结果的影响 ,筛选出了扩增条带清晰、多态性丰富的 17个ISSR引物 ,建立了稳定的、可重复的桦树ISSR PCR最佳反应体系及PCR扩增参数 。
关键词 桦树 DNA ISSR引物 TagDNA聚合酶 ISSR-pcr pcr扩增 遗传多样性
下载PDF
南、北五味子ISSR鉴别研究 被引量：31
6
作者 孙岳 李景鹏 +1 位作者 金元昌 矫洪涛 《中医药学报》 CAS 2003年第1期29-30,共2页
目的 :为准确鉴别南五味子和北五味子寻找一种新的鉴别手段。方法 :采用ISSR(InterSimpleSequenceRepeats)技术对南、北五味子基因组DNA进行PCR扩增。结果 :9个ISSR引物中有 3个扩增出多态性好的条带 ,根据其琼脂糖凝胶电泳上显示的DNA... 目的 :为准确鉴别南五味子和北五味子寻找一种新的鉴别手段。方法 :采用ISSR(InterSimpleSequenceRepeats)技术对南、北五味子基因组DNA进行PCR扩增。结果 :9个ISSR引物中有 3个扩增出多态性好的条带 ,根据其琼脂糖凝胶电泳上显示的DNA带型差异可迅速区分南、北五味子。结论 :ISSR技术是在分子水平上鉴别南、北五味子的一种行之有效的方法。 展开更多
关键词 南五味子 北五味子 ISSR 鉴别研究 基因组DNA pcr扩增
下载PDF
巴戟天与常见混伪品的rDNA-ITS序列分析及其分子鉴定 被引量：37
7
作者 丁平 方琴 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期908-911,共4页
目的比较巴戟天与常见混伪品之间的rDNA-ITS碱基序列的差异及其规律,同时为巴戟天及混伪品的指纹图谱鉴别提供分子标记.方法对巴戟天及其常见混伪品的rDNA-ITS进行了PCR扩增、测序,并运用CLUSTAL X、MEGA软件对该区进行序列分析.结果测... 目的比较巴戟天与常见混伪品之间的rDNA-ITS碱基序列的差异及其规律,同时为巴戟天及混伪品的指纹图谱鉴别提供分子标记.方法对巴戟天及其常见混伪品的rDNA-ITS进行了PCR扩增、测序,并运用CLUSTAL X、MEGA软件对该区进行序列分析.结果测定了巴戟天及其混伪品的rDNA-ITS区序列,包括ITS1、5.8S和ITS2全长序列以及18S、26S部分序列.巴戟天与假巴戟天、羊角藤在ITS1和ITS2区的差异性分别为2.9%～5.8%和2.9%～4.2%,而与虎刺在ITS1和ITS2区的差异性则为21.2%和18.9%.根据ITS序列特征构建的系统树,混伪品假巴戟天与羊角藤首先聚类,然后与巴戟天聚在一起,而虎刺则单独聚为一支.结论rDNA-ITS序列可作为巴戟天与混伪品的一种较好的分子指纹图谱的标记方法. 展开更多
关键词 rDNA-ITS序列 巴戟天 混伪品 分子鉴定 分析及 ITS2区 指纹图谱鉴别 ITS区序列 ITS1 pcr扩增 碱基序列 分子标记 序列分析 全长序列 序列特征 标记方法 差异性 羊角藤 18S 系统树 虎刺
下载PDF
一种高效可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA抽提方法 被引量：29
8
作者 李钧敏 金则新 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期2107-2111,共5页
以CTAB-溶菌酶-蛋白酶K-冻融裂解法直接抽提土壤总微生物的基因组DNA,利用PEG8000沉淀和纯化DNA.结果表明,该方法是一种简便、有效可直接应用于PCR分析的土壤总微生物基因组DNA的抽提方法.采用含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的缓冲液预洗,添加Ca... 以CTAB-溶菌酶-蛋白酶K-冻融裂解法直接抽提土壤总微生物的基因组DNA,利用PEG8000沉淀和纯化DNA.结果表明,该方法是一种简便、有效可直接应用于PCR分析的土壤总微生物基因组DNA的抽提方法.采用含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的缓冲液预洗,添加CaCl2和BSA,可以去除腐殖酸;用PEG8000沉淀DNA,可以提高DNA质量;采用冻融法破碎细胞,CTAB、溶菌酶和蛋白质酶K共同作用以裂解细胞,可以保证获得大片段的DNA,提高DNA产率.用该方法抽提的七子花林下土壤总微生物DNA产率为9·22μg·g-1,A260/A280为1·65,可适用于PCR扩增及扩增rDNA限制酶切分析(ARDRA)技术,适宜的模板DNA浓度为0·67ng·μl-1.快速、有效、可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA提取方法的建立,为大规模的土壤微生物分子生态学研究提供了可能. 展开更多
关键词 土壤总微生物 DNA 抽提 pcr扩增
下载PDF
蚕豆大M染色体长臂端部的显微切割与PCR扩增 被引量：30
9
作者 宋文芹 崔香芹 +3 位作者 许文胜 李秀兰 彭永康 陈瑞阳 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1996年第4期361-363,共3页
染色体微切与微克隆技术由于可以在分子水平上对特定染色体区域进行基因定位和结构研究,因此,当Scalenghe首次在果蝇唾腺染色体上取得成功后,很快将这种技术应用于小鼠、人的染色体上.并利用该技术对染色体特定区域从分子水平上进行详... 染色体微切与微克隆技术由于可以在分子水平上对特定染色体区域进行基因定位和结构研究,因此,当Scalenghe首次在果蝇唾腺染色体上取得成功后,很快将这种技术应用于小鼠、人的染色体上.并利用该技术对染色体特定区域从分子水平上进行详细研究,并得到很多有价值的结果.我国对人类染色体微切与微克隆也已有报道,如:夏家辉等成功地构建了人类7号染色体专特性探针池和14个染色体区带特异性探针池。 但植物染色体的显微切割体外扩增与微克隆技术由于染色体同步化和制片困难与动物相比进展缓慢,目前只有在甜菜中与抗线虫有关染色体及Schondelmaier在大麦IHS染色体、Albani在小麦染色体上作过报道.我国则尚未开展这方面的研究。 展开更多
关键词 蚕豆 显微切割 pcr扩增 植物 染色体
原文传递
重症监护病房产VIM-2型金属酶绿脓假单胞菌的研究 被引量：36
10
作者 杨青 魏泽庆 +3 位作者 俞云松 钟步云 陈亚岗 李兰娟 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期678-682,共5页
目的　分析重症监护病房产金属 β内酰胺酶绿脓假单胞菌的同源性、金属酶基因型及转移机制。方法　用 2 巯基丙酸协同试验筛选重症监护病房分离的对亚胺培南耐药的绿脓假单胞菌中的产金属酶株 ,聚合酶链反应 (PCR)、克隆测序确定耐药基... 目的　分析重症监护病房产金属 β内酰胺酶绿脓假单胞菌的同源性、金属酶基因型及转移机制。方法　用 2 巯基丙酸协同试验筛选重症监护病房分离的对亚胺培南耐药的绿脓假单胞菌中的产金属酶株 ,聚合酶链反应 (PCR)、克隆测序确定耐药基因 ,整合子PCR扩增 ,脉冲场凝胶电脉分析同源性。结果　 2 6株绿脓假单胞菌 2 巯基丙酸协同试验阳性 ,酶粗提液能水解亚胺培南 ,活性能被EDTA抑制。VIM型金属酶引物PCR扩增阳性 ,经克隆测序证实为VIM 2型金属酶。整合子可变区序列分析表明 ,blaVIM 2位于Ⅰ类整合子上 ,该基因上游含有 1个aacA4基因 ,下游为aadB基因。脉冲场凝胶电脉结果证实产酶株均来自同一克隆。结论　医院重症监护病房有产VIM 2型金属酶绿脓假单胞菌的流行 。 展开更多
关键词 重症监护病房 绿脓假单胞菌 整合子 2-巯基丙酸 亚胺培南 阳性 耐药基因 金属酶 克隆测序 pcr扩增
原文传递
不同产区太子参的rDNA ITS区序列的比较 被引量：34
11
作者 余永邦 秦民坚 +2 位作者 梁之桃 余国奠 谭宁华 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2003年第4期1-5,共5页
使用1对引物18SP1和26SP2对采自14个产区的太子参〔Pseudostellariaheterophylla(Miq.)PaxexPaxetHoffm.〕进行ITS基因的PCR扩增和测序。序列分析结果表明,14个产区太子参的ITS1片段长度为219～222bp,ITS2片段长度为235～236bp,5.8S片... 使用1对引物18SP1和26SP2对采自14个产区的太子参〔Pseudostellariaheterophylla(Miq.)PaxexPaxetHoffm.〕进行ITS基因的PCR扩增和测序。序列分析结果表明,14个产区太子参的ITS1片段长度为219～222bp,ITS2片段长度为235～236bp,5.8S片段长度为155～157bp。除江苏宜兴,江苏句容马梗,江苏南京老鹰山和江苏溧阳等4个产区的ITS序列碱基完全一致外,其他10个产区的ITS序列则有不同的变异,碱基变异数目(包括5 8S编码区)为1～17个。使用UPGMA法重建系统发生树,从分子生物学角度说明了它们的变异程度,为利用ITS区序列的差异鉴别不同产区的太子参提供了依据。 展开更多
关键词 太子参 RDNA ITS区序列 pcr扩增 石竹科
下载PDF
一种改进的水稻总DNA的快速提取方法 被引量：36
12
作者 张凤娟 张满良 朱水芳 《植物检疫》 北大核心 2004年第6期330-332,共3页
植物总DNA的提取质量是植物分子生物学操作成败的关键 ,一个优秀的总DNA提取方法往往可以达到事半功倍的效果。本文以水稻叶片为材料 ,提出了一种改进的植物叶片总DNA快速提取方法 ,该方法能在 35min之内提取到水稻总DNA。电泳结果表明... 植物总DNA的提取质量是植物分子生物学操作成败的关键 ,一个优秀的总DNA提取方法往往可以达到事半功倍的效果。本文以水稻叶片为材料 ,提出了一种改进的植物叶片总DNA快速提取方法 ,该方法能在 35min之内提取到水稻总DNA。电泳结果表明此改进方法提取的总DNA产量与传统CTAB法相当 ,PCR扩增结果表明其质量可靠 。 展开更多
关键词 总DNA 水稻叶片 快速提取方法 CTAB法 优秀 产量 pcr扩增 植物分子生物学 植物叶片 电泳
下载PDF
DNA指纹用于杂交水稻种子纯度和真伪鉴定的研究进展 被引量：32
13
作者 汪爱顺 李进波 刘汉珍 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第3期393-400,共8页
本文简要阐述了RAPD、RFLP、AFLP、SSR等几种主要的建立DNA指纹图谱的分子标记技术及其在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中的研究和应用情况,同时评述了这几种分子标记技术各自的优缺点,并就水稻DNA提取方法的改进、PCR扩增反应程序和反应... 本文简要阐述了RAPD、RFLP、AFLP、SSR等几种主要的建立DNA指纹图谱的分子标记技术及其在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中的研究和应用情况,同时评述了这几种分子标记技术各自的优缺点,并就水稻DNA提取方法的改进、PCR扩增反应程序和反应体系的优化、扩增产物的检测以及DNA指纹在杂交稻种子纯度和真伪鉴定中的准确性等问题进行了讨论。DNA指纹在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中具有广阔的应用前景,关键是要建立一套完善的、标准化的技术体系,进一步简化实验操作程序,降低成本,真正做到简单快速、准确可靠,使DNA指纹能用于规模化、商业化的种子质量鉴定之中。 展开更多
关键词 种子纯度 杂交水稻 研究进展 真伪鉴定 分子标记技术 DNA指纹图谱 DNA提取方法 种子质量鉴定 pcr扩增 RAPD RFLP AFLP 应用情况 反应体系 反应程序 扩增产物 技术体系 操作程序 降低成本 定中 SSR 优缺点 准确性 杂交稻
下载PDF
浓香型白酒曲药中细菌组成及系统学分析 被引量：35
14
作者 胡佳 邓斌 +3 位作者 张文学 张宿义 罗俊成 胡承 《酿酒科技》 北大核心 2007年第5期17-19,共3页
利用免培养法(Culture independent approach)提取浓香型白酒曲药中细菌的总DNA,在分子水平上运用PCR扩增技术和16S rDNA序列同源性分析等方法测定曲药中细菌的16SrDNA基因近全序列,并建立系统发育树图。结果表明,组成该曲药中的细菌分... 利用免培养法(Culture independent approach)提取浓香型白酒曲药中细菌的总DNA,在分子水平上运用PCR扩增技术和16S rDNA序列同源性分析等方法测定曲药中细菌的16SrDNA基因近全序列,并建立系统发育树图。结果表明,组成该曲药中的细菌分属于Delftia、Dys-gonomonas、Bacteroidetes、proteobacterium、Nocardiopsis、Pseudomonas和Arthrobacter几大类群(phylum),表现出高度的细菌多样性。 展开更多
关键词 微生物 大曲 16S RDNA序列 pcr扩增 免培养法 细菌
下载PDF
铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性研究 被引量：33
15
作者 苑鹤 林二培 +2 位作者 朱波 俞巧仙 斯金平 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期566-569,共4页
目的了解铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性,为种质资源的保护与新品种的选育提供基础。方法利用RAPD分子标记对浙江义乌、天台、建德、武义,云南麻栗坡、勐海的14个居群的铁皮石斛和1个居群的紫皮石斛进行遗传多样性分析。结果从225个R... 目的了解铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性,为种质资源的保护与新品种的选育提供基础。方法利用RAPD分子标记对浙江义乌、天台、建德、武义,云南麻栗坡、勐海的14个居群的铁皮石斛和1个居群的紫皮石斛进行遗传多样性分析。结果从225个RAPD引物中筛选出15个引物,对105个铁皮石斛和3个紫皮石斛样本进行PCR扩增,共扩增出138条带,其中133条为多态性条带,多态性条带比率(PPB)为96.38%;14个铁皮石斛居群的多态位点(PPL)在10.79%～76.26%,平均为45.32%。结论全国主产区人工栽培的铁皮石斛遗传多样性丰富,铁皮石斛种质的亲缘关系远近与其地理种源具有显著的相关性,与栽培地点无关。 展开更多
关键词 铁皮石斛 栽培居群 RAPD 遗传多样性 pcr扩增
原文传递
鲫鱼基因组DNA提取方法的探讨 被引量：29
16
作者 刘臻 鲁双庆 +1 位作者 肖调义 陈开键 《水利渔业》 北大核心 2004年第6期20-22,共3页
以鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾为材料,采用苯酚-氯仿法、试剂盒法提取鲫鱼基因组DNA,对不同方法提取的结果进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明不同方法提取的鲫鱼基因组DNA浓度在385.8～3167.5ng/... 以鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾为材料,采用苯酚-氯仿法、试剂盒法提取鲫鱼基因组DNA,对不同方法提取的结果进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明不同方法提取的鲫鱼基因组DNA浓度在385.8～3167.5ng/μL,A260/280比值处于1.66～1.87,所提取的DNA适合微卫星PCR扩增。因此,用苯酚-氯仿法对鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾,用试剂盒法对鲫鱼的血液均能提取鲫鱼基因组DNA。 展开更多
关键词 血液 试剂盒法 基因组DNA 肌肉 比值 琼脂糖凝胶电泳 pcr扩增 鲫鱼 微卫星 酚-氯仿法
下载PDF
PCR法快速检测鸭疫里氏杆菌的研究 被引量：26
17
作者 杨建远 邓舜洲 何后军 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期439-442,共4页
根据Gen-Bank中25株鸭疫里氏杆菌(RA)的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,在其高度保守区设计了一对特异性引物,成功地建立了鸭疫里氏杆菌的快速、准确PCR检测方法。RA参考菌株J04(2型)、J07(JX1型)均能扩增出671bp的特异性目的条带,而对鸭源大... 根据Gen-Bank中25株鸭疫里氏杆菌(RA)的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,在其高度保守区设计了一对特异性引物,成功地建立了鸭疫里氏杆菌的快速、准确PCR检测方法。RA参考菌株J04(2型)、J07(JX1型)均能扩增出671bp的特异性目的条带,而对鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌、鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性。PCR产物经EcoRI酶切鉴定得494bp和177bp两个预期条带。最低检出基因组DNA浓度为800fg。用全菌体进行PCR时,本实验室分离鉴定的60株RA均能够扩增出特异性目的条带。25份临床疑似病例的分离菌株的PCR扩增阳性率与生化鉴定率完全一致。该方法表明能从病料组织培养8h的混合菌群中快速、准确地检测到RA,可用于RA的快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭疫里氏杆菌 快速检测 pcr法 pcr检测方法 多杀性巴氏杆菌 流行病学调查 特异性引物 pcr产物 DNA浓度 pcr扩增 基因序列 外膜蛋白 大肠杆菌 沙门氏菌 葡萄球菌 酶切鉴定 分离鉴定 生化鉴定 分离菌株 疑似病例 组织培养
下载PDF
PCR扩增黄鳝和刺鳅SRY盒基因 被引量：21
18
作者 周荣家 余其兴 +1 位作者 程汉华 郭一清 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1996年第7期640-642,共3页
性别是从酵母到人类几乎所有真核生物所共有的性状,性别决定机制的探索一直是生物学研究的热点之一,其研究工作涉及遗传、发育和进化等领域,它不仅具有重要的理论意义,而且对实现动物性别的人为控制,对认识人类性分化异常等多种与性别... 性别是从酵母到人类几乎所有真核生物所共有的性状,性别决定机制的探索一直是生物学研究的热点之一,其研究工作涉及遗传、发育和进化等领域,它不仅具有重要的理论意义,而且对实现动物性别的人为控制,对认识人类性分化异常等多种与性别有关的疾病,准确地进行产前性别诊断和预防性连锁疾病等都有重大的现实意义,同时,对性别这一在进化上保守性状进行深入研究,将会为生物的进化分析提供新的线索。近年来,在人和哺乳动物性别决定机制的研究方面,已取得突破性进展。位于Y染色体上的SRY基因被认为是性别决定的关键基因。在胚胎发育过程中,它决定着睾丸的形成,由此决定着个体向男(雄)性方向发育。最近的研究表明,在其他染色体上以及在进化程度明显不同的物种中,也广泛存在SRY的同源基因。这些拟SRY基因现已被命名为SRY盒(SRY-box)或者SOX基因。鱼类约占脊椎动物种数的一半,作为较低等的脊椎动物。 展开更多
关键词 SRY盒基因 鱼类 pcr扩增 黄鳝 刺鳅 遗传
原文传递
中药材蛇胆的DNA分子标记鉴定研究 被引量：28
19
作者 刘向华 王义权 +2 位作者 刘忠权 童宗中 周开亚 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期229-232,共4页
目的　运用分子标记技术鉴定药材蛇胆的真伪 ,以克服目前仅依据形态、显微特征及理化性状进行鉴别的不足。方法　分别从药材蛇胆的胆衣和胆汁、原动物棕黑锦蛇的肌肉和胆汁中提取DNA ,经PCR扩增得到约 40 0bp的 12SrRNA基因片段 ,并对... 目的　运用分子标记技术鉴定药材蛇胆的真伪 ,以克服目前仅依据形态、显微特征及理化性状进行鉴别的不足。方法　分别从药材蛇胆的胆衣和胆汁、原动物棕黑锦蛇的肌肉和胆汁中提取DNA ,经PCR扩增得到约 40 0bp的 12SrRNA基因片段 ,并对该基因片段进行测序研究。结果　从少量药材蛇胆的胆衣和胆汁中可提得足够用于PCR扩增的DNA模板 ,扩增产物的测序结果表明同一动物的胆衣和胆汁、肌肉和胆汁的碱基序列完全一致。结论DNA分子标记技术可用于中药材蛇胆和胆汁的鉴定 ,提示该技术也可用于其他动物分泌物类型药材的鉴别。目前市场上药材蛇胆来源较复杂 。 展开更多
关键词 蛇胆 胆衣 胆汁 pcr扩增 DNA测序 中药
下载PDF
土壤微生物总DNA提取方法的优化 被引量：33
20
作者 赵裕栋 周俊 何璟 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1143-1150,共8页
【目的】土壤中未培养微生物约占总量的99%,这就意味着绝大多数微生物资源还未得到开发和利用。本研究通过优化土壤微生物总DNA的提取方法,获得较高质量的DNA,为后期研究土壤微生物的多样性及构建大插入片段的宏基因组文库奠定基础。【... 【目的】土壤中未培养微生物约占总量的99%,这就意味着绝大多数微生物资源还未得到开发和利用。本研究通过优化土壤微生物总DNA的提取方法,获得较高质量的DNA,为后期研究土壤微生物的多样性及构建大插入片段的宏基因组文库奠定基础。【方法】通过综合比较已报道的微生物DNA提取方法的优缺点,我们设计出一种新的提取方案。对提取过程中的几个关键步骤进行了优化,包括联合使用SDS-CTAB和溶菌酶一起来破细胞,利用氯仿除蛋白,使用PVPP柱纯化DNA等。比较分析了优化后的方法和3种已报道方法所获得的土壤总DNA的产量、纯度及片段大小。【结果】优化后的方法所获得的土壤DNA质量明显有所提高:每克土壤最高能提取95μg DNA,A260/A280和A260/A230比值更接近理想水平,PCR扩增能够得到明显的目标条带,DNA片段最大能达到100 kb左右。【结论】通过比较分析,最终确立了一种较理想的土壤微生物总DNA提取方法,为更好地开发利用土壤未培养微生物资源提供了有力工具。 展开更多
关键词 土壤微生物 eDNA抽提 DNA的产量及质量 pcr扩增 大片段DNA
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 61 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部