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HLA－DQA1启动子区多态性与胰岛素依赖型糖尿病发病的关系
1
作者 邱长春 宋长兴 +3 位作者 朱席琳 胡秀玲 白松梅 周文郁 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第6期411-415,共5页
应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物直接序列分析，鉴定早发及迟发胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者ＨＬＡ－ＤＱＡ１５′－上游启动子区（ＱＡＰ）的核苷酸序列。结果表明，早发ＩＤＤＭ的ＱＡＰ－９２ｂｐ位发生胞嘧啶被胸腺嘧啶... 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物直接序列分析，鉴定早发及迟发胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者ＨＬＡ－ＤＱＡ１５′－上游启动子区（ＱＡＰ）的核苷酸序列。结果表明，早发ＩＤＤＭ的ＱＡＰ－９２ｂｐ位发生胞嘧啶被胸腺嘧啶取代（Ｃ→Ｔ－９２）；迟发糖尿病在－１４６ｂｐ位置发生胸腺嘧啶（Ｔ）被胞嘧啶（Ｃ）取代，即Ｔ→Ｃ－４６。提示启动子区不同位置单个碱基取代，可能不同程度上改变其与ＤＮＡ结合蛋白的亲和力，而导致ＨＬＡ－ＤＯＡ１异常诱导表达。 展开更多
关键词 启动子区 单链构象多态生 糖尿病 聚合酶链反应
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两株中国腮腺炎野毒SH基因cDNA直接测序和克隆测序
2
作者 武力 白植生 +3 位作者 李益民 周旭 宁小军 杨朝晖 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期33-37,共5页
对来源于兰州和上海两市的两株腮腺炎病毒野毒的小疏水蛋白（ＳＨ）基因及其旁侧区ｃＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物，分别进行直接测序和克隆测序。用直接测序法测定２株腮腺炎野毒３７８个核苷酸序列，在此范围内存在１６个核苷酸（４．２％... 对来源于兰州和上海两市的两株腮腺炎病毒野毒的小疏水蛋白（ＳＨ）基因及其旁侧区ｃＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物，分别进行直接测序和克隆测序。用直接测序法测定２株腮腺炎野毒３７８个核苷酸序列，在此范围内存在１６个核苷酸（４．２％）差异，其中１１个（２．９％）位于编码区序列中，所推导的ＳＨ蛋白序列有６个氨基酸（１０．５％）差异。克隆测序法测定的这两株腮腺炎野毒的核苷酸序列相当于直接法的７８－３７８位核苷酸。两种方法在所测３０１个核苷酸（ｎｔ）的共同区域内序列完全一致。证明ＰＣＲ产物直接测序用于腮腺炎病毒分子流行病学研究不仅特异性强，敏感度高，而且比克隆测序法更为快速简便。 展开更多
关键词 腮腺炎病毒 小疏水蛋白 基因 pcr 克隆 测序
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单克隆抗体可变区基因PCR扩增产物的直接测序 被引量：1
3
作者 兰风华 梅田真鄉 井上圭三 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1996年第1期10-14,共5页
利用一组通用引物对单克隆抗体可变区ｃＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增。扩增产物经纯化后通过一个以链终止法为基础的“循环测序”程序直接进行序列测定，其中所用四种双脱氧核苷酸分别带不同的荧光标记，测序引物选自同一组通用引物。测序电泳... 利用一组通用引物对单克隆抗体可变区ｃＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增。扩增产物经纯化后通过一个以链终止法为基础的“循环测序”程序直接进行序列测定，其中所用四种双脱氧核苷酸分别带不同的荧光标记，测序引物选自同一组通用引物。测序电泳和数据收集在ＤＮＡ测序仪上进行。本法简单、快速、准确，是解析抗体可变区序列的有效手段。 展开更多
关键词 pcr 直接序列测定 单克隆抗体 循环测序 可变区
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一株腮腺炎野毒分离传代前后其SH基因cDNA的测序比较
4
作者 武力 白植生 +2 位作者 李益民 宁小军 杨朝晖 《微生物学免疫学进展》 1997年第4期38-41,共4页
为证实鸡胚分离传代是否引起腮腺炎病毒基因组高变区小疏水蛋白（ＳＨ）基因的变异，用来源于上海的腮腺炎野毒Ｗｓｈ３株在鸡胚尿囊腔分离前和传代５次后测定ＳＨ基因及其旁侧区３８０个核苷酸的ｃＤＮＡ序列，两者结果相同，未见该基... 为证实鸡胚分离传代是否引起腮腺炎病毒基因组高变区小疏水蛋白（ＳＨ）基因的变异，用来源于上海的腮腺炎野毒Ｗｓｈ３株在鸡胚尿囊腔分离前和传代５次后测定ＳＨ基因及其旁侧区３８０个核苷酸的ｃＤＮＡ序列，两者结果相同，未见该基因的突变。该基因核苷酸测序可用于腮腺炎病毒的分子流行病学和毒株基因鉴别研究。 展开更多
关键词 腮腺炎病毒 小疏水蛋白基因 CDNA 测序比较
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焦磷酸测序与PCR产物直接测序在乙型肝炎病毒耐药基因检测中的敏感性比较 被引量：3
5
作者 孙树梅 周浩 周彬 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第14期2991-2993,共3页
目的通过与PCR产物直接测序比较,评价焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒耐药基因检测中的应用价值。方法选取临床使用拉米夫定抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者,分别采用巢式PCR焦磷酸测序法与巢式PCR产物直接测序法检测拉米夫定相关耐药位点rt180... 目的通过与PCR产物直接测序比较,评价焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒耐药基因检测中的应用价值。方法选取临床使用拉米夫定抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者,分别采用巢式PCR焦磷酸测序法与巢式PCR产物直接测序法检测拉米夫定相关耐药位点rt180变异情况,比较两种方法的敏感性与特异性。结果焦磷酸测序与PCR产物直接测序均能准确的检测出优势病毒株(占总群>90%),焦磷酸测序中rt180M所占比例在90%～50%时,PCR产物直接测序法检出率下降至76.92%及50.00%;焦磷酸测序样本中rt180M所占比例为50%～10%,PCR产物直接测序法对耐药基因的检出率降至15.38%～10.00%;准种(占总群<10%)焦磷酸测序可以测出,但PCR产物直接测序法无法检测出。结论焦磷酸测序的方法监测乙型肝炎病毒变异同PCR产物直接测序法相比,有更好的灵敏性,在抗病毒治疗过程中能够检测HBV准种及种群漂移,对于研究抗病毒疗效及耐药预测具有重要意义。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 焦磷酸测序 pcr产物直接测序
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成人Wilson病一家系成员P型铜转运三磷酸腺苷酶基因突变热区的检测和分析
6
作者 朱永豹 黄元成 +1 位作者 郭威 陈韬 《临床内科杂志》 CAS 2012年第1期52-54,共3页
目的通过检测中国人Wilson病（WD）P型铜转运三磷酸腺苷酶（ATtrTB）基因突变热区，对成人WD一家系成员进行早期基因诊断和突变特征分析。方法提取该家系成员外周血基因组DNA，采用聚合酶链反应扩增ATP7B基因第8、12、13号外显子，并对... 目的通过检测中国人Wilson病（WD）P型铜转运三磷酸腺苷酶（ATtrTB）基因突变热区，对成人WD一家系成员进行早期基因诊断和突变特征分析。方法提取该家系成员外周血基因组DNA，采用聚合酶链反应扩增ATP7B基因第8、12、13号外显子，并对扩增产物进行直接双向测序，然后应用在线BLAST软件分析。结果Ⅰ1、Ⅰ2（先证者）、Ⅲ和112第8号外显子存在Arg778Leu（2333G〉T）错义杂合突变，且均伴有Leu770Leu（2310C〉G）同义杂合突变；Ⅰ1、Ⅰ2、Ⅰ3和Ⅲ第12号外显子存在Lys952Arg（2855A〉G）错义杂合突变；所有受检者第13号外显子均未存在突变。结论对有先证者的Wilson病家系成员应进行ATP7B基因第8、12、13号外显子检测，有助于早期发现症状前患者和携带者。 展开更多
关键词 WILSON病 P型铜转运三磷酸腺苷酶基因 pcr—DNA直接测序 基因突变 基因诊断
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云南玉溪葡萄糖-6-磷酸脱氧酶缺乏症基因突变研究 被引量：4
7
作者 潘宝龙 田兴亚 +2 位作者 张秀琴 黄尤光 李树德 《实用医学杂志》 CAS 2007年第21期3314-3317,共4页
目的:调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率,分析鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及特征,探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有效方法。方法:NBT纸片法定性筛查玉溪当地居民450人,NBT定量酶活性,PCR-ARMS法检测中国人中最常见的三种突变,作P... 目的:调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率,分析鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及特征,探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有效方法。方法:NBT纸片法定性筛查玉溪当地居民450人,NBT定量酶活性,PCR-ARMS法检测中国人中最常见的三种突变,作PCR-SSCP分析,最后用DNA测序分析和证实。结果:(1)450例当地居民筛查发现G6PD缺乏症患者48例(男31例,女17例)。(2)PCR-ARMS发现G1388A21例(43.75%)、G1376T4例(8.33%),未见A95G。(3)PCR-SSCP发现27例异常,PCR-DNA测序结果与PCR-ARMS结果吻合。2份未知突变样本测序分析证实为C1311T。(4)测序发现复合型突变:1例G1376T/IVS-11T93C,1例G1376T/C1311T和1例G1388A/IVS-11T93C。结论:(1)云南玉溪G6PD缺乏症发病率为10.67%,男性13.78%,女性7.56%;男、女性别比例1.82。(2)云南玉溪G6PD缺乏症基因突变以Gl388A突变最常见,其次是G1376T突变,两种突变共占52.08%,未发现A95G突变。(3)研究云南玉溪G6PD缺乏症基因突变型对指导优生、优育,预防该病的遗传传播,提高我省各地州人口素质具有一定的社会意义。对开展G6PD缺乏症的基因诊断具有一定的应用价值和指导意义。 展开更多
关键词 基因 突变 G6PD缺乏症pcr-ARMS pcr-SSCP pcr-DNA测序
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庚型肝炎病毒PCR产物直接序列测定方法的建立及应用 被引量：2
8
作者 凌斌华 庄辉 +3 位作者 汪兴太 李奎 崔怡辉 朱永红 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期137-138,共2页
以ＰＣＲ产物为测序模板，γ３２ＰＡＴＰ标记的ＰＣＲ扩增引物为测序引物，用ＴａｑＤＮＡ聚合酶为测序酶，建立了庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ｃＤＮＡ序列分析方法。应用本法测定１份ＰＣＲ阳性产物的ＨＧＶｃＤＮＡ序列，图谱呈清晰... 以ＰＣＲ产物为测序模板，γ３２ＰＡＴＰ标记的ＰＣＲ扩增引物为测序引物，用ＴａｑＤＮＡ聚合酶为测序酶，建立了庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ｃＤＮＡ序列分析方法。应用本法测定１份ＰＣＲ阳性产物的ＨＧＶｃＤＮＡ序列，图谱呈清晰的序列梯，其序列与ＧＢＶＣ（Ｕ３６３８０）和ＨＧＶ（Ｕ４４４０２）的相应片段序列比较，同源性分别为８５６５％（１９１／２２３）和８５２％（１９０／２２３）。与用荧光法测定的另一株ＨＧＶ序列有高度一致性。对同一样品两端测序，重叠部分序列完全一致。表明ＰＣＲ产物直接测序法可用于ＨＧＶ核酸序列分析。 展开更多
关键词 庚型肝炎病毒 pcr 序列测定 直接测序法
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甲基丙烯酸环氧丙酯诱导的转化成纤维细胞中P^（53）基因改变 被引量：2
9
作者 谭明家 许建宁 +3 位作者 李忠生 谢大英 李玉瑞 方福德 《基础医学与临床》 CSCD 1996年第4期288-292,共5页
本研究选用人胚肺成纤维细胞的体外转化实验，建立起细胞转化模型。结果表明甲基丙烯酸环氧丙酯可诱导其表型改变，从转化集落分离的细胞经ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测出Ｐ￣（５３）蛋白增高。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析揭示抑癌基因Ｐ￣（５... 本研究选用人胚肺成纤维细胞的体外转化实验，建立起细胞转化模型。结果表明甲基丙烯酸环氧丙酯可诱导其表型改变，从转化集落分离的细胞经ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测出Ｐ￣（５３）蛋白增高。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析揭示抑癌基因Ｐ￣（５３）第７外显子发生突变，从ＰＣＲ双链直接测序的结果发现第７外显子的２４７位ＡＡＣ突变为ＡＧＣ，即由Ａｓｎ变为Ｓｅｒ。因此，Ｐ￣（５３）基因的改变可能是甲基丙烯酸环氧丙酯诱导人胚肺成纤维细胞转化的机制之一。 展开更多
关键词 化学致癌物 GMA 丙酯 P53蛋白 成纤维细胞
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卵巢癌p53基因第7、8外显子突变的研究
10
作者 姚桂梅 康志海 +3 位作者 孟祥文 张贵寅 李璞 王晶 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期329-331,共3页
为了解ｐ５３基因与卵巢癌的关系，采用ＰＣＲ产物－直接测序技术，初步分析了１５例卵巢恶性肿瘤ｐ５３基因第７、８外显子的突变。结果有２例第７外显子的２５２位密码子发生改变。１例为缺失第３位碱基Ｃ导致移码突变，另一例为第２... 为了解ｐ５３基因与卵巢癌的关系，采用ＰＣＲ产物－直接测序技术，初步分析了１５例卵巢恶性肿瘤ｐ５３基因第７、８外显子的突变。结果有２例第７外显子的２５２位密码子发生改变。１例为缺失第３位碱基Ｃ导致移码突变，另一例为第２位碱基Ｔ→Ａ颠换，导致错义突变。提示２５２位密码子可能在中国人卵巢癌中突变率较高，且易发于浆液性囊腺癌。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 P53基因 基因突变 pcr
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